豬圓環(huán)病毒2型的診斷與防控技術(shù)

何啟蓋

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430070）

一、圓環(huán)病毒感染的致病原因

（一）單獨(dú)感染的致病性 PCV2感染后主要引起免疫抑制。這可以從幾個(gè)方面來概括。（1）病毒能夠感染機(jī)體樹突狀細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞（抗原遞呈細(xì)胞），在免疫反應(yīng)中起到“搬運(yùn)工”的作用，雖然PCV2不能在其中復(fù)制，但是我們可以相信，感染后其抗原遞呈功能下降，進(jìn)而影響免疫細(xì)胞獲得抗原刺激。（2）使細(xì)胞免疫下降，主要通過降低細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素(IL)和干擾素基因的轉(zhuǎn)錄；同時(shí)破壞T細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞免疫反應(yīng)的下降。（3）破壞B淋巴細(xì)胞，降低體液免疫反應(yīng)，影響抗體產(chǎn)生，這是一些豬場(chǎng)免疫豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗或豬瘟活疫苗后，免疫效果不好的重要原因。

豬圓環(huán)病毒病包含幾種不同的臨床表現(xiàn)，如斷奶衰竭綜合癥、先天性震顫、母豬繁殖障礙等，這應(yīng)該是圓環(huán)病毒感染不同組織所致。究其原因，是否與病毒對(duì)不同組織的嗜性有關(guān)，還是與不同生長(zhǎng)階段中與宿主相互作用的結(jié)果。皮炎與腎病綜合癥從本質(zhì)上是一種過敏反應(yīng)抑或是抗原抗體復(fù)合物沉積后，引起的炎癥反應(yīng)。

我們?cè)谂R床上發(fā)現(xiàn)，豬圓環(huán)病毒2型引起的病理變化主要是水腫，如間質(zhì)性肺炎、淋巴結(jié)水腫、腸系膜水腫、心臟冠狀溝的膠凍樣水腫等，因此，炎癥過程中體液或組織液的滲出，是宿主感染本病毒后的重要發(fā)病機(jī)理和發(fā)生發(fā)展規(guī)律。在對(duì)癥治療上，利用利尿脫水藥物，促進(jìn)水腫液的回流，有助于縮短疾病康復(fù)所需的時(shí)間。

（二）混合感染的致病性 免疫抑制疾病的本質(zhì)是為其他病原的繼發(fā)感染創(chuàng)造條件，這也是近幾年來我國(guó)豬病癥狀不典型或復(fù)雜性增加的原因所在。當(dāng)然，免疫抑制并非全部由圓環(huán)病毒引起，但卻是一個(gè)重要因素。

1.降低豬瘟疫苗的免疫效力。臺(tái)灣學(xué)者先用l05.3TCID50豬圓環(huán)病毒2型同時(shí)通過鼻內(nèi)接種和肌肉接種感染剖腹產(chǎn)和不吃母豬乳汁的仔豬，12 d后免疫豬瘟疫苗，27 d后攻毒，45 d后剖殺試驗(yàn)豬。發(fā)現(xiàn)PCV2感染豬攻毒后出現(xiàn)發(fā)熱、病毒血癥并從唾液和糞便中排出豬瘟病毒，豬瘟中和抗體水平、IgM以及一些淋巴細(xì)胞亞類在數(shù)量上明顯低于免疫前未感染PCV2的豬。體外實(shí)驗(yàn)中PCV2感染外周血單核細(xì)胞后，豬瘟特異性淋巴細(xì)胞增生反應(yīng)降低，而這種抑制反應(yīng)在活病毒還是紫外線滅活的豬圓環(huán)病毒處理的外周血細(xì)胞中，結(jié)果是一致的，提示圓環(huán)病毒粒子的結(jié)構(gòu)蛋白（Cap蛋白）是引起這種效應(yīng)的原因。這些結(jié)果表明，豬瘟免疫前感染了豬圓環(huán)病毒，將降低豬瘟疫苗的免疫效果。

2.與豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染互相交織。研究發(fā)現(xiàn)，與未感染圓環(huán)病毒組相比，事先感染豬圓環(huán)病毒，然后免疫豬藍(lán)耳病活疫苗，隨后攻毒，其病變程度和臨床保護(hù)程度最低，該組的藍(lán)耳病疫苗抗體也最低，因此，作者認(rèn)為，我國(guó)不同豬場(chǎng)圓環(huán)病毒的感染率高低及嚴(yán)重程度不同，是造成豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗在不同豬場(chǎng)之間效果差異的原因之一。另一方面，豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染后，增加豬圓環(huán)病毒在感染豬體內(nèi)不同組織的分布更加廣泛，滴度更高。

3.影響豬偽狂犬病毒的免疫應(yīng)答。Kekarainen(2008)發(fā)現(xiàn)，PCV2通過病毒自身組分或IL-10因子等途徑調(diào)節(jié)偽狂犬病的免疫。體外實(shí)驗(yàn)表明，PCV2感染單核細(xì)胞后誘導(dǎo)IL-10分泌，進(jìn)而有效抑制外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-12；用紫外線滅活的偽狂犬病毒刺激來自偽狂犬病疫苗免疫豬的外周單核細(xì)胞，隨后用PCV2感染，這些細(xì)胞產(chǎn)生α和β干擾素的能力也被抑制。這證明圓環(huán)病毒感染影響了豬對(duì)偽狂犬病疫苗的記憶免疫應(yīng)答，這種作用只需要有PCV2核酸存在即可誘導(dǎo)，無需感染病毒。

4.增加細(xì)菌病繼發(fā)的幾率，尤其是副豬嗜血桿菌病或鏈球菌病。圓環(huán)病毒感染破壞機(jī)體巨噬細(xì)胞，降低了吞噬和清除外來病原的能力。副豬嗜血桿菌是豬上呼吸道中常在的細(xì)菌之一，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，副豬嗜血桿菌會(huì)乘虛而入。同時(shí)，我們?cè)谕瓿蓤A環(huán)病毒與副豬嗜血桿菌5型混合感染的動(dòng)物試驗(yàn)，分析了這兩種病原的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌促進(jìn)了圓環(huán)病毒2型的增殖。這就導(dǎo)致了這兩種微生物之間在動(dòng)物體內(nèi)互相協(xié)作的循環(huán)。這個(gè)結(jié)果進(jìn)一步得到驗(yàn)證，即標(biāo)準(zhǔn)的脂多糖(LPS)能促進(jìn)豬圓環(huán)病毒2型在PK-15細(xì)胞中的增殖滴度。而脂多糖是革蘭氏陰性細(xì)菌中主要結(jié)構(gòu)成分，也是革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁中的重要成分，可以推論，革蘭氏陰性菌或大量革蘭氏陽性菌的感染，由于LPS的刺激作用，豬體內(nèi)已經(jīng)感染的豬圓環(huán)病毒2型的增殖將得到促進(jìn)，增加圓環(huán)病毒病發(fā)生的可能。

二、臨床癥狀

圓環(huán)病毒病是豬圓環(huán)病毒2型感染所引起的一系列疾病的總稱，也稱為圓環(huán)病毒相關(guān)疾?。≒CVAD）。但是，不同日齡豬所發(fā)生的疾病（或臨床類型）有所不同，在臨床診斷時(shí)需加以注意。

（一）先天性震顫 仔豬出生后，全身肌肉震顫，尤其是頭部震顫，嚴(yán)重時(shí)不能正常吃乳。除此之外，無其他臨床表現(xiàn)。如果輔助病豬能夠吃到足夠的乳汁，就能夠逐漸康復(fù)，同窩母豬也無可見癥狀。腦組織也無特征性病變，僅利用免疫組化技術(shù)發(fā)現(xiàn)病毒陽性信號(hào)。

（二）斷奶仔豬衰竭綜合癥 這是目前臨床上較為常見、也是造成經(jīng)濟(jì)損失最大的的圓環(huán)病毒相關(guān)疾病，但其控制技術(shù)也較為成熟。主要發(fā)生在斷奶仔豬或保育豬。病豬主要表現(xiàn)被毛粗亂，皮膚蒼白，發(fā)熱，消瘦，呼吸困難，腹股溝淋巴結(jié)腫大等臨床表現(xiàn)。病程長(zhǎng)并可見皮膚黃疸。同時(shí)，可發(fā)現(xiàn)豬群中，病豬與臨床健康豬相比生長(zhǎng)明顯緩慢，嚴(yán)重時(shí)候，保育期結(jié)束時(shí)豬的體重還相差20%左右，豬群整齊度差。

病理變化肺間質(zhì)增寬、水腫，腹股溝和腸系膜淋巴結(jié)腫大、水腫，少數(shù)病例在心臟冠狀溝和腸系膜水腫，脾臟腫大或邊緣梗死。當(dāng)出現(xiàn)腸系膜水腫時(shí)，要與大腸桿菌引起的仔豬水腫病相區(qū)分。這兩個(gè)疾病雖然都發(fā)生于斷奶豬，其區(qū)別點(diǎn)主要是：水腫病主要見于膘情最好豬、突然出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、死亡快，而本病主要是見于消瘦豬，有呼吸道癥狀和衰竭死亡等。

（三）皮炎與腎病綜合癥 本病主要發(fā)生于保育階段結(jié)束進(jìn)入生長(zhǎng)階段的豬群，主要表現(xiàn)在臀部或后肢皮膚出現(xiàn)近乎圓形的紫色丘疹，與周圍健康皮膚界限清晰。病理變化是壞死性脈管炎。豬采食與精神狀況正常，如無繼發(fā)感染，幾乎沒有死亡的病例。但是，本病如與支原體肺炎并發(fā)，會(huì)增加支原體肺炎控制的難度。

本病需要與滲出性皮炎（油膩狀皮膚、被毛粘連，葡萄球菌引起）、壞死性皮炎（皮膚化膿、潰瘍、壞死桿菌引起）和鋅缺乏癥（皮膚出現(xiàn)裂痕，多見于耳部）相區(qū)分。病理變化主要是腎臟腫大，皮質(zhì)出現(xiàn)密集的白色壞死灶，使腎臟外觀呈現(xiàn)花斑狀。在少數(shù)情況下，妊娠舍或分娩舍母豬可出現(xiàn)皮膚圓環(huán)斑。

（四）繁殖障礙 母豬未見明顯的臨床表現(xiàn)，在不同妊娠階段發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等。流產(chǎn)和死胎呈現(xiàn)肝充血和心臟肥大、心肌變色。病埋變化是纖維素性或壞死性心肌炎。從流產(chǎn)胎兒中檢出豬圓環(huán)病毒2型，即可以作出判斷。

（五）肺炎 病豬表現(xiàn)呼吸困難，肺臟主要見點(diǎn)狀出血。在日益嚴(yán)重的呼吸道疾病綜合征（PRDC）中，豬圓環(huán)病毒2型與肺炎支原體、藍(lán)耳病毒、流感病毒、胸膜肺炎放線桿菌等，組成了PRDC的主要病原。

（六）腸炎 我們?cè)诎l(fā)生腹瀉的仔豬腸道黏膜中，用免疫組化技術(shù)發(fā)現(xiàn)了病毒信號(hào)，用PCR方法從病豬糞便中檢測(cè)出病毒。文獻(xiàn)報(bào)道，病變主要是肉芽腫腸炎。因此，在當(dāng)前仔豬腹瀉中，要注意鑒別是否由豬圓環(huán)病毒2型引起。

三、診斷方法

（一）現(xiàn)場(chǎng)診斷 調(diào)查發(fā)病日齡、出現(xiàn)癥狀的信息與觀察特征性病理變化，再結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的病原學(xué)檢測(cè)，可以作出準(zhǔn)確的診斷。如果只根據(jù)實(shí)驗(yàn)室PCR定性檢測(cè)就作出診斷，可能由于病毒感染率較高而導(dǎo)致誤診。

（二）實(shí)驗(yàn)室診斷 血清學(xué)技術(shù)包含以PCV2感染細(xì)胞為抗原的單層過氧化物酶試驗(yàn)或免疫熒光試驗(yàn)、以Cap蛋白為抗原的ELISA等，均可檢測(cè)抗體。但是，隨著疫苗使用范圍不斷增加，抗體陽性不能作為感染的依據(jù)。國(guó)內(nèi)使用ELISA檢測(cè)免疫抗體，中和試驗(yàn)作為疫苗效果的檢測(cè)，較為可靠，而作為臨床上免疫效果的評(píng)價(jià)手段尚未取得一致意見，因?yàn)閳A環(huán)病毒病的發(fā)生除了與疫苗抗體外，還與其它病原的協(xié)同作用有關(guān)。目前，區(qū)分滅活疫苗免疫動(dòng)物與自然感染動(dòng)物的血清學(xué)鑒別診斷方法尚未成功。

病原檢測(cè)技術(shù)方面，較為常用的是PCR方法，擴(kuò)增Cap蛋白基因或全基因組，該法可用于PCV2不同基因型毒株的鑒別檢測(cè)。采集樣品主要是肺臟和淋巴結(jié)較為可靠，但對(duì)于活體檢測(cè)，可以采集發(fā)熱期的抗凝血或血清。公豬精液的帶毒狀況也能夠使用PCR監(jiān)測(cè)。定量PCR用于實(shí)驗(yàn)室研究。免疫組化技術(shù)能用于檢測(cè)組織中病原，但不作為常規(guī)診斷方法，該技術(shù)中需要純度和親和力高的單克隆抗體，病毒分離技術(shù)由于細(xì)胞不產(chǎn)生可見病變，加上不同病毒對(duì)細(xì)胞的適應(yīng)性不同，分離的周期較長(zhǎng)，因而不作為常用的方法。

四、預(yù)防控制措施

（一）采用合理的免疫程序 豬圓環(huán)病毒疫苗的免疫程序大體可以分為兩類，即母豬免疫和仔豬免疫。前者工作量低，節(jié)省勞力，后者勞動(dòng)量大。母豬免疫是以法國(guó)梅里亞公司疫苗為代表，其他的產(chǎn)品說明書均是免疫仔豬。免疫母豬能夠?yàn)楹蟠峁┰缙谀冈纯贵w保護(hù)，保護(hù)效果取決于母源抗體的水平高低，同時(shí)必須保證不同仔豬能夠獲得均衡的乳汁，避免由于吮乳的差異造成不同豬只之間的被動(dòng)免疫差異，建議測(cè)定同窩中不同仔豬的豬圓環(huán)病毒疫苗抗體，分析群體整齊度，即可判斷。此外，母豬如果出現(xiàn)由于圓環(huán)病毒病所致的流產(chǎn)和死胎，那么免疫母豬就成為首選。已有資料表明(Madson DM，2009；GerberPF，2011)，母豬免疫后攻毒，母乳仍可檢出病毒核酸，胎兒可檢測(cè)到PCV2，但是組織沒有出現(xiàn)顯微鏡下病變；不過，與非免疫母豬相比，其病毒拷貝數(shù)明顯下降。

仔豬免疫則可以保證每個(gè)豬只獲得等量的免疫劑量，最大限度保障免疫的群體均勻度。仔豬免疫時(shí)間一般要求在3～4周齡，但在實(shí)際生產(chǎn)中也有在14日齡就免疫的。無論仔豬在哪個(gè)日齡開始免疫，其免疫時(shí)間原則上要求在發(fā)生病毒感染之前免疫，以保證仔豬在感染前產(chǎn)生足夠的保護(hù)力，疫苗一般在免疫后3～4周產(chǎn)生保護(hù)力。因此，免疫時(shí)間并非一成不變。至于單次免疫還是兩次免疫，必須遵照疫苗使用說明書的要求實(shí)施。在臨床上發(fā)現(xiàn)，有的豬場(chǎng)出于降低費(fèi)用的考慮，通過減少劑量即仔豬只免疫0.5頭份，認(rèn)為效果尚可，但由于圓環(huán)病毒的特點(diǎn)，疫苗效果好壞不是短期內(nèi)能直接反映出來的，但是需要謹(jǐn)慎評(píng)估。

（二）配套控制措施

1.控制繼發(fā)感染。主要是控制副豬嗜血桿菌病和豬鏈球菌病，這是減少本病造成更大損失的措施，又是降低豬圓環(huán)病毒2型在體內(nèi)增殖滴度增加的手段。另外，值得提醒的是，控制豬肺炎支原體也是減輕豬圓環(huán)病毒病嚴(yán)重性的關(guān)鍵。對(duì)此，各個(gè)豬場(chǎng)可以根據(jù)情況，分別同時(shí)使用豬圓環(huán)病毒疫苗與符合本地流行血清型的血清型副豬嗜血桿菌疫苗、豬鏈球菌病疫苗或豬肺炎支原體疫苗同時(shí)使用（分兩側(cè)注射），能收到一定效果。對(duì)于正在發(fā)生副豬嗜血桿菌病或鏈球菌病的豬群，應(yīng)當(dāng)先使用敏感藥物，如替米考星、阿莫西林與克拉維酸鉀混合制劑等，控制病情，不能在發(fā)病時(shí)注射疫苗。對(duì)下一批豬則考慮疫苗預(yù)防。

2.減少應(yīng)激因素。免疫刺激是誘發(fā)豬圓環(huán)病毒病的常見誘因之一。在單獨(dú)感染豬圓環(huán)病毒2型的試驗(yàn)中，給感染豬注射鑰孔血藍(lán)素，能夠促進(jìn)圓環(huán)病毒病臨床癥狀的出現(xiàn)或增加嚴(yán)重性。同時(shí)，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬細(xì)小病毒感染刺激免疫系統(tǒng)，也可能是引起豬圓環(huán)病毒病發(fā)生的誘因。另外，有些疫苗佐劑是否是本病的誘因，需要進(jìn)一步調(diào)查。

3.增強(qiáng)機(jī)體免疫力。加強(qiáng)飼料原料的控制，減少黃曲霉菌毒素中毒的幾率；營(yíng)養(yǎng)全面，飼料中添加免疫調(diào)節(jié)劑如寡糖、黃芪多糖等，并減少過多混群，是控制本病的管理因素之一。

（三）治療措施 嚴(yán)格說來，本病無治療措施。但是，對(duì)于疾病早期病例（如處于發(fā)熱期），使用ELISA效價(jià)高的血清，經(jīng)過熱滅活后，給發(fā)病保育豬注射3～5 ml，有一定的療效。對(duì)于皮炎與腎病綜合癥的病豬，用過氧乙酸實(shí)施體表淋浴，可促進(jìn)體表丘疹或潰瘍的結(jié)痂和脫落，恢復(fù)豬只正常的體表皮膚，但是，這類豬建議不作為種豬選留，因?yàn)槟壳皩?duì)于已感染的豬圓環(huán)病毒2型，尚無有效從體內(nèi)清除的方法。

（本文根據(jù)第三屆中國(guó)獸醫(yī)大會(huì)報(bào)告整理，未經(jīng)本人審閱）