蒼耳提取物對大蔥紫斑病原孢子和菌絲的影響

摘要：以大蔥紫斑病原菌為供試菌，采用菌絲生長速率測定法和病原孢子萌發(fā)率測定法，對蒼耳（Xanthium sibiricum Patr. ex Widd）提取物的抗菌活性進行研究。結(jié)果表明，提取物在50、100 mg/mL的濃度下，大蔥紫斑病原孢子萌發(fā)率低于50%，對菌絲的抑制率大于60%，對大蔥紫斑病原菌具有較強的抑制作用。

關(guān)鍵詞：蒼耳（Xanthium sibiricum Patr. ex Widd）提取物；大蔥紫斑病原；萌發(fā)率；抑制率

中圖分類號：S482 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）21-5196-03

Effects of Xanthium Sibiricum Extracts on Inhibiting Alternaria porri Pathogen

LIANG Kui-jing，LI Zhi-tao，GAO Xiao-kuan

（College of Life Science， Hengshui University， Hengshui 053000， Hebei， China）

Abstract： The inhibitory activity of the extracts from plants（Xanthium sibiricum Patr. ex Widd） against Alternaria porri （Ell）Ciferri was studied in lab. The results showed that when the concentration of extract was at 50 and 100 mg/mL， spore germination rate was less than 50%， mycelial inhibition rate was greater than 60%， and a strong inhibitory effect on the Alternaria porri （Ell） Ciferri purpura pathogens was observed.

Key words： Xanthium sibiricum extracts； Alternaria porri； germination rate； inhibition rate

自上世紀40年代以來，化學(xué)農(nóng)藥因其品種多、見效快、使用方便、價格低廉等特點在農(nóng)藥市場中占據(jù)主導(dǎo)地位。長期以來，使用化學(xué)合成殺菌劑一直是控制荔枝霜疫病發(fā)生的主要手段之一，但是隨著人類對食品安全、環(huán)境保護和克服有害生物抗性等問題的日益重視，化學(xué)殺菌劑的使用正受到越來越嚴格的限制[1，2]。植物源殺菌劑是利用植物根、莖、葉、花、果實等部分或分離得到具有抑菌活性的成分加工成的制劑。從植物中，特別是一些藥用植物中尋找生物活性物質(zhì)是目前創(chuàng)制新型農(nóng)藥的重要途徑之一，也是無公害農(nóng)藥生產(chǎn)的理想來源[3]。河北省氣候多樣，地理環(huán)境復(fù)雜，干旱少雨，造就了植物良好的抗逆特性，在開發(fā)植物源農(nóng)藥方面有著良好的資源優(yōu)勢。

大蔥紫斑病又稱黑斑病，是由蔥格孢菌所引起的真菌性病害，主要危害大蔥的葉和花梗，也可危害鱗莖。病斑多從葉尖或花梗中部開始發(fā)生，幾天后即可蔓延至下部。發(fā)病初期病斑小，灰色至淡褐色，中央微紫色。之后很快擴大為橢圓形或紡錘形，凹陷，暗紫色，上生黑色煤污點狀物，常形成同心輪紋。近年來，隨著大蔥生產(chǎn)的發(fā)展，大蔥紫斑病的發(fā)生與危害逐年增加，在河北省及其他各省均有不同程度發(fā)生，嚴重時影響大蔥生長和產(chǎn)量，造成一定經(jīng)濟損失。因此，有效防治大蔥紫斑病對提高產(chǎn)量和效益十分重要。

蒼耳（Xanthium sibiricum Patr.ex Widd）屬菊科植物，全株有毒，適應(yīng)性強，是農(nóng)田、荒野、草地、田埂溝邊、果園的常見雜草[4]。蒼耳作為中藥歷史悠久，但作為植物源農(nóng)藥的研究和應(yīng)用很少。楊順義[5]和郭東艷[6]對蒼耳提取物殺菌活性進行了研究，蒼耳對蔬菜上常見病菌有較高的抑制作用，尤其是對番茄灰霉病菌，筆者利用超聲波輔助提取法提取蒼耳植物提取物，并對提取物進行了大蔥紫斑病原菌抑菌活性試驗，以期尋找新的具有抗菌、抑菌活性的植物源農(nóng)藥。

1 材料與方法

1.1 材料

供試植物為蒼耳，采自衡水市郊（無污染的環(huán)境條件，非病害防治區(qū)域）。供試植物病原菌為大蔥紫斑病，采自衡水盧家村大蔥菜園。培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 蒼耳植物提取物的制備 蒼耳烘干粉碎→提?。ㄉn耳∶70%乙醇=1∶5，m/V）→超聲波（25 min）→離心（3 500 r/min，20 min）取上清液→40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)→用70%乙醇定容（50 mL藥液與50 g蒼耳干粉末）→編號→4 ℃冰箱保存?zhèn)溆肹7，8]。

1.2.2 提取物對孢子萌發(fā)率的影響 大蔥紫斑病原菌經(jīng)培養(yǎng)后在菌落表面產(chǎn)生分生孢子，用毛筆將分生孢子刷于盛有滅菌水的燒杯中，將其配成在10×10倍顯微鏡下每視野約30～35個分生孢子的懸浮液。用接種環(huán)取孢子懸浮液均勻地涂在加有蒼耳提取物的PDA培養(yǎng)基載玻片上，保濕，放置在25 ℃光照培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)，6 h后用1 g/L的HgCl2固定，檢查孢子萌發(fā)情況，每個處理觀察10個視野約300個孢子。孢子萌發(fā)以芽管長度超過孢子直徑長度（指直徑小的一邊）的1/2為標準。孢子萌發(fā)率計算公式如下：

孢子萌發(fā)率=■×100%

1.2.3 PDA平板法測定提取物的抑菌活性 在無菌條件下，將待測提取液原液用70%乙醇稀釋成所需濃度100、50、10 mg/mL，分別取不同濃度提取液的稀釋液1 mL加入100 mL的PDA培養(yǎng)基中，搖勻后趁熱倒入直徑90 mm的培養(yǎng)皿內(nèi)。預(yù)先培養(yǎng)大蔥紫斑病原菌，待平板凝固后接入生長一致的菌餅（d=6.0 mm），菌絲面向下，每皿接種1個菌餅，每個處理設(shè)3次重復(fù)，25 ℃光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 d觀察結(jié)果。用十字交叉法測量供試真菌菌落生長直徑，用下述公式計算抑菌率。對照處理指正常PDA培養(yǎng)基未加入抑菌物質(zhì)，70%乙醇處理即為取70%乙醇1 mL加入100 mL的PDA培養(yǎng)基中。菌絲生長抑制率計算公式如下：

菌絲生長抑制率=

■×100%

1.3 數(shù)據(jù)分析

所有試驗結(jié)果都用DPS 7.05軟件進行統(tǒng)計分析，采用鄧肯新復(fù)極差法測驗（Duncan’s ANOVA），在P=0.05和P=0.01水平上進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取物對病原孢子萌發(fā)率的影響

由表1可知，不同濃度蒼耳提取物對大蔥紫斑病原孢子萌發(fā)率有抑制作用。結(jié)果顯示，100、50 mg/mL濃度下孢子萌發(fā)率均低于50%，而濃度為10 mg/mL時孢子萌發(fā)率為60.16%，說明該提取物在高濃度（100、50 mg/mL）下具有很好的抑制作用，且不同濃度之間差異比較明顯，從而明確了提取物在5種不同濃度下，最佳抑菌濃度為100 mg/mL。

2.2 提取物對病原菌絲生長的影響

由表2可知，在供試條件下，不同濃度蒼耳提取物對大蔥紫斑病菌均有一定的抑制活性。結(jié)果表明，在100、50、10 mg/mL的濃度下排除乙醇干擾（相加或相減作用）影響，抑制率大于60%。在1 mg/mL蒼耳提取物的抑制率為46.4%，而0.1 mg/mL蒼耳提取物的抑制作用不明顯。表明蒼耳提取物在100、50、10 mg/mL較高濃度下具有較高抑制大蔥紫斑病菌的活性。

3 結(jié)論與討論

利用超聲波輔助提取法提取蒼耳植物提取物，并對提取物進行了抑菌活性試驗。結(jié)果表明，不同濃度的蒼耳提取物對大蔥紫斑病菌均有一定抑制活性，在100、50 mg/mL濃度下，大蔥紫斑病原孢子的萌發(fā)率低于50%，對菌絲的抑制率大于60%。說明該提取物具有很好的抑制作用，且不同濃度之間的抑制作用差異比較明顯，從而明確了提取物在5種不同濃度下，最佳抑菌濃度為100 mg/mL。

從植物提取物中尋找有生物活性的物質(zhì)，是開發(fā)、研制新型農(nóng)藥的有效途徑之一[9]。植物提取液中含有大量的化學(xué)物質(zhì)，如萜烯類、生物堿、類黃酮、甾體、酚類、獨特的氨基酸和多糖等，均具有殺蟲和抗菌活性。以植物為原料進行植物源農(nóng)藥的研制與開發(fā)已成為世界各國農(nóng)藥研發(fā)的熱點。

參考文獻：

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