妥曲珠利納米乳的制備及質(zhì)量評價

張志美，鄧旭明，沈志強,郭時金，付石軍

(1.吉林大學(xué) 畜牧獸醫(yī)學(xué)院，吉林 長春 130062；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600; 3.山東綠都安特動物藥業(yè)有限公司，山東 濱州 256600)

妥曲珠利(toltrazuril)化學(xué)名為甲基三嗪酮，屬三嗪酮類高效、廣譜、低毒抗球蟲藥[1]，是德國拜耳公司于20世紀(jì)80年代開發(fā)的動物專用抗球蟲藥物，對所有艾美爾球蟲在機體細(xì)胞內(nèi)的各個發(fā)育階段均有較強作用，對耐藥蟲株也十分敏感，是目前產(chǎn)生耐藥性最慢的藥物[2]，主要用于家禽、兔、羔羊、仔豬等動物的球蟲病防治[3-4]，在歐洲、加拿大及日本等國家應(yīng)用廣泛。納米乳作為一種新型藥物載體，可以增加疏水性藥物的溶解度，促進(jìn)藥物的胃腸道吸收，提高藥物的藥效和生物利用度，同時發(fā)揮良好的緩釋作用[5-6]。目前妥曲珠利臨床應(yīng)用劑型只有妥曲珠利溶液，劑型較為單一，臨床應(yīng)用受到較大限制。為擴(kuò)大妥曲珠利的臨床應(yīng)用，給臨床用藥提供更多選擇，同時，增加藥物的口服溶解度，延長藥物作用時間，試驗研制了妥曲珠利納米乳，并對其有關(guān)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，以期為臨床應(yīng)用提供一種安全、長效、穩(wěn)定的抗球蟲藥物新制劑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

妥曲珠利原料(97%，湖北龍翔藥業(yè)有限公司)；液體石蠟(天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司，CP)；乙酸乙酯(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，AR)；大豆油(食用級)；肉豆蔻酸異丙酯(IPM)(浙江物美化學(xué)品有限公司)；聚氧乙烯氫化蓖麻油(RH-40)、(德國BASF公司，藥用級)；聚氧乙烯蓖麻油(EL-40)、(天津市浩元精細(xì)化工有限公司，藥用級)；新烷基酚聚氧乙烯醚(OP-10)、司盤-80(煙臺市雙雙化工有限公司，CP)；油酸、吐溫-80、乙醇、二甲基甲酰胺(煙臺市雙雙化工有限公司，AR)；1,2-丙二醇(天津市天力化學(xué)試劑有限公司、AR)；異丙醇(天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心，AR)；丙三醇(天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠，AR)；聚乙二醇400(PEG-400)(天津市博迪化工有限公司)；蘇丹III(天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中心)；亞甲基蘭(上海試劑三廠)。

1.2 試驗方法

納米乳是由表面活性劑、助表面活性劑、油相及水相構(gòu)成的透明穩(wěn)定的膠體分散體系，本研究在篩選合適表面活性劑、助表面活性劑及油相的基礎(chǔ)上，通過偽三元相圖確定最佳Km值；同時添加適當(dāng)比例的增溶劑，從而制備合格的妥曲珠利納米乳。

1.2.1 油相的選擇 在燒杯中加入25 mL油相，30 ℃水浴條件下加入妥曲珠利，考察妥曲珠利在不同油相中的溶解度。待選油相有：液體石蠟、乙酸乙酯、大豆油、IPM、油酸。

1.2.2 表面活性劑的選擇 在燒杯中加入25 mL RH-40、EL-40、OP-10、吐溫-80、司盤-80等，30 ℃水浴條件下加入妥曲珠利，考察妥曲珠利在不同乳化劑中的溶解度。

1.2.3 助表面活性劑的選擇 以吐溫-80為表面活性劑，加入助表面活性劑，混合均勻后加入油相，充分混合并逐滴加入蒸餾水，觀察體系能否形成納米乳。待選的乙醇、1,2-丙二醇、異丙醇、丙三醇、PEG-400等助表面活性劑。

1.2.4 表面活性劑與助表面活性劑比例 根據(jù)1.2.1、1.2.2及1.2.3確定的油相、表面活性劑和助表面活性劑，通過偽三元相圖確定合適的Km值。將乳化劑和助乳化劑分別按重量比(Km)2∶1、3∶1、4∶1充分混合,再與油相按1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的比例[7]混合,向其中緩慢滴加蒸餾水，邊加邊攪拌，隨著水量的增加，體系粘度突然增加，繼續(xù)滴加蒸餾水，體系又會突然由粘變稀，記錄下臨界點時水的用量。分別以油相、表面活性劑/助表面活性劑和水相作為三角形的三個頂點，繪制偽三元相圖[8]。根據(jù)乳區(qū)的大小確定最佳Km值。

1.2.5 增溶劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)的確定 為進(jìn)一步提高納米乳對妥曲珠利的載藥量，根據(jù)妥曲珠利的性質(zhì)，選用二甲基甲酰胺作為增溶劑。以表面活性劑/助表面活性劑/油相/水為藥用納米乳載體,考察在體系中不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的二甲基甲酰胺(10%、15%、20%)對納米乳形成的影響。

1.2.6 納米乳性狀及結(jié)構(gòu)類型的鑒定

1.2.6.1 妥曲珠利納米乳的性狀 將制備的妥曲珠利納米乳置于無色瓶中，觀察其性狀。取適量妥曲珠利納米乳置離心管中,12 000 r/min離心10 min,觀察體系的穩(wěn)定性。

1.2.6.2 妥曲珠利納米乳類型鑒定 將水溶性的亞甲基藍(lán)染料和油溶性的蘇丹紅染料分別滴加到同批次的納米乳中，觀察兩種染料在納米乳中的擴(kuò)散速度。若紅色擴(kuò)散快于藍(lán)色則為油包水(W/O)型納米乳，反之為水包油(O/W)型；若二者速度一樣，則為雙連續(xù)型[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 油相的選擇

試驗發(fā)現(xiàn)，在30 ℃水浴條件下，妥曲珠利在乙酸乙酯中溶解度較大，可滿足給藥要求，選定油相為乙酸乙酯。

2.2 表面活性劑的選擇

在30 ℃水浴條件下，妥曲珠利在吐溫-80中溶解度相對較大，明顯優(yōu)于RH-40、EL-40、OP-10、司盤-80，因此，選擇吐溫-80為乳化劑。

2.3 助表面活性劑的選擇

試驗表明，丙三醇和1,2-丙二醇在常溫下均可形成納米乳，但丙三醇為助表面活性劑時形成的納米乳在高溫下容易發(fā)生藥物析出，而1,2-丙二醇作為助表面活性劑可形成穩(wěn)定的納米乳，因此，選定1,2-丙二醇為助表面活性劑。

2.4 偽三元相圖確定處方

當(dāng)Km為2∶1時，形成的納米區(qū)最大，納米乳穩(wěn)定性良好，所繪制偽三元相圖見圖1。當(dāng)混合表面活性劑與油相比例為6∶4時，所形成的納米乳澄清均一，體系穩(wěn)定，長期保存及溫度變化條件下不會發(fā)生分層、破乳及藥物析出等現(xiàn)象，因此，混合表面活性劑與油相比例為6∶4。

Km=2∶1 Km=3∶1 Km=4∶1

2.5 增溶劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)的確定

當(dāng)二甲基甲酰胺為20%時，不能形成納米乳，而當(dāng)二甲基甲酰胺為15%時，形成的納米乳不穩(wěn)定，因此選擇增溶劑為10%。

2.6 妥曲珠利納米乳的制備

根據(jù)偽三元相圖確定的最佳處方比例,將乳化劑和助乳化劑均勻混合后加入油相,再按照1%妥曲珠利含量加入處方量的妥曲珠利和增溶劑至上述混合液中攪拌至完全溶解，逐滴加入蒸餾水，邊加邊攪拌混合，體系粘度增加時繼續(xù)滴加，后流動性較好，直至體系變稀形成納米乳。

2.7 納米乳性狀及結(jié)構(gòu)類型的鑒定

2.7.1 妥曲珠利納米乳的性狀 所制備納米乳為淡黃色、澄清透明液體，粘度低，流動性良好；取適量妥曲珠利納米乳置離心管中,12 000 r/min離心10 min,體系仍維持澄明,未發(fā)生分層現(xiàn)象。

2.7.2 妥曲珠利納米乳類型鑒定 在制備的妥曲珠利納米乳中，蘇丹紅擴(kuò)散快于亞甲基藍(lán)，可判定為油包水型納米乳。

3 討 論

納米乳是由油相、表面活性劑、助表面活性劑和水相按適當(dāng)比例混合形成的粒徑為10～100 nm的透明或半透明體系，具有黏度低、各向同性、熱力學(xué)與動力學(xué)穩(wěn)定等特點[10]。通過藥物溶解性考察，本試驗選定乙酸乙酯為油相、吐溫-80為表面活性劑，1,2-丙二醇為助表面活性劑。分別以油相、混合表面活性劑及水相為三角形的三個頂點，通過繪制偽三元相圖，篩選各成分的最佳比例，從而確定最終生產(chǎn)工藝。

吐溫-80為非離子型表面活性劑，具有乳化能力強、口服安全性高、不受電解質(zhì)、無機鹽及酸堿度影響等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于納米乳的制備；試驗中其它有機溶劑如1,2-丙二醇、乙酸乙酯及二甲基甲酰胺均為微毒級別，可用于口服制劑的制備。

總之，本研究制備的妥曲珠利納米乳具有生產(chǎn)工藝簡單、藥物穩(wěn)定性好等優(yōu)點。染料擴(kuò)散試驗證明，本體系為油包水型納米乳，可延長藥物在動物體內(nèi)的釋放時間，從而發(fā)揮良好的緩釋作用。

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