高效液相色譜法測定氣滯胃痛片的含量

【摘 要】建立反相高效液相色譜法測定氣滯胃痛片中延胡索乙素的含量。方法：采用Waters Symmetry C18液相色譜柱（150×4.6mm，5μm），甲醇-0.1%磷酸（三甲胺調(diào)pH值至8.2）（65∶35）為流動相，檢測波長為230nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。延胡索乙素在10～100μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系（r=0.99995）。延胡索乙素平均回收率分別為99.2%。結論：本法簡便、準確，可用于氣滯胃痛片中延胡索乙素的含量測定。

【關鍵詞】氣滯胃痛片；含量；測定

氣滯胃痛片由枳殼、炙甘草、白芍、香附（炙）、柴胡、延胡索（炙）等6昧中藥組成。氣滯胃痛片具有舒肝理氣、和胃止痛的功能。氣滯胃痛片用于治療肝郁氣滯，胸痞脹滿，胃脘疼痛。延胡索乙素是延胡索主要成分之一。現(xiàn)有相關報道都是采用薄層掃描法測定氣滯胃痛片中延胡索乙素含量。延胡索乙素主要測定方法有分光光度法[1]、薄層掃描法[2-4]、旋光法[5]、熒光法[6]等。本文采用高效液相法測定氣滯胃痛片中延胡索乙素含量。

1、儀器與試藥

1.1儀器

LM-C1000超聲波清洗器（10L）（武漢朗瑪恒瑞科技有限公司）；CENTRA S200/R200實驗樓中央純水系統(tǒng)（上海島通應用科技有限公司）；HH-4數(shù)顯電子恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市宏華儀器廠）；EX1700超高效液相色譜儀（上海伍豐科學儀器有限公司）；TU-1950系列紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；PHS-550智能型臺式酸度計（杭州陸恒生物科技有限公司）；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵，（西安中諾儀器有限公司）；RE2000E旋轉蒸發(fā)儀（西安太康生物科技集團）；YKl60型顆粒機（常州市倍成干燥設備工程有限公司）；CCH10槽形單漿混合機（北京開創(chuàng)同和科技發(fā)展有限公司）。

1.2色譜柱：Waters Symmetry C18液相色譜柱（北京金歐亞科技發(fā)展有限公司）（150×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：延胡索乙素

1.4試劑：甲醇（上海東戈姆科貿(mào)發(fā)展有限公司）、乙醚（北京化標源科技有限公司）、氫氧化鈉（上海躍勝貿(mào)易有限公司）、乙腈（上海高信化玻儀器有限公司）。

1.5試藥：氣滯胃痛片

2、測定方法確定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇-0.1%磷酸（三甲胺調(diào)pH值至8.2）（65∶35）為流動相，檢測波長：230nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計算應不得低于2000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取延胡索乙素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含50μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取氣滯胃痛片20片，除去包衣，研細，精密稱取20克，加100毫升甲醇，將圓底燒瓶稱重，回流提取30分鐘，放至室溫，稱重，用甲醇補重，過濾，取續(xù)濾液50毫升，水浴蒸干，殘渣加水20mL溶解，用0.05%氫氧化鈉調(diào)PH值為8.0，分別用20毫升乙醚萃取3次，合并乙醚層，水浴蒸干，加適量流動相溶解，轉移至10毫升容量瓶內(nèi)，稀釋至刻度。

2.4專屬性試驗

取枳殼、香附（炙）提取揮發(fā)油，揮發(fā)油及水提液備用，藥渣棄去。取炙甘草、白芍、柴胡加水煎煮兩次，第一次2小時，第二次1小時，合并水煎液并與枳殼、香附（炙）水提液合并，過濾，濾液濃縮至相對密度1.18-1.23（50）的清膏，加蔗糖糊精適量，制成顆粒，噴入揮發(fā)油，混勻，即得陰性對照樣品，照2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在延胡索乙素出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗

精密稱取延胡索乙素對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為50μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.95%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取適量延胡索乙素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含10、20、40、80、100.微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，延胡索乙素在10～100μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.7重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的氣滯胃痛片樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.86%，結果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量氣滯胃痛片9份，置量瓶中，分別精密加入延胡索乙素對照品，按項下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.2%，RSD為0.86%。

2.9最低檢出限與定量

采用2.1項下色譜條件，對樣品測定，當信噪比為10時，定量限為2.5ng；當信噪比為3時，最低檢出限為0.6ng。

2.10樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批延胡索乙素樣品，分別制備供試品和對照品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4、5小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定延胡索乙素對照品和樣品RSD分別為0.56%，0.61%。結果表明供試品和樣品5小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.11樣品含量測定

依照上述含量測定方法，再按外標法以峰面積計算樣品的含量，結果三批樣品的含量分別為32.1μg·g-1、33.1μg·g-1、31.2μg·g-1。

3、討論

分光光度法、薄層掃描法、旋光法、RP-HPLC法等測定方法均能延胡索乙素進行測定，但高效液相法方法最簡單、重現(xiàn)性最好。本實驗采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于氣滯胃痛片中延胡索乙素的含量測定。