兩種運(yùn)送培養(yǎng)基及無菌棉拭子維持細(xì)菌活性能力的比較

[摘要] 目的 比較兩種運(yùn)送培養(yǎng)基以及無菌棉拭子三種標(biāo)本運(yùn)送系統(tǒng)維持細(xì)菌活性的能力。 方法 選用金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌，在0 h、1 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別檢測它們?cè)谌N運(yùn)送系統(tǒng)上存活的情況，每個(gè)時(shí)相點(diǎn)重復(fù)檢測10次。 結(jié)果 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌24 h內(nèi)在三種運(yùn)送系統(tǒng)上存活，且菌量無明顯變化。但對(duì)苛養(yǎng)菌包括化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌在兩種運(yùn)送培養(yǎng)基上的存活時(shí)間和菌量不同程度優(yōu)于無菌棉拭子。 結(jié)論 運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送臨床微生物標(biāo)本效果好于無菌棉拭子，特別是對(duì)苛養(yǎng)菌的細(xì)菌培養(yǎng)意義重大。

[關(guān)鍵詞] 運(yùn)送培養(yǎng)基；無菌棉拭子；細(xì)菌培養(yǎng)

[中圖分類號(hào)] R378 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）14-0085-04

微生物標(biāo)本的正確采集和及時(shí)送檢是臨床診斷、疾病預(yù)防和控制、食品衛(wèi)生管理和監(jiān)督、醫(yī)學(xué)衛(wèi)生科學(xué)研究等領(lǐng)域的基礎(chǔ)性工作，而期間的樣品運(yùn)送培養(yǎng)對(duì)檢測結(jié)果的正確起著關(guān)鍵性的作用[1，2]。目前大部分醫(yī)院多使用一次性無菌棉拭子采集和運(yùn)送標(biāo)本，由于無菌棉拭子不能為標(biāo)本中的細(xì)菌提供養(yǎng)分和水分，放置時(shí)間過長，標(biāo)本易干燥，導(dǎo)致細(xì)菌死亡，降低檢出率，甚至造成假陰性。為此，本課題組實(shí)驗(yàn)室出于運(yùn)送病原菌樣品的需要，引進(jìn)兩種一次性使用運(yùn)送培養(yǎng)基，以期延長標(biāo)本中細(xì)菌存活時(shí)間，避免或盡量減少出現(xiàn)假陰性。但運(yùn)送培養(yǎng)基維持細(xì)菌活性的能力如何以及與無菌棉拭子比較有何區(qū)別少有文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)主要探討兩種運(yùn)送培養(yǎng)基及無菌棉拭子維持細(xì)菌活性的能力，以便選擇一個(gè)更適用于臨床的標(biāo)本運(yùn)送系統(tǒng)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌株ATCC25923，大腸埃希菌質(zhì)控菌株ATCC25922，白色念珠菌質(zhì)控菌株ATCC64548，其他為臨床標(biāo)本隨機(jī)分離菌株，包括福氏志賀菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌。

1.2材料

兩種運(yùn)送培養(yǎng)基（法國生物梅里埃公司、浙江拱東醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)）；無菌棉拭子（浙江拱東醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)）；哥倫比亞血平板（鄭州博賽生物技術(shù)股份公司生產(chǎn)）；巧克力平板（法國生物梅里埃公司生產(chǎn)）；淋球菌平板（鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)）；沙保羅氏平板（江門市凱林貿(mào)易有限公司生產(chǎn)）。

1.3 方法

①將待測菌培養(yǎng)18～24 h，挑取菌落溶于無菌生理鹽水，用比濁儀調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，再稀?0倍備用。②每種菌液用三種運(yùn)送系統(tǒng)棉拭子各6支沾取。③分成6個(gè)時(shí)間段：0 h、1 h、4 h、8 h、12 h、24 h，各菌株分別接種于相適應(yīng)培養(yǎng)基平板，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌接種于哥倫比亞血平板，卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌接種于巧克力平板，淋病奈瑟菌接種于淋球菌平板，白色念珠菌接種于沙保羅氏平板。四分區(qū)劃線，放入35.5℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)24～48 h觀察并記錄各菌株生長情況，按四分區(qū)劃線記錄生長情況，一區(qū)～四區(qū)生長分別記錄為：1～4對(duì)應(yīng)+～++++，0表示平板未見細(xì)菌生長。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)10次。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0軟件處理，所有數(shù)據(jù)都以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較使用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

三種運(yùn)送系統(tǒng)對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌24 h內(nèi)維持細(xì)菌活性能力無明顯區(qū)別。但對(duì)所選苛養(yǎng)菌，兩種運(yùn)送培養(yǎng)基維持細(xì)菌活性能力不同程度好于無菌棉拭子，尤其是卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌。見表1～6。

3 討論

微生物標(biāo)本采集后的及時(shí)運(yùn)送對(duì)病原菌的培養(yǎng)和正確檢測起著關(guān)鍵性的作用[3]。按規(guī)范，從標(biāo)本采集到微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本接種不得超過2 h[4]。目前標(biāo)本采集后，多由護(hù)工（少量的由護(hù)士）運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，由于護(hù)工要兼顧多個(gè)科室的工作，不是每次都能隨叫隨到，故標(biāo)本采集到送至微生物實(shí)驗(yàn)室接種培養(yǎng)經(jīng)常超過2 h，如遇夜班時(shí)間，放置時(shí)間可能會(huì)更長。有些細(xì)菌如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，特別是淋病奈瑟菌容易死亡，放置時(shí)間過長，會(huì)降低檢出率，導(dǎo)致細(xì)菌培養(yǎng)出現(xiàn)假陰性，影響臨床醫(yī)生的診斷和治療[5-8]。

目前，大部分醫(yī)院多使用一次性無菌棉拭子采集和運(yùn)送標(biāo)本，這主要是因?yàn)槠鋬r(jià)格便宜，操作簡便，基本上也能滿足標(biāo)本采集的要求。無菌棉拭子的不足之處就在于它不能為標(biāo)本中的細(xì)菌提供養(yǎng)分和水分，維持細(xì)菌活性的能力差，易導(dǎo)致細(xì)菌死亡，影響檢測的正確性。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，如果使用無菌棉拭子采集細(xì)菌、培養(yǎng)標(biāo)本，那么從標(biāo)本采集到實(shí)驗(yàn)室接種就不能超過1 h，特別是淋病奈瑟菌的采集、運(yùn)送到接種培養(yǎng)，最好在0.5 h內(nèi)完成，否則難于保證檢測的正確性[9，10]。

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，課題組實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的兩種一次性使用運(yùn)送培養(yǎng)基，可為所選各種細(xì)菌提供良好的生存環(huán)境，有利于采集標(biāo)本中細(xì)菌的存活。試驗(yàn)所選的兩種運(yùn)送培養(yǎng)基均是由一支無菌纖維拭子和含有能維持細(xì)菌生物活性的半固體培養(yǎng)基塑料管組成。培養(yǎng)基能為插入其中的標(biāo)本提供養(yǎng)分和水分，保證細(xì)菌存活，使標(biāo)本能夠較長時(shí)間保存[11]。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，臨床標(biāo)本采集后，使用兩種運(yùn)送培養(yǎng)基轉(zhuǎn)運(yùn)4 h內(nèi)，完全可保證細(xì)菌存活，特別是梅里埃運(yùn)送培養(yǎng)基，即使遇到夜班，標(biāo)本放置過夜，仍能保持標(biāo)本中的細(xì)菌存活，這為臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送和及時(shí)接種、培養(yǎng)、檢驗(yàn)留出了足夠的時(shí)間和空間，為避免臨床病原菌的漏檢、提高檢測的正確性創(chuàng)造了有利條件。

本實(shí)驗(yàn)所選菌種為臨床常見病原菌[12-15]，對(duì)環(huán)境不敏感的細(xì)菌，如金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌，三種運(yùn)送系統(tǒng)24 h內(nèi)細(xì)菌數(shù)量未見明顯減少（P > 0.05），其中白色念珠菌24 h帶菌量還略有增加。但對(duì)苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌、淋病奈瑟菌，所選兩種運(yùn)送培養(yǎng)基與無菌棉拭子維持細(xì)菌活性能力的差異比較明顯（P < 0.05）。運(yùn)送培養(yǎng)基對(duì)化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他不蘭漢菌、流感嗜血桿菌24 h內(nèi)維持細(xì)菌活性能力較好，24 h帶菌量變化不大（P > 0.05）。而無菌棉拭子對(duì)卡他不蘭漢菌、流感嗜血桿菌8 h即無細(xì)菌生長，特別是淋病奈瑟菌，1 h帶菌量明顯減少（P < 0.05），4 h無細(xì)菌生長。

兩種運(yùn)送培養(yǎng)基對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌24 h內(nèi)維持細(xì)菌活性能力相似（P > 0.05），只是梅里埃運(yùn)送培養(yǎng)基對(duì)肺炎鏈球菌24 h帶菌量略有減少，而拱東運(yùn)送培養(yǎng)基流感嗜血桿菌24 h帶菌量有減少。兩種運(yùn)送培養(yǎng)基在對(duì)維持淋病奈瑟菌活性方面區(qū)別比較明顯（P < 0.05），拱東生產(chǎn)的運(yùn)送培養(yǎng)基4 h內(nèi)無變化，8 h減少，12 h無細(xì)菌生長，梅里埃生產(chǎn)運(yùn)送培養(yǎng)基24 h內(nèi)帶菌量未見減少，可見對(duì)于淋病奈瑟菌，梅里埃運(yùn)送培養(yǎng)基要優(yōu)于拱東運(yùn)送培養(yǎng)基。

綜上所述，本課題組實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的兩種一次性使用運(yùn)送培養(yǎng)基維持細(xì)菌活性的能力明顯優(yōu)于無菌棉拭子，更適合臨床、公共衛(wèi)生和科研使用。在兩種運(yùn)送培養(yǎng)基中，梅里埃運(yùn)送培養(yǎng)基的性能優(yōu)于拱東運(yùn)送培養(yǎng)基，即使夜班采集的標(biāo)本擱置過夜仍能保證細(xì)菌存活。本研究對(duì)三種運(yùn)送系統(tǒng)作了較為詳細(xì)、客觀的評(píng)價(jià)，為臨床選擇和運(yùn)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2013-01-17）