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    蒙藥肉蔻-5味丸對(duì)抑郁模型大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

    2022-08-15 03:57:42白龍?zhí)?/span>呼日樂巴跟烏日汗
    中國(guó)民族民間醫(yī)藥 2022年14期
    關(guān)鍵詞:味丸蒙藥神經(jīng)遞質(zhì)

    白龍?zhí)?呼日樂巴跟 烏 蘭* 宏 梅 烏日汗

    1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050;2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué),內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110

    抑郁癥(depression)是以持續(xù)的興趣減退、情感低落為核心癥狀的精神類疾病之一。抑郁癥病程緩慢,發(fā)作至少持續(xù)2周,病程遷延,反復(fù)發(fā)作,致殘率高[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)首發(fā)患者85%左右會(huì)在未來10年內(nèi)反復(fù)發(fā)作,終身患病率約為20%,約15%~25%患者最終轉(zhuǎn)變?yōu)殡y治性抑郁癥。因其悲觀厭世,嚴(yán)重者有自殺觀念和行為,有10%~15%的抑郁癥患者最終死于自殺[2]。隨著經(jīng)濟(jì)文化的快速發(fā)展和競(jìng)爭(zhēng)壓力的急劇增加,抑郁癥的患病率呈逐年上升。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),預(yù)計(jì)到2030年抑郁癥可能成為嚴(yán)重威脅人類健康的第二大疾患,增加社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的第一大疾病。抑郁癥不僅影響著患者的日常生活,且對(duì)家庭和社會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。因此研究其發(fā)病機(jī)制、有效預(yù)防和積極治療已成為廣大科研工作者和醫(yī)護(hù)人員面臨的重大課題。

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為抑郁癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,為多種因素導(dǎo)致綜合性疾病。目前臨床上常用的抗抑郁西藥雖然有一定的臨床療效,但也有不良反應(yīng)多、療效欠佳和耐藥等局限性[4]。近年來越來越多的研究顯示,氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸(glutamate, Glu)與γ-氨基丁(gammaaminobutyric acid,GABA)等在抑郁、焦慮、失眠等精神類疾病發(fā)病機(jī)制及治療中的作用[5],越來越引起人們的關(guān)注。

    蒙醫(yī)學(xué)對(duì)抑郁癥有獨(dú)特的認(rèn)識(shí),多年的臨床實(shí)踐表明用蒙藥治療抑郁癥療效顯著。根據(jù)對(duì)抑郁癥發(fā)病誘因、臨床癥狀和病情轉(zhuǎn)歸的認(rèn)識(shí),抑郁癥是蒙醫(yī)赫依、巴達(dá)干偏旺導(dǎo)致三根平衡失調(diào),影響心、白脈、腦而引起的一系列癥狀。在蒙醫(yī)學(xué)抑郁癥歸屬于“心思病”范疇的疾病[6]。蒙醫(yī)治療抑郁癥以調(diào)節(jié)三根,鎮(zhèn)心臟赫依,寧心、安神為原則。蒙藥肉蔻-5味丸是具有鎮(zhèn)赫依、寧心、安神等作用的臨床常用的復(fù)方制劑[7]。研究表明,肉蔻-5味丸對(duì)CUMS大鼠5-HT、DA、EA等含量具有一定調(diào)節(jié)作用[8]。但尚無研究肉蔻-5味丸對(duì)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。

    本研究為進(jìn)一步了解氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁癥中的作用和探索肉蔻-5味丸治療抑郁癥的作用機(jī)制,觀察其抑郁模型大鼠海馬/血清中Glu、GABA的影響,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 儀器與材料

    1.1 動(dòng)物 SD雄性健康大鼠60只,體重180±20 g。購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證號(hào):SCXK(京):2016-0002。

    1.2 材料 肉蔻-5味丸(批號(hào):M13010062,內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院制劑中心),氟西丁(國(guó)藥準(zhǔn)字:J20160029,禮來制藥有限公司),谷氨酸ELASA試劑盒(批號(hào):20911202,南京建成)、γ-氨基丁酸ELASA試劑盒(批號(hào):L91292625,南京建成),水合氯醛(批號(hào):RH127070、上海羅恩);

    1.3 儀器 自制敞箱實(shí)驗(yàn)設(shè)備:制作正方形立柱箱一個(gè),長(zhǎng)×寬×高為80 cm×80 cm×80 cm,底面為一個(gè)正方形,有9個(gè)小方格組成,箱體四壁均為黑色。EPOCH型酶標(biāo)儀(BioTeK廠家);BCD-186型超低溫冰箱;TGL-16C型臺(tái)式離心機(jī);AJC-0501-P純水儀;TL-420D水浴鍋;PL-203型號(hào)電子天秤。

    2 方法

    2.1 動(dòng)物分組 將60只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后參考體重及糖水消耗量隨機(jī)分為6組,分別為正常組,模型組,氟西丁對(duì)照組,肉蔻-5味丸高、中、低劑量組,每組為10只。

    2.2 給藥方法與劑量 造模第1天開始對(duì)各組大鼠灌胃給藥,除正常組和模型組給予等體積的蒸餾水外,肉蔻-5味丸高、中、低劑量組分別給予肉蔻-5味丸1.6 g/kg、0.8 g/kg、0.4 g/kg,對(duì)照組給予氟西汀3.6 mg/kg。按1.0 mL/100 g體積灌胃,連續(xù)28 d,每日同一時(shí)間給藥。

    2.3 造模 由慢性輕度不可預(yù)知溫和刺激(CUMS)配合孤養(yǎng)法復(fù)制抑郁動(dòng)物模型。除了正常組外,其余組大鼠均單籠孤養(yǎng),并給予連續(xù)28 d的不同刺激(包括:24 h禁食水、黑白顛倒12 h、4 ℃冰水游泳4 min、40 ℃高溫環(huán)境6 min、平行搖擺、夾尾1 min、潮濕墊料、傾斜鼠籠45°等);每天隨機(jī)刺激1次,同樣刺激不連續(xù)使用,每種刺激28 d內(nèi)不超過使用3次。

    2.4 評(píng)價(jià)模型復(fù)制

    2.4.1 體重變化 各組大鼠實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)14 d和28 d同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量每個(gè)大鼠體重。抑郁模型大鼠食欲減退,體重增長(zhǎng)緩慢。因此,根據(jù)體重增長(zhǎng)快慢來評(píng)價(jià)抑郁模型成功與否的標(biāo)準(zhǔn)。

    2.4.2 1%蔗糖水消耗量 各組大鼠實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)14 d和28 d,禁水24 h后,每只大鼠給予1%蔗糖水100 mL,計(jì)算大鼠1 h內(nèi)飲用蔗糖消耗量。糖水消耗量多說明大鼠快感好,該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠快感反應(yīng)。

    2.4.3 Open-field自主活動(dòng) 采用自制箱體,規(guī)格為80 cm(長(zhǎng))×80 cm(寬)×80 cm(高),箱內(nèi)壁為黑色,底面劃分為大小相等的16個(gè)等邊方格,記錄大鼠在3 min內(nèi)水平和垂直活動(dòng)得分(以大鼠前兩只腿穿越敞箱底面格數(shù)為水平活動(dòng)評(píng)分,以前兩只腿直立次數(shù)為垂直活動(dòng)評(píng)分)。水平活動(dòng)得分反應(yīng)大鼠自主活動(dòng)能力,垂直活動(dòng)得分反應(yīng)大鼠好奇及探索能力。

    2.5 標(biāo)本制備與檢測(cè) 連續(xù)28 d刺激,同時(shí)藥物干預(yù),第29天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用10%水合氯醛麻醉大鼠(劑量為0.3 mL/100 g), 取腹主動(dòng)脈血后,3000 r/min速度離心后取血清快速冷凍。采用ELISA技術(shù),按照試劑盒說明測(cè)試海馬組織/血清中Glu和GABA含量。

    3 結(jié)果

    3.1 體重變化的比較 與正常組比較,模型組大鼠體重增長(zhǎng)在第2、4周時(shí)較慢(P<0.05,P<0.01);與模型組比較,西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠體重增長(zhǎng)較快(P<0.05,P<0.01),低劑量組的體重增長(zhǎng)較慢,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 各組大鼠體重增長(zhǎng)情況

    3.2 1%蔗糖水消耗量變化情況比較 與正常組比較,模型組大鼠1%蔗糖水消耗量在第2、4周時(shí)較少(P<0.05,P<0.01);與模型組比較,西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠1%蔗糖水消耗量顯著多(P<0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠1%蔗糖水消耗量變化

    3.3 Open-Field自主活動(dòng)情況比較 與正常組比較,模型組大鼠水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)得分較低(P<0.01);與模型組比較,西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中劑量組水平運(yùn)動(dòng)得分較高(P<0.01),肉豆蔻-5味丸高劑量組水平和垂直運(yùn)動(dòng)得分較高(P<0.05)。見表3。

    表3 各組大鼠刺激結(jié)束后Open-Field行為的影響 (次,

    3.4 肉蔻-5味丸對(duì)大鼠Glu、GABA含量的影響 與正常組比較,模型組大鼠海馬/血清里Glu含量較高(P<0.01),GABA含量較低(P<0.05);與模型組比較,蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠海馬和血清里Glu含量較低(P<0.01),GABA含量較高(P<0.05),肉豆蔻-5味丸低劑量組無顯著差異(P>0.05)。見表4。

    表4 肉蔻-5味丸對(duì)各組大鼠Glu及GABA含量的影響

    4 討論

    抑郁癥是一種情感障礙性疾病,其發(fā)病與遺傳、社會(huì)環(huán)境因素、心理、生物化學(xué)等眾多因素有關(guān)。社會(huì)環(huán)境和心理因素可能是誘發(fā)抑郁癥的主要原因之一。根據(jù)其發(fā)病誘因,現(xiàn)在已有很多種抑郁動(dòng)物模型應(yīng)用于研究抑郁癥的生物學(xué)機(jī)制。其中慢性輕度不可預(yù)知溫和刺激(CUMS)高度模擬人類抑郁癥的誘發(fā)因素。CUMS是抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和抗抑郁作用機(jī)理研究中最廣泛實(shí)用的動(dòng)物模型之一[9]。實(shí)驗(yàn)采用CUMS配合孤養(yǎng)造模,觀察體重變化、1%蔗糖水消耗量和Open-Field敞箱實(shí)驗(yàn)垂直及平行得分情況分別反應(yīng)抑郁模型動(dòng)物體重減輕,快感缺乏和自主活動(dòng)及探索能力等行為學(xué)方法評(píng)價(jià)CUMS大鼠模型成功與否。結(jié)果顯示,應(yīng)激刺激前,各組間大鼠體重、糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活動(dòng)均無顯著性差異。應(yīng)激刺激后,與正常組比較,模型組體重增長(zhǎng)緩慢,糖水消耗量、敞箱實(shí)驗(yàn)水平活動(dòng)格數(shù)和垂直活動(dòng)次數(shù)均明顯減少,說明抑郁模型復(fù)制成功。與模型組比較,應(yīng)激刺激后,氟西汀組和肉蔻-5味丸組,體重增長(zhǎng)明顯,糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活動(dòng)均有所改善,說明肉蔻-5味丸具有抗抑郁作用,與以往的研究結(jié)果一致。

    隨著抑郁癥發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)其不僅與遺傳、社會(huì)心理因素有關(guān),并且與大腦神經(jīng)生物化學(xué)密切相關(guān)。根據(jù)其發(fā)病的神經(jīng)生物化學(xué)基礎(chǔ),提出了很多科學(xué)假說,其中“單胺類神經(jīng)遞質(zhì)”是在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中最早提出的且相對(duì)主導(dǎo)地位的科學(xué)假說[10]。臨床上常用的抗抑郁藥物大部分都基于該假說而研發(fā)的,這些藥物僅對(duì)50%~60%的患者有效。其次,服用這些藥雖然體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量立即上升,但其抗抑郁作用有臨床滯后現(xiàn)象[11],說明抑郁癥的發(fā)病機(jī)制不僅與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平有關(guān),可能其他類神經(jīng)遞質(zhì)也參與了抑郁癥發(fā)病機(jī)制。文獻(xiàn)[12]報(bào)道,越來越多研究證明,氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)也參與到抑郁癥的發(fā)病機(jī)理中,氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)Glu是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在的,人體內(nèi)最主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),對(duì)維持神經(jīng)元的興奮與正常活動(dòng)具有重要意義,其功能為參與感覺傳遞、運(yùn)動(dòng)控制、高級(jí)皮層功能等過程。GABA屬于抑制性神經(jīng)遞質(zhì),其合成主要來自于Glu代謝,谷氨酸脫羧酶是GABA的重要生物合成酶。GABA具有抗焦慮、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌作用[13]。研究[14]顯示,抑郁癥患者血和腦組織內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu含量與正常對(duì)照組比較明顯升高,而抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA含量下降。Glu的上升水平及GABA 的下降水平與抑郁程度呈正相關(guān),且經(jīng)藥物治療干預(yù)后、Glu水平下降,GABA含量增加[15 ]。說明抑郁癥發(fā)作與Glu和GABA等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與正常組比較,抑郁癥模型大鼠海馬及血清中Glu含量比正常組明顯高,GABA含量比正常組顯著降低,這結(jié)果符合以往的研究結(jié)果,說明氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)異常可能是抑郁癥發(fā)病機(jī)制之一。與模型組比較,肉蔻-5味丸高、中劑量組海馬/血清Glu含量降低,肉蔻-5味丸高劑量組海馬/血清GABA含量增多(P<0.05)。說明:肉蔻-5味丸中、高劑量具有明顯的降低Glu含量,不同程度提高GABA含量作用。肉蔻-5味丸調(diào)節(jié)抑郁模型大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量可能是其抗抑郁作用機(jī)理之一。與模型組比較,西藥氟西丁組Glu和GABA含量無顯著性差異(P>0.05)。氟西汀抗抑郁作用可能與氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)無關(guān)。

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