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    半自動(dòng)血液推片機(jī)在高職專業(yè)教學(xué)中的使用及效果

    2014-01-02 08:43:14張士化馬少華王東鋼徐堅(jiān)強(qiáng)汪文娟
    檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2014年9期
    關(guān)鍵詞:涂片手工染色

    張士化,馬少華,王東鋼,徐堅(jiān)強(qiáng),汪文娟,陳 菁

    (1.寧波衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)教研室,浙江寧波 315104;2.浙江工商職業(yè)技術(shù)學(xué)院,浙江寧波 315012;3.寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院,浙江寧波 315040)

    一張標(biāo)準(zhǔn)的血液涂片(簡稱血涂片)是滿足血細(xì)胞準(zhǔn)確分析的首要條件。在高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)、衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫專業(yè)(簡稱檢驗(yàn)、檢疫專業(yè))的《臨床檢驗(yàn)技術(shù)》、《血液檢驗(yàn)技術(shù)》專業(yè)課程教學(xué)中,很多實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目均要用到學(xué)生自己的血涂片,如白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、手工網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色等。然而在有限的課堂時(shí)間內(nèi),學(xué)生利用手工推片法制備的血涂片質(zhì)量卻不盡如人意,見圖1,標(biāo)準(zhǔn)血涂片[1]制作成功率不高,直接影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)實(shí)訓(xùn)課中,在較短、厚的血膜頭部,紅細(xì)胞過于堆積,學(xué)生經(jīng)常觀察到較紅細(xì)胞小的粒細(xì)胞,這類細(xì)胞的胞質(zhì)少且顆粒特征不易辨識(shí),細(xì)胞核聚集、成團(tuán),常被學(xué)生誤認(rèn)。

    為了消除制片時(shí)人為因素的干擾,提高血涂片的質(zhì)量穩(wěn)定性和規(guī)范性,并在有限的課堂時(shí)間內(nèi)輔助制片有困難的高職檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)學(xué)生制做出合格的血涂片,更好地學(xué)習(xí)、掌握細(xì)胞形態(tài)學(xué)知識(shí)和識(shí)別技能,我們成功研制了新型半自動(dòng)血液推片機(jī)(簡稱推片機(jī)),并研究了其在高職專業(yè)教學(xué)的應(yīng)用及效果。

    圖1 高職檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)實(shí)訓(xùn)課中利用手工法制備的血涂片

    材料和方法

    一、研究對(duì)象

    寧波衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)臨床檢驗(yàn)方向?qū)W生76名(實(shí)際到課人數(shù)為74名),衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫專業(yè)學(xué)生82名,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教師和實(shí)驗(yàn)技師各1名,同時(shí)有來自三級(jí)醫(yī)院的臨床血液學(xué)檢驗(yàn)副主任技師及檢驗(yàn)科主任各1名。

    二、方法

    1.推片機(jī)的研發(fā)和制造 以血涂片制作的手工推片法為設(shè)計(jì)基礎(chǔ),在設(shè)計(jì)過程中注重推片原理創(chuàng)新,重點(diǎn)解決推片角度、力度以及血膜長度的控制技術(shù),通過本課題組成員多次探討并最終定下設(shè)計(jì)方案,然后利用 AutoCAD(Computer Aided Design)軟件設(shè)計(jì)3D仿真模型,再聯(lián)系機(jī)械加工公司進(jìn)行制造及后續(xù)性能調(diào)試、改進(jìn)。

    2.推片機(jī)的使用 在血涂片制備、染色實(shí)訓(xùn)課中,學(xué)生兩兩搭配采集末梢血并制備血涂片(學(xué)生可推制3~5張血涂片,并選取其中較好的一張上交),同時(shí)讓部分學(xué)生用半自動(dòng)血液推片機(jī)制備一張自己的血涂片。按照標(biāo)準(zhǔn)血涂片應(yīng)具備的條件,由行業(yè)專家和教師共同評(píng)價(jià)2種方法制備的血涂片質(zhì)量(以合格和不合格作為評(píng)價(jià)結(jié)果)。

    此外,從檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)各隨機(jī)選擇30名學(xué)生(共60名),然后隨機(jī)分成3組(每組20名),并通過抽簽決定手工法制片組、手工法聯(lián)合推片機(jī)法制片組及推片機(jī)法制片組,然后分別進(jìn)行血涂片制備、染色實(shí)訓(xùn),記錄各組學(xué)生完成末梢采血、制片、染色及血片觀察所需時(shí)間,并比較各組的優(yōu)缺點(diǎn)。

    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行 χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、推片機(jī)結(jié)構(gòu)、使用方法說明及制作的血涂片效果

    研制出的推片機(jī)結(jié)構(gòu)見圖2。儀器的簡要使用方法如下:(1)插上電源,設(shè)置儀器參數(shù);(2)安放干燥潔凈推玻片;(3)安放干燥潔凈載玻片,并在距玻片右側(cè)1.5 cm處滴加外周血或抗凝靜脈血1滴(以6~8μL為宜);(4)按開始鍵,進(jìn)行推片(推片過程見圖3);(5)迅速取下載玻片并風(fēng)干,進(jìn)行染色。經(jīng)測試性能良好,能夠制作出滿意的血涂片,見圖4,鏡下也證實(shí)血膜近尾部血細(xì)胞分布良好、形態(tài)典型,與手工法制備的標(biāo)準(zhǔn)血膜鏡下視野無異,見圖5,適合涂片鏡檢或人工分類。

    二、推片機(jī)在學(xué)校專業(yè)教學(xué)中的使用效果

    1.制片方法與血涂片合格率比較 在血涂片制備、染色實(shí)訓(xùn)課中,不論是檢驗(yàn)專業(yè)還是檢疫專業(yè),學(xué)生利用手工推片法制備的合格血涂片數(shù)量較少(比例分別是52.00%和39.02%),而利用推片機(jī)法制作出的合格血涂片數(shù)顯著增多(比例達(dá)96.67%),兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01);同時(shí),與檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生制作的血涂片合格率相比,檢疫專業(yè)無顯著性變化(P>0.05)。見表1。

    圖2 課題組研制的推片機(jī)

    圖3 推片過程

    圖4 推片機(jī)制備出的滿意血涂片

    圖5 推片機(jī)法與手工法制備的血涂片鏡檢效果對(duì)比

    表1 血涂片制備、染色項(xiàng)目中制片方法與血涂片合格率比較

    2.推片機(jī)在血涂片制備、染色實(shí)訓(xùn)課中的使用效果 在學(xué)校平時(shí)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中,雖有教師事先示教手工推片要領(lǐng),但學(xué)生(一個(gè)班級(jí)通常為50名左右,分6組)因手法不嫻熟,很難在規(guī)定時(shí)間內(nèi)制備好1~2張合格血涂片,很多學(xué)生常是在教師提醒時(shí)間后才集體停止推片操作,并非按順序制備好血涂片后便去染色,因而就造成了在水槽邊染色時(shí)常是三五成群,染色時(shí)難免會(huì)相互干擾。在本次研究有限的課堂時(shí)間(90 min)內(nèi),手工法聯(lián)合推片機(jī)法制片組既可訓(xùn)練學(xué)生手工制片技能,也可為那些沒有得到合格血涂片的學(xué)生制作滿意的標(biāo)本;同時(shí),學(xué)生染色時(shí)相互干擾的程度下降。此外,該組學(xué)生完成末梢采血、制片的時(shí)間相對(duì)手工法制片組減少,而觀察血片的時(shí)間增加了11.11%。相比于手工法制片及手工法聯(lián)合推片機(jī)法制片組,推片機(jī)法制片組學(xué)生雖完成末梢采血、制片的時(shí)間最短(每組同學(xué)約需2 min),血片觀察時(shí)間最長(達(dá)50 min以上),同時(shí)因該組學(xué)生是按順序先制片、再染色進(jìn)行操作,也較好地消除了多名學(xué)生同時(shí)染色時(shí)的相互干擾,但學(xué)生也失去了練習(xí)手工制片技能的機(jī)會(huì)。見表2。

    表2 推片機(jī)在血涂片制備、染色實(shí)訓(xùn)課中的使用效果

    討 論

    對(duì)于大多數(shù)高職檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)的學(xué)生而言,外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是一大難點(diǎn),畢業(yè)后往往仍不能熟練掌握,究其原因,一是細(xì)胞的形態(tài)往往會(huì)受到自身發(fā)育階段或自身病理改變的影響而發(fā)生改變,從而增加了辨認(rèn)的難度[2];二是學(xué)生在校階段沒有經(jīng)過血細(xì)胞形態(tài)學(xué)識(shí)別技能的系統(tǒng)培訓(xùn)[3];三是在有限的課堂時(shí)間內(nèi)多數(shù)學(xué)生很難手工制作出一張標(biāo)準(zhǔn)的血涂片[4],加之學(xué)生多,慌亂之中對(duì)染色效果影響也較大。這種制作不良、染色偏酸或偏堿的血涂片上的細(xì)胞形態(tài)與教師所示教的差別較大,這將導(dǎo)致學(xué)生不能較好地掌握正常血細(xì)胞形態(tài)特征,同時(shí)學(xué)生在獨(dú)立觀察、判斷的過程中往往會(huì)困難重重,從而導(dǎo)致最終的細(xì)胞分類結(jié)果錯(cuò)誤。

    血涂片制作除了手工推片法外,還可通過儀器法來實(shí)現(xiàn)。在國外,半自動(dòng)制片設(shè)備已廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)實(shí)踐中并發(fā)揮了非常好的效果,如J.P.Gilbert公司推出的 HEMAPREP?(MINIPREP?)自動(dòng)化血液涂片制作儀[5],而在國內(nèi)的應(yīng)用則鮮有報(bào)道。作為同類儀器,從本課題組研制的推片機(jī)應(yīng)用于學(xué)校檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)實(shí)訓(xùn)課中所產(chǎn)生的效果來看,制作出合格血涂片比例顯著高于手工法。在制片過程中,推片機(jī)法克服了人工用力不均的不利因素,并較好地消除手工血涂片制作重復(fù)性差及細(xì)胞破碎的問題,提升了血涂片制作的滿意度,也必定會(huì)提高血涂片鏡檢尤其是白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外,在實(shí)訓(xùn)課有限的時(shí)間內(nèi),若利用手工法聯(lián)合推片機(jī)法制片,不僅可以訓(xùn)練學(xué)生手工制片的技能,而且可為那些沒有得到合格血涂片的學(xué)生制作滿意的標(biāo)本,這樣就可以增加這些學(xué)生鏡下觀察、學(xué)習(xí)細(xì)胞形態(tài)特征的時(shí)間,從而使教學(xué)效果進(jìn)一步提高。然而,必須指出,手工推片對(duì)于檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)高職生而言是必須熟練掌握的基本功,切不可因?yàn)橛辛酥破O(shè)備而減少手工推片技能訓(xùn)練,制片設(shè)備只能作為輔助教學(xué)設(shè)備而使用,切不可本末倒置。

    此外,與半自動(dòng)制片設(shè)備相比,在臨床檢驗(yàn)中運(yùn)用更為普遍的則是全自動(dòng)涂片儀器。目前,國內(nèi)市場上的該類儀器均是進(jìn)口的,如貝克曼庫爾特公司開發(fā)的LH750推片機(jī)和西森美康公司生產(chǎn)的Wedge Smear推片系統(tǒng)以及西門子公司推出的ADVIA Autoslide全自動(dòng)制片/染片機(jī)和ABX公司的全自動(dòng)推片染片系統(tǒng)[6],其研制均比較復(fù)雜,涉及多學(xué)科的知識(shí),一般都是在血細(xì)胞分析流水線中使用。由于價(jià)格昂貴等原因,這些自動(dòng)化涂片儀器的用戶主要是三級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)科。然而,在血涂片復(fù)檢率較低的大背景下[7-9],國內(nèi)不少三級(jí)醫(yī)院即便有上述全自動(dòng)涂片儀器也很少常規(guī)使用。確需血涂片復(fù)檢時(shí),檢驗(yàn)人員即利用手工法制備血涂片,而在檢查過程中各環(huán)節(jié)質(zhì)量控制常易被忽視,從而影響血細(xì)胞形態(tài)分析的準(zhǔn)確性[10]。對(duì)于一級(jí)醫(yī)院,其主要業(yè)務(wù)是從事三大常規(guī)檢查和部分常規(guī)生化項(xiàng)目,很少進(jìn)行血涂片復(fù)檢,且有調(diào)查顯示一級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)人員的血細(xì)胞形態(tài)學(xué)識(shí)別水平較低[11]。一級(jí)醫(yī)院在無全自動(dòng)推片儀器的情況下,同樣存在手工制片質(zhì)量良莠不齊的問題。因此,要想提高檢驗(yàn)人員的形態(tài)學(xué)識(shí)別水平,需從提高血涂片制作質(zhì)量等血細(xì)胞檢驗(yàn)的分析前因素抓起[12]。顯然,從經(jīng)濟(jì)和實(shí)用角度來講,本課題組研制的推片機(jī)可在一級(jí)及較高等級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的臨床檢驗(yàn)工作中推廣應(yīng)用。

    綜上所述,在學(xué)校專業(yè)教學(xué)中,該儀器的使用效果滿意,可作為輔助教學(xué)設(shè)備使用。此外,其在各級(jí)醫(yī)院的臨床檢驗(yàn)工作中也有潛在的應(yīng)用價(jià)值,尚需進(jìn)一步的研究。

    [1]劉孝武,趙會(huì)芹,賀信祥,等.制作標(biāo)準(zhǔn)化血液涂片建議與研究[J].中國血液流變學(xué)雜志,2007,17(1):130-131.

    [2]李 英,李君安,劉 文,等.《臨床血液學(xué)與檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)的幾點(diǎn)體會(huì)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(8):1016.

    [3]王霄霞.外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:3-8.

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