月經病虛寒證患者T細胞亞群與生殖激素的變化＊

劉艷芹，段彥蒼，杜惠蘭

(河北醫(yī)科大學中西醫(yī)結合學院，石家莊 050091)

虛寒證在人群中患病率為9.95%，而女性(13.21%)明顯高于男性(5.56%)［1］。虛寒型月經病為女性常見病，故擬以月經病虛寒證患者為研究對象，研究正常人、虛寒型月經病患者T細胞亞群與生殖激素的相關關系，初步探討月經病虛寒證的部分發(fā)病機制，現(xiàn)總結報告如下。

1 研究對象

1.1 一般資料

2006年10月至2007年9月在河北醫(yī)科大學中醫(yī)學院門診部、河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院生殖中心就診，符合月經病虛寒證納入與排除標準的患者30例，為月經病虛寒證組(簡稱“虛寒組”)，其中痛經10例，月經后期12例，月經過少8例;年齡最大44歲，最小22歲，平均年齡(29.77±5.75)歲。選取正常健康女性志愿者30例為正常組，年齡最大40歲，最小20歲，平均年齡(28.57±6.02)歲，2組之間年齡分布均衡差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 月經病虛寒證診斷標準

參照《虛寒證辨證因子等級量化標準的研究》［2］、《典型虛寒證的辨證統(tǒng)計分析》［3］、《中醫(yī)證候辨治規(guī)范》［4］和《中醫(yī)婦科學》［5］制定。

1.2.1 虛寒證診斷標準 主證:四肢發(fā)冷、畏寒怕冷、身體蜷臥、喜溫喜暖。次證:面色蒼白、小便清長、大便稀溏、沉遲無力或沉細弱者、舌淡苔白而潤或兼滑或舌體胖嫩者。具備虛寒證主證2項以上、次證1項以上可診斷為虛寒證。

1.2.2 月經病診斷標準 ①痛經:經期或行經前后，出現(xiàn)周期性小腹疼痛，或痛引腰骶;②月經后期:月經周期延后7d以上;③月經過少:月經周期基本正常，月經量較以往明顯減少，甚或點滴即凈，或小于30ml，或經期少于2d。具備以上1項以上、連續(xù)出現(xiàn)2個月經周期以上者。

1.2.3 納入與排除標準 納入標準:同時具備虛寒證和月經病的診斷標準，年齡為18～45周歲;排除標準:除外腎上腺、甲狀腺、垂體等內分泌腺功能異常、心腦血管疾病、肝腎疾病、神經、精神系統(tǒng)疾病、血液病、卵巢腫瘤、生殖器官器質性病變患者，3個月內服用避孕藥或服用過其他含有激素類藥物的患者。

2 材料與方法

2.1 試劑

E2、P、T、FSH、LH 放射免疫分析試劑盒為天津九鼎醫(yī)學生物有限公司產品，IgG1FITC、CD3-PC5、PerCP、CD4-PE、CD8-PE 均為 BeckMan-Coulter公司產品，CD30-FITC為Caltag公司產品。

2.2 方法

2.2.1 生殖激素檢測 E2、P、T、FSH、LH采用放射免疫分析法，按試劑盒說明書同批檢測。于經期第2天清晨空腹取坐位，肘靜脈采血6ml離心，取血清置－20℃冰箱備檢。

2.2.2 T細胞亞群檢測 于經期第2天清晨空腹，肘靜脈采血1ml，迅速將血標本移至無菌含抗凝劑的塑料試管中混勻，于24h內檢測。取流式專用試管3支，分別標記為CD3/CD4/IgG1(為對照管)、CD3/CD4/CD30、CD3/CD8/CD30，然后加入相應熒光標記的單抗(IgG1FITC:10ul、CD3:5ul;CD4:10ul;CD8:10ul、CD30:10ul)。分別加入標本各50ul，渦旋混勻，室溫避光反應20min;加入溶血素50ul，渦旋混勻，室溫避光反應10min;加入純水500ul，渦旋混勻，室溫避光反應10min;觀察溶血完全后加 PBS 3ml，1200r/min離心3～5min棄上清，留細胞沉淀，4℃保存，備上機。上機分析應用Cellquest軟件，每個標本攝取10000個細胞。以FSC/SSC設門，圈定淋巴細胞群進行分析，結果由該軟件自動統(tǒng)計。

2.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，兩變量采用獨立樣本比較 t檢驗，相關關系用直線相關分析，以Pearson相關系數(shù)表示，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 月經病虛寒證患者生殖激素水平的變化

表1顯示，與正常組比較，虛寒組患者血清E2、LH降低(P＜0.05)，T、FSH 顯著降低(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學意義;P有降低趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。

表1 虛寒組與正常組性激素含量比較(±s)

表1 虛寒組與正常組性激素含量比較(±s)

注:與正常組比較:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

組 別 例數(shù) E2(pg/ml)T(ng/dl)P(ng/ml)FSH(mIU/ml)LH(mIU/ml)虛寒組 30 63.35±16.33▽ 42.60±16.35▽▽ 0.82±0.34 5.64±2.46▽▽ 5.25±1.84▽.88 6.76±2.28正常組 30 74.03±20.03 52.77±12.65 1.67±0.50 7.24±1

3.2 月經病虛寒證患者外周血T細胞亞群的變化

表2顯示，與正常組比較，虛寒組病人外周血Th1細胞升高(P ＜0.01)，Th2、Tc2、Tc1細胞、Th2/Th1降低(P＜0.01)，Tc2/Tc1降低(P＜0.05)，均有統(tǒng)計學意義。

表2 虛寒組與正常組Th2、Th1、Tc2、Tc1含量比較(±s)

表2 虛寒組與正常組Th2、Th1、Tc2、Tc1含量比較(±s)

注:與正常組比較:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

組 別 例數(shù)Th2 Th1 Th2/Th1 Tc2 Tc1 Tc2/Tc1虛寒組 30 1.439±0.67▽▽ 41.44±5.30▽▽ 0.04±0.02▽▽ 4.11±1.68▽▽ 13.02±2.10▽▽ 0.33±0.17▽8 16.28±3.29 0.73±0.44正常組 30 2.28±1.25 38.08±4.32 0.06±0.04 10.63±2.5

3.3 月經病虛寒證患者外周血T細胞亞群與生殖激素的關系

研究結果表明，血清Th2細胞、Th2/Th1與E2呈顯著正相關(r=0.545，P＜0.01;r=0.580，P＜0.01)，Th1細胞與 E2呈負相關(r=－0.456，P＜0.05)，Th2、Tc2細胞、Th2/Th1與 T呈正相關(r=0.549，P ＜0.01;r=0.509，P ＜0.01;r=0.399，P ＜0.05)，Th1細胞與FSH呈負相關(r=－0.399，P＜0.05)，均有統(tǒng)計學意義。

4 討論

中醫(yī)認為，寒為陰邪，易傷陽氣，陽氣受損則失去正常溫煦氣化之作用。寒性凝滯，性主收引，可使血脈運行不暢。《素問·舉痛論》說:“寒氣入經而稽遲，泣而不行，客于脈外則血少;客于脈中則氣不通。”寒邪致病又分為外寒與內寒，由于內寒是陽微氣虛、生化功能不足的一種表現(xiàn)，故又稱為“虛寒”。在婦產科臨床中則以虛寒證較多［6］，虛寒證在人群中患病率高達9.95%，且女性(13.21%)明顯高于男性(5.56%)［1］。月經病虛寒證的主要病機是機體陽氣不足、虛寒內生，使沖任胞宮失煦或陽虛運血遲滯引起沖任瘀阻?！妒酚洝}公傳》云:“內寒，月事不下也?！薄陡登嘀髋啤吩?“后期而來少，血寒而不足?！薄毒霸廊珪D人規(guī)》云:“凡血寒者，經必后期而至。然血何以寒?亦惟陽氣不足，則寒從內生，而生化失期，是即所謂寒也?！眳堑聺h《醫(yī)理輯要》說:“易寒為病者，陽氣素弱?！比魦D女素體陽虛，再加以生活不節(jié)，如過度貪涼飲冷，冒雨涉水，或內傷久病陽氣耗傷則寒從內生，陽氣不運，影響沖任胞宮的功能，子宮失煦，胞脈失養(yǎng)，排經欠暢，溢而無源，經血凝滯，臨床上表現(xiàn)為月經過少、月經后期、閉經、痛經等虛寒型月經病。

Tc1、Th1細胞為Ⅰ型 T淋巴細胞，Tc2、Th2細胞為Ⅱ型T淋巴細胞，Th0細胞按一定比例向Th1、Th2細胞分化，兩者具有相互調節(jié)、相互制約的特點，處于相對平衡狀態(tài)，維持機體正常的細胞免疫和體液免疫［7］。其中Tc1與Th1作用相似，Tc2與Th2作用相似［8～10］。Ⅰ/Ⅱ型T淋巴細胞極性漂移是許多疾病發(fā)生發(fā)展的病理基礎，一方優(yōu)勢必然引起另一方弱勢［11］，若Ⅰ/Ⅱ型細胞的數(shù)量和功能發(fā)生異常，機體就會出現(xiàn)免疫功能紊亂，并發(fā)生一系列病理變化。Ⅰ、Ⅱ型T淋巴細胞之間的比例失衡決定著免疫反應的方向，不同的病理過程可以特征化為向Ⅰ型或Ⅱ型免疫反應的極化［12］。

內分泌系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)在各個系統(tǒng)的生理病理反應中起著重要的信息傳遞和調節(jié)作用［13］，二者相互調節(jié)。一方面，免疫細胞所分泌的細胞因子如白細胞介素(IL)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉化生長因子(TGF)等不僅對HPO軸發(fā)揮自分泌、旁分泌調控作用，并有可能作為HPO軸反饋調節(jié)中的傳遞信號之一，在機體的生殖方面發(fā)揮重要作用。另一方面，性激素可能通過調節(jié)T細胞受體的信號系統(tǒng)、T淋巴細胞和抗原提呈細胞(APC)活化分子的表達、細胞因子基因的轉錄和翻譯等影響免疫系統(tǒng)［14］。一般認為，E2是免疫刺激性激素，T是免疫保護性激素［15］，雄性激素可促進 Th0細胞向 Th1細胞分化［16］。

FSH主要功能是促進卵泡的生長發(fā)育，并激活卵泡顆粒細胞內的芳香化酶，使雄激素轉化為雌激素。卵巢間質細胞及卵泡膜細胞上有LH受體，LH與之結合后啟動細胞內系列酶合成雄激素。本研究中月經病虛寒證患者血清FSH、LH、E2、T減少，F(xiàn)SH分泌減少影響了卵泡發(fā)育，而LH水平降低，導致間質細胞膜及泡膜細胞膜合成T減少，二者導致E2合成分泌減少。亦可能是月經病虛寒證患者盆腔局部深部溫度較低［17］，影響卵巢血供，造成E2、T合成分泌減少。總之，月經病虛寒證機體生殖內分泌系統(tǒng)處于抑制狀態(tài)，從而表現(xiàn)為月經后期、月經量少和閉經等。

陽氣對于人體具有溫煦、推動、防御等功能，其部分作用與現(xiàn)代醫(yī)學的免疫功能具有相通之處［18］。中醫(yī)證型與TH細胞具有相關性，不同中醫(yī)證型的TH細胞具有不同的特點［19，20］。本研究中，與正常人比較月經病虛寒證患者Th2、Tc2、Tc1細胞降低，Th1細胞升高，Th2/Th1、Tc2/Tc1降低。提示月經病虛寒證可能與機體Ⅰ/Ⅱ型T淋巴細胞有關，即Ⅰ/Ⅱ型T淋巴細胞的極性向Ⅰ型T淋巴細胞偏移，Ⅱ型T淋巴細胞處于弱勢，機體防御功能下降導致陽虛生內寒、沖任胞宮失煦進而引起本病證。

本實驗相關性研究顯示，月經病虛寒證患者Th2、Tc2水平與血清生殖激素呈正相關，Th1水平與血清生殖激素呈負相關。推測虛寒型月經病的發(fā)生與生殖激素分泌受到抑制、免疫調節(jié)功能紊亂、體液免疫功能低下有關。

［1］陳冬梅，杜惠蘭，蘇健，等.虛寒證病因學的流行病學調查［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2007，28(17):1618-1620.

［2］王米渠，嚴石林，吳斌，等.虛寒證辨證因子等級量化標準的研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(4):249-250.

［3］吳斌，王米渠，嚴石林，等.典型虛寒證的辨證統(tǒng)計分析［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2004，13(5):561-562.

［4］冷方南.中醫(yī)證候辨治規(guī)范［S］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1989:263-264.

［5］羅元愷，曾敬光.中醫(yī)婦科學［M］.上海:上海科學技術出版社，1986:53-58.

［6］羅元愷，曾敬光.中醫(yī)婦科學［M］.上海:上?？茖W技術出版社，1996:32.

［7］H ralph Schumacher，Klippel JH，Koopman WJ，et al.Primer on rheumatic diseases［M］.Amta:The Arthritis Foundatin，1993:46.

［8］Chen S，Hu D，Shi X，et al.The relationship between Th1/Th2-type cells and disease activity in patient with systemic lupus erythematosus［J］.Chin Med J(Engl)，2000，113(10):877-880.

［9］F D Finkelman.Relationships among antigen presentation，cytokines，immune deviation，and autoimmune disease［J］.J ExP Med，1995，182(2):279-282.

［10］R A.Seder，G G.Le Gros The functional role of CD8+T helper type 2 cells［J］.J ExP Med，1995，181(1):5-7.

［11］O’Garra A，Arai N.The molecular basis of T helper1 and T helper 2 cell differentiation ［J］.Trends Cell Biol，2000，10(12):542-250.

［12］劉慶國.T亞群I、Ⅱ型細胞在造血干細胞移植供、受者中的比例變化研究［D］.北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學博士論文，2005.

［13］Sternberg EM. Neuroendocrine regulation ofautoimmune/inflammatory disease ［J］.J Endocrinology，2001，169(3):429-435.

［14］Ostensen M.Sex hormones and pregnancy in rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus［J］.Ann NY Acad Sci，1999，876:131-143.

［15］Mcmurray R，Keisler D，Izui S，et al.Hyperprolactinemia in male NZB/NZW(B/W)F1 mice:accelerated autoimmune disease with normal circulating testosterone［J］.Clin Immunol Immunopathol，1994，71(3):338-343.

［16］盧志明，車至香，孫汶生，等.SLE患者性激素水平與Th1/Th2的免疫應答［J］.國外醫(yī)學·臨床生物化學與檢驗學分冊，2001，22(6):308-309.

［17］杜惠蘭，柴麗娜.月經病寒凝血瘀證的病理機制初探［J］.中醫(yī)雜志，1993，34(70):428-430.

［18］王曉燕.隔藥餅灸對虛寒胃痛和脾虛泄瀉患者免疫功能的影響［J］.中國針灸，2004，24(11):757.

［19］李峻，周永明，胡明輝，等.慢性再生障礙性貧血患者中醫(yī)證型與T-bet/GATA-3相關信號通路、Th亞群的相關性［J］.中醫(yī)雜志，2011，52(4):303-306.

［20］姜永紅，姜之炎，馬晶，等.小兒支原體肺炎中醫(yī)證候與TH細胞相關性研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2011，18(2):27-28.