新鮮果蔬中還原性VC含量的測(cè)定方法優(yōu)化

摘要：采用紫外分光光度法測(cè)定新鮮果蔬中還原型VC含量，探討了此方法的最佳測(cè)定條件。結(jié)果表明，以10%鹽酸為提取劑，可在230 nm處測(cè)定果蔬中還原型VC含量，最佳反應(yīng)溫度和時(shí)間分別為70 ℃和14 min。優(yōu)化后的測(cè)定方法變異系數(shù)小于2.50%，平均回收率為98.99%，VC含量在0～0.14 mg/50 mL呈良好的線性關(guān)系。該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，可用于果蔬中還原型VC含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：紫外分光光度法；VC；水果；蔬菜

中圖分類號(hào)：0657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）21-5308-03

Determination of the Content of Reduction-type Vitamin C in Fresh Fruits and Vegetables

YANG Jin-fenga，b，XIE Tian-zhua，b，WANG Feng-xiaa，b，QI Xue-meib，HU Li-pinga，b

（a.Gansu Engineering Technology Research Center for Sweet Cherry； b.College of Life Science and Chemistry，

Tianshui Normal University， Tianshui 741000，Gansu， China）

Abstract： The method to determine reduced vitamin C in fruits and vegetables by ultraviolet spectrophotometry was constructed， and all determination conditions were optimized. The results showed that vitamin C was determined with the 10% hydrochloric acid as extraction solvent at 230 nm. The optimum reaction temperature and time were 70 ℃ and 14 min， respectively. The coefficient of variation of the optimized method is less than 2.50%， and the average recovery is 98.99%. The method showed a good linear relationship in the course of 0～0.14 mg/50 mL. The method was simple， rapid， accurate， which can be used for determination of the content of reduced vitamin C in fruits and vegetables.

Key words： ultraviolet spectrophotometry； vitamin C； fruit and vegetable

食品中還原型VC的測(cè)定方法很多，如高效液相色譜法[1-3]、熒光分光光度法[4-6]、原子吸收光譜法[7，8]、紫外分光光度法[9-11]、滴定分析法[12]、鉬藍(lán)比色法[13-15]等，其中高效液相色譜法、熒光分光光度法和原子吸收光譜法要求樣品的純度較高，還需要有昂貴的儀器；紫外分光光度法中2，4-二硝基苯肼比色法操作麻煩，耗時(shí)較長(zhǎng)；2，6-二氯靛酚法操作簡(jiǎn)便且應(yīng)用最普遍，但是藥品價(jià)格昂貴，而且多數(shù)果蔬樣品溶液都有顏色，使滴定終點(diǎn)不易判定，使用脫色劑也很難脫色完全，且造成VC的損失；碘量法需標(biāo)定滴定碘液，麻煩費(fèi)時(shí)。相比之下，紫外分光光度法較為簡(jiǎn)便，易操作。

目前，對(duì)紫外分光光度法測(cè)定食品中還原型VC已有相關(guān)報(bào)道，但在實(shí)際應(yīng)用中，部分試驗(yàn)條件差異較大，無(wú)法得到統(tǒng)一的方案，因此，本研究對(duì)測(cè)定的最大吸收峰、酸性介質(zhì)、反應(yīng)溫度以及反應(yīng)時(shí)間等條件作了進(jìn)一步的分析，確定了紫外分光光度法測(cè)定果蔬中還原型VC的最佳試驗(yàn)條件。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

所用樣品購(gòu)買(mǎi)于天水果蔬批發(fā)市場(chǎng)，選擇了番茄、青椒、黃瓜、草莓、香蕉、蘋(píng)果5種蔬菜和水果作為待測(cè)樣品，因?yàn)檫@幾種樣品在日常生活中比較常見(jiàn)，實(shí)際應(yīng)用價(jià)值較大，樣品中VC含量相關(guān)報(bào)道很多。

UV3010型紫外分光光度計(jì)（日本日立公司）、FA1004型電子天平（上海越平科學(xué)儀器公司）、SYC-15B型超級(jí)恒溫水浴鍋（南京桑立電設(shè)備廠）。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制 ①0.1%鹽酸溶液。取濃鹽酸133 mL，加水稀釋至500 mL；②100 μg /mL VC標(biāo)準(zhǔn)溶液。稱取0.050 0 g抗壞血酸，以10 mL 0.1%鹽酸溶液，并以蒸餾水定容到500 mL容量瓶中；③Cu（NO3）2溶液。準(zhǔn)確稱取Cu （NO3）2 0.189 0 g，以蒸餾水溶解并定容到500 mL的容量瓶中，使Cu（Ⅱ）的質(zhì)量濃度為100 μg/mL。

所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水均為去離子水。

1.2.2 樣品處理及測(cè)定方法 將樣品用去離子水洗凈后擦干、切碎，準(zhǔn)確稱取10.00 g于研缽中，加入10 mL 0.1%鹽酸溶液，快速研磨成勻漿后轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，用0.1%鹽酸溶液定容后用高速冷凍離心機(jī)以10 000 r/ min離心10 min，取10 mL的上清液于50 mL容量瓶中，加入0.30 mL的Cu （NO3）2溶液后，于70 ℃恒溫水浴鍋中加熱16 min，取出后冰水冷卻，以空白試劑為參照，在230 nm處測(cè)定。

1.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) ①提取劑的選擇。分別吸取2.00 mL的2%草酸、2%偏磷酸、10%鹽酸、2%草酸：1%鹽酸（1∶1，V/V），于50 mL容量瓶中，用去離子水定容，以去離子水做空白在200～350 nm處進(jìn)行掃描，選出VC的最佳提取劑；②最大吸收峰的選擇。準(zhǔn)確吸取3.00 mL的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液于50 mL容量瓶中用去離子水定容，然后以去離子水作空白置于1 cm石英比色皿中，在190～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)多次進(jìn)行連續(xù)光譜掃描，確定VC最大吸收峰；③溫度對(duì)反應(yīng)的影響研究。取5個(gè)容量瓶，分別加入2 mL標(biāo)準(zhǔn)VC溶液和0.3 mL Cu（NO3）2溶液，于20、40、60、80、100 ℃下恒溫水浴10 min，按試驗(yàn)方法測(cè)定光吸收值，考察溫度對(duì)催化反應(yīng)的影響，選出銅離子破壞VC的最佳溫度；④時(shí)間對(duì)反應(yīng)的影響分析。吸取2 mL的標(biāo)準(zhǔn)VC溶液和0.3 mL的硫酸銅溶液，于70 ℃下分別加熱2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 min，然后用冰水冷卻，測(cè)其吸光度值，分析時(shí)間對(duì)反應(yīng)的影響，選出銅離子破壞VC的最適時(shí)間；⑤精密度及回收率的測(cè)定。吸取2.00 mL的樣品液于50 mL的容量瓶中，將樣品測(cè)定3次，測(cè)定吸光度值，計(jì)算精密度； 吸取2.00 mL的樣品液于50 mL的容量瓶中，加入VC標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，分析樣品的回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取劑的選擇

VC是一種不穩(wěn)定的維生素，在測(cè)定時(shí)需要選擇一種較好的提取劑，以延長(zhǎng)VC的穩(wěn)定時(shí)間，提高VC的提取效率，不同測(cè)定VC的方法，所采用的提取劑也不同，最常用的VC提取劑有10%鹽酸、2%草酸、2%偏磷酸、2%草酸∶1%鹽酸（1∶1，V/V）等。對(duì)10%鹽酸、2%草酸、2%偏磷酸、2%草酸∶1%鹽酸（1∶1，V/V）在200～350 nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)10%鹽酸溶液在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度值最小，在230 nm下鹽酸則沒(méi)有吸收值，因而不會(huì)影響VC的光吸收。故本試驗(yàn)選擇10%鹽酸溶液作為VC的最佳提取劑。有文獻(xiàn)表明，VC在鹽酸溶液中具有較好的穩(wěn)定性[9]。

2.2 最大吸收峰的選擇

吸收峰的大小決定著方法的靈敏度，只有選擇正確的波長(zhǎng)，才能減少系統(tǒng)誤差，提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。由圖2可知，隨著波長(zhǎng)的增大，VC在230 nm處有最大吸收峰，故選擇230 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3 溫度對(duì)反應(yīng)的影響

由圖3可知，常溫下VC就可分解，但不能很快分解，20 ℃時(shí)吸光度值很大；20～60 ℃時(shí)隨著溫度的上升，吸光度值直線下降，說(shuō)明升高溫度加快了還原型VC與銅離子的反應(yīng)，從而加快了VC的分解；在60～80 ℃吸光度值較低，且較穩(wěn)定，說(shuō)明還原型VC已基本破壞完全，測(cè)得值接近于銅離子的吸光度值；在100 ℃時(shí)吸光度值又有所增加，這可能是氧化后的VC被轉(zhuǎn)化為古洛糖酸的緣故。70 ℃處于溫度較穩(wěn)定區(qū)段的中間位置，選擇這個(gè)溫度有利于加熱時(shí)控制溫度，可使試驗(yàn)的測(cè)量結(jié)果更為準(zhǔn)確，因此選擇的最佳反應(yīng)溫度為70 ℃。

2.4 時(shí)間對(duì)反應(yīng)的影響

加熱時(shí)間對(duì)反應(yīng)影響較大，隨著加熱時(shí)間的增加，還原型VC會(huì)不斷地被破壞轉(zhuǎn)換成氧化型VC，當(dāng)還原型VC被破壞完全時(shí)，吸光度值會(huì)穩(wěn)定下來(lái)，但如果繼續(xù)加熱，氧化型VC進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成古洛糖酸，會(huì)使吸光度值增加。由圖4可知，在反應(yīng)的前12 min，隨著時(shí)間的增加，吸光度值逐漸減??；加熱時(shí)間在12～16 min吸光度值基本穩(wěn)定，說(shuō)明此時(shí)VC已被完全破壞；在反應(yīng)超過(guò)16 min 以后，吸光度值又略有增加。反應(yīng)時(shí)間為14 min時(shí)吸光度值最低，VC破壞得最完全，可使最終的測(cè)量結(jié)果更準(zhǔn)確，故本試驗(yàn)選擇最佳加熱時(shí)間為14 min。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在優(yōu)化的試驗(yàn)條件下，準(zhǔn)確吸取VC標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于50 mL的容量瓶中，定容后搖勻，放置14 min后在230 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度（A230 nm），得到濃度C（mg/50 mL）對(duì)吸光度A230 nm的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程 為A230 nm=1.554 9C， R2=0.995 6（圖5）。結(jié)果表明，VC濃度在0～0.14 mg/50 mL吸光度值與VC含量呈良好的線性關(guān)系，服從比爾定律。

2.6 精密度及回收率試驗(yàn)

表1的結(jié)果表明，優(yōu)化后的方法測(cè)定果蔬中的VC，測(cè)定結(jié)果較可靠，且重復(fù)性較好，變異系數(shù)小于5%，說(shuō)明優(yōu)化后的測(cè)定方法有較高的精密度，重現(xiàn)性好。平均回收率為98.99%，回收率較高，見(jiàn)表2。

3 小結(jié)與討論

通過(guò)試驗(yàn)，確定了紫外分光光度法測(cè)定果蔬中還原型VC的最佳條件，從而建立了一種簡(jiǎn)便、快速的測(cè)定還原型VC的方法。優(yōu)化后的方法的精密度、準(zhǔn)確度均符合要求，適用于果蔬中還原型VC含量的測(cè)定。

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