胃癌組織中DPC4蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

[摘要] 目的 探討胃癌組織中DPC4蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 采用免疫組化Envision二步法檢測(cè)50例胃癌及20例癌旁正常組織中DPC4蛋白的表達(dá)，并探討其與患者性別、年齡、腫瘤大小、組織分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果 50例胃癌組織中的DPC4表達(dá)陽性31例（62.0%）；20例癌旁正常組織中DPC4表達(dá)均為陽性（100.0%）。胃癌組織中DPC4表達(dá)的陽性率明顯低于癌旁正常組織（χ2=10.43，P < 0.01）。胃癌組織中DPC4表達(dá)與性別和年齡無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系（P > 0.05）。腫瘤直徑<2 cm胃癌DPC4陽性率明顯高于腫瘤直徑≥2 cm，高-中分化胃癌DPC4陽性率明顯高于低-未分化，T1～2期胃癌DPC4陽性率明顯高于T3～4期，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌DPC4陽性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均 < 0.05）。 結(jié)論 DPC4基因參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程，其表達(dá)程度與胃癌的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，與胃癌細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；DPC4；臨床病理特征

[中圖分類號(hào)] R735.34 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）14-0091-03

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病過程是一個(gè)多步驟、有序和多基因共同參與的病理變化過程，不僅與癌細(xì)胞異常分化密切相關(guān)，而且與癌細(xì)胞的凋亡調(diào)節(jié)紊亂密切相關(guān)[1]。DPC4是一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，在癌細(xì)胞的分化調(diào)控中起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)DPC4的異常表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)歸等密切相關(guān)，但有關(guān)胃癌組織中DPC4基因表達(dá)及其與臨床病理特征關(guān)系國內(nèi)外報(bào)道不多[2，3]。本研究觀察了胃癌組織中DPC4蛋白表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選擇2008年1月～2012年12月在我院手術(shù)切除治療的胃癌組織標(biāo)本50例。所有的患者均有完整臨床和病理學(xué)資料，術(shù)前均未進(jìn)行任何方式的放化療或免疫治療。其中男32例，女18例。年齡37～89歲，平均（65.7±7.3）歲。另選擇同期手術(shù)切除的20例癌旁正常組織作為對(duì)照組，其中男13例，女7例；年齡38～87歲，平均（65.3±7.0）歲。兩組患者的性別構(gòu)成和年齡分布相類似，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化Envision二步法測(cè)定組織中DPC4表達(dá)。標(biāo)本中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)4 μm厚切片，二甲苯脫蠟和梯度酒精水化，3%雙氧水室溫下常規(guī)孵育10 min，采用檸檬酸抗原修復(fù)液進(jìn)行微波抗原修復(fù)，滴加5%～10%正常山羊血清封閉10 min，傾去血清后滴加DPC4一抗工作液，常規(guī)4℃過夜，后滴加相應(yīng)二抗工作液37°C孵育30 min。各步驟間用PBS沖洗5 min×3次。常規(guī)DAB顯色、蘇木精襯染、脫水、透明、封片和鏡檢。用已知陽性切片行陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗行空白對(duì)照。用已知陽性的胃癌組織作陽性對(duì)照。DPC4單克隆抗體和免疫組化Envision二步法試劑盒均由北京中杉金橋生物公司提供，嚴(yán)格按試劑盒中說明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判定

DPC4染色判斷[4]：以光鏡下細(xì)胞膜和/或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)淺黃、棕黃或棕褐色顆粒反應(yīng)判定為陽性細(xì)胞。分別于5個(gè)不同高倍視野相同范圍下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞及染色陽性細(xì)胞數(shù)。根據(jù)高倍鏡視野下計(jì)數(shù)細(xì)胞的染色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分，其中無著色計(jì)0分、淺黃色計(jì)1分、棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；同時(shí)再根據(jù)染色陽性細(xì)胞所占的總的細(xì)胞比例進(jìn)行陽性細(xì)胞比例計(jì)分，其中陰性計(jì)0分，陽性細(xì)胞的比例≤10%計(jì)1分，陽性細(xì)胞的比例11%～50%計(jì)2分，陽性細(xì)胞的比例51%～75%計(jì)3分，陽性細(xì)胞的比例>75%計(jì)4分。根據(jù)染色強(qiáng)度計(jì)分和陽性細(xì)胞比例計(jì)分的乘積≥2分即為DPC4表達(dá)（+），否則DPC4表達(dá)（-）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)數(shù)資料結(jié)果以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 胃癌及癌旁正常組織中DPC4陽性率比較

50例胃癌組織中的DPC4表達(dá)陽性31例（62.0%）；20例癌旁正常組織中DPC4表達(dá)均為陽性（100.0%）。胃癌組織中DPC4表達(dá)陽性率明顯低于癌旁正常組織（χ2=10.43，P < 0.01）。見圖1。

2.2 胃癌組織中DPC4表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

胃癌組織中DPC4表達(dá)與性別和年齡無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系（P > 0.05）。腫瘤直徑<2 cm胃癌DPC4陽性率明顯高于腫瘤直徑≥2 cm，高-中分化胃癌DPC4陽性率明顯高于低-未分化，T1-2期胃癌DPC4陽性率明顯高于T3-4期，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌DPC4陽性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，均具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P < 0.05）。見表1。

3 討論

胃癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的由環(huán)境污染、飲食不良和基因結(jié)構(gòu)缺陷等因素共同作用的病理過程，其中抑癌基因失活在其中起重要作用[5]。DPC4定位于人體染色體18q21.1，含11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子，編碼552個(gè)氨基酸殘基組成的DPC4蛋白[6]。目前已證實(shí)DPC4基因是TGFβ基因信號(hào)傳導(dǎo)的中介。如DPC基因發(fā)生突變或缺失，對(duì)TGFβ基因的抑制作用減弱，從而增加其抗凋亡功能使細(xì)胞永生化形成腫瘤，且DPC4基因突變或缺失可使得與DPC4蛋白結(jié)合細(xì)胞的DNA活性明顯降低，引起TGFβ通路基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生失活，造成細(xì)胞永生化形成腫瘤[7]。DPC4基因在多種人類腫瘤的病因及發(fā)病機(jī)制中的重要作用而備受臨床研究的重視[8]。

近年來隨著對(duì)抑癌基因DPC4基因研究深入，研究發(fā)現(xiàn)DPC4基因與胃癌發(fā)病過程及臨床病理特征的關(guān)系密切。邵云霞等[9]研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中DPC4蛋白表達(dá)的陽性率高達(dá)75%，而20例癌周正常黏膜組織DPC4蛋白均呈強(qiáng)陽性表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析示胃癌組織DPC4蛋白的表達(dá)陽性率明顯低于癌周正常黏膜組織，且胃癌組織中DPC4蛋白的表達(dá)與患者的年齡和發(fā)生部位無明顯的相關(guān)性，而與胃癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)和腫物大小密切相關(guān)，DPC4蛋白的陽性表達(dá)與胃癌組織的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，對(duì)化療療效的判斷和預(yù)后評(píng)估判斷具有較好的參考價(jià)值。曲洪濱等[10]研究發(fā)現(xiàn)正常大腸組織DPC4蛋白陽性表達(dá)率高達(dá)100%，而大腸癌組織中DPC4蛋白大多表達(dá)呈（-）～（++），統(tǒng)計(jì)分析示大腸癌組織DPC4 蛋白表達(dá)程度明顯低于正常大腸組織。表明DPC4蛋白的表達(dá)與大腸癌發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，有望成為大腸癌基因診斷和治療的生物學(xué)標(biāo)記物。本研究結(jié)果顯示胃癌組織中DPC4表達(dá)的陽性率明顯低于癌旁正常組織，提示DPC4基因與胃癌細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移的過程。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)胃癌組織中DPC4表達(dá)與性別和年齡無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系。腫瘤直徑<2 cm胃癌DPC4陽性率明顯高于腫瘤直徑≥2 cm，高-中分化胃癌DPC4陽性率明顯高于低-未分化，T1-2期胃癌DPC4陽性率明顯高于T3-4期，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌DPC4陽性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，均具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示胃癌中DPC4表達(dá)與癌組織的分化程度呈負(fù)正相關(guān)，與胃癌的浸潤深度和淋巴轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，推測(cè)DPC4表達(dá)減少或缺失可進(jìn)一步參與胃癌的惡性演進(jìn)過程，且胃癌惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)。我們推測(cè)DPC4表達(dá)減少或缺失，使DPC4基因?qū)GFβ基因的抑制功能下降，同時(shí)增加其抗凋亡功能使細(xì)胞永生化形成腫瘤，并可使 DPC4蛋白結(jié)合的DNA活性明顯下降或喪失，引起TGFβ通路基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生失活，造成細(xì)胞永生化形成腫瘤[11，12]。

總之，DPC4基因參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程，其表達(dá)程度與胃癌的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，與胃癌細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。

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（收稿日期：2013-02-20）