喉癌患者血清HMGB1水平檢測及臨床意義

湯夏冰，李 蕾，沈曉輝，陳國千＊

（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院 耳鼻咽喉科，江蘇 無錫214023；2.南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗科，江蘇 無錫214023；3.南京醫(yī)科大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院 耳鼻咽喉科，江蘇 南京210008）

研究表明，高遷移率族蛋白B1（HMGB1）作為一種核內(nèi)非組蛋白，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。HMGB1在結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌等人類惡性腫瘤組織中，均出現(xiàn)過度表達(dá)，并與腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及患者預(yù)后等密切相關(guān)［1］。新近有研究顯示，血清HMGB1水平在胃癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌中升高，可以作為血清標(biāo)志物，為評估腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后提供重要價值［2－5］，但在喉癌中尚未見報道。本研究通過檢測喉癌患者血清HMGB1水平，探討HMGB1在喉癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為喉癌的臨床診斷、治療提供實驗室檢測標(biāo)志物及理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2011－01—2011－11南京市鼓樓醫(yī)院耳鼻咽喉科31例喉癌患者血清標(biāo)本，患者術(shù)前未經(jīng)任何治療。術(shù)后病理證實為鱗狀上皮細(xì)胞癌。其中男30例，女1例，平均年齡61.6±7.2歲；聲門上型16例，聲門型13例，聲門下型2例；TNM分期（UICC 2002）T1－2期為12例，T3－4期為19例；臨床分期：Ⅰ＋Ⅱ期7例，Ⅲ＋Ⅳ期24例；頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例；病理學(xué)分級：低分化4例，中分化19例，高分化8例。同時選取15例喉部癌前病變聲帶白斑患者血清標(biāo)本，其中男12例，女3例，平均年齡58.9±6.2歲；30例健康志愿者血清標(biāo)本作為對照組，其中男27例，女3例，平均年齡59.7±5.7歲。

1.2 檢測方法

血清HMGB1濃度測定：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測［6］，血液標(biāo)本采集后＜3h分離血清，并于－80℃ 冰箱保存，人HMGB1ELISA試劑盒為日本Shino－Test公司產(chǎn)品，按產(chǎn)品使用說明書進(jìn)行分析定量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。兩組間比較采用雙側(cè)t檢驗分析，多組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 喉癌患者等血清HMGB1水平的分析

31例喉癌患者、15例聲帶白斑患者、30例健康對照者血清HMGB1水平比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；喉癌患者、聲帶白斑患者血清HMGB1水平明顯高于健康對照者（P＜0.01）；喉癌患者血清HMGB1水平明顯高于聲帶白斑患者（P＜0.01）。見表1。

表1 喉癌、聲帶白斑患者血清HMGB1水平（±s）

表1 喉癌、聲帶白斑患者血清HMGB1水平（±s）

注：與健康對照組比較，＊P＜0.01；與聲帶白斑組比較，ΔP＜0.01

組別 n HMGB1（ng／ml）30 1.67±0.48聲帶白斑組 15 2.61±0.50＊喉癌組 31 4.79±1.10＊Δ健康對照組

2.2 喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關(guān)系

喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關(guān)系，見表2。血清HMGB1水平在T3和T4期明顯高于T1和T2期（P＜0.01）；血清HMGB1水平在Ⅲ和Ⅳ期明顯高于Ⅰ和Ⅱ期（P＜0.01）；血清HMGB1水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.01）。但血清HMGB1水平與腫瘤的原發(fā)部位、分化程度均無關(guān)（P值均＞0.05）。

3 討論

高遷移率族蛋白（HMG）為一類核內(nèi)非組蛋白，因其在聚丙烯酰胺凝膠電泳中遷移速度快而得名，HMGB1是其中重要的成員之一。HMGB1最初被認(rèn)為是染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)成分，功能局限在核內(nèi)，主要參與穩(wěn)定核小體結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、參與DNA修復(fù)、DNA重組及調(diào)控類固醇激素等生命活動。1999年，Wang等［7］首先發(fā)現(xiàn)HMGB1可以釋放到胞外并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，是一種重要的晚期炎癥介質(zhì)。近年胞外HMGB1測定的臨床應(yīng)用研究已引起廣泛關(guān)注，HMGB1在結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌等人類惡性腫瘤中，均出現(xiàn)過度表達(dá)，并與腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及患者預(yù)后等密切相關(guān)。腫瘤標(biāo)志物的測定往往可提供一種低成本、非侵入的手段，用于腫瘤患者的療效監(jiān)測及預(yù)后評估，也常用于高危人群的篩查。在某些腫瘤中，通過檢測患者血清中腫瘤標(biāo)志物的含量及其變化可以反映腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和增殖情況。新近有研究顯示，血清HMGB1水平在胃癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌中升高，為評估腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后提供重要價值，但血清HMGB1水平在喉癌中的變化目前未見報道。

表2 喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關(guān)系（±s）

表2 喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關(guān)系（±s）

臨床病理特征 例數(shù) HMGB1（ng／ml） P值原發(fā)部位聲門 13 4.54±1.20 0.347聲門上 16 4.86±0.96聲門下 2 5.81±1.42分化程度高分化 8 4.42±1.22 0.453中分化 19 4.84±1.05低分化 4 5.25±1.14浸潤深度T1＋T2 12 3.92±1.07 0.001 T3＋T4 19 5.33±0.71臨床分期Ⅰ＋Ⅱ 7 3.18±0.60 0.000Ⅲ＋Ⅳ 24 5.25±0.69淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有15 5.34±0.62 0.005無16 4.27±1.17

在我們前期的研究中顯示，HMGB1在喉癌組織及癌旁正常組織中陽性表達(dá)率分別為78.7%和18.0%。本研究通過檢測血清HMGB1水平發(fā)現(xiàn)，喉癌患者、聲帶白斑患者血清HMGB1水平明顯高于健康對照者，喉癌患者血清HMGB1水平明顯高于聲帶白斑患者，血清HMGB1水平升高可能由于壞死的腫瘤細(xì)胞被動釋放或免疫細(xì)胞主動分泌到胞外或血漿。說明HMGB1在喉癌的發(fā)生中起重要作用，且有利于區(qū)分喉癌前病變、喉癌患者。研究結(jié)果表明，喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關(guān)系密切，血清HMGB1水平在T3和T4期明顯高于T1和T2期；血清HMGB1水平在Ⅲ和Ⅳ期明顯高于Ⅰ和Ⅱ期；血清HMGB1水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。提示HMGB1在喉癌的發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。Taguchi等［8］報道，HMGB1可通過與糖基化終末產(chǎn)物受體RAGE結(jié)合，激活p38、JNK及ERK1／2等絲裂原活化蛋白激酶信號通路，繼而激活MMP－2、MMP－9，后二者是纖維蛋白溶酶激活級聯(lián)的下游目標(biāo)，能引起細(xì)胞外基質(zhì)降解，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移，HMGB1在喉癌中作用的具體機制有待進(jìn)一步研究。本研究未發(fā)現(xiàn)血清HMGB1水平與腫瘤的原發(fā)部位、分化程度有關(guān)。由于本研究中研究樣本量相對較少，可能與真實分布情況有一定的誤差，對于其臨床應(yīng)用價值需要通過擴大樣本量進(jìn)一步研究。

本實驗研究結(jié)果表明，喉癌患者血清HMGB1水平升高，血清HMGB1水平檢測可作為評價喉癌前病變、喉癌患者病情變化的生物學(xué)指標(biāo)，有望成為喉癌診斷和治療的一個新靶點。

［1］Sims GP，Rowe DC，Rietdijk ST，et al.HMGB1and RAGE in inflammation and cancer［J］.Annu Rev Immunol，2010，28：367.

［2］Chung HW，Lee SG，Kim H，et al.Serum high mobility group box－1（HMGB1）is closely associated with the clinical and pathologic features of gastric cancer［J］.Journal of Translational Medicine，2009，7：38.

［3］Cheng BQ，Jia CQ，Liu CT，et al.Serum high mobility group box chromosomal protein 1is associated with clinicopathologic features in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Digestive and Liver Disease，2008，40（6）：446.

［4］Shang GH，Jia CQ，Tian H，et al.Serum high mobility group box protein 1as a clinical marker for non－small cell lung cancer［J］.Respir Med，2009，103（12）：1949.

［5］Sheng X，Du X，Zhang X，et al.Clinical value of serum HMGB1 levels in early detection of recurrent squamous cell carcinoma of uterine cervix：comparison with serum SCCA，CYFRA21－1，and CEA levels［J］.Croat Med J，2009，50（5）：455.

［6］Yamada S，Inoue K，Yakabe K，et al.High mobility group protein 1（HMGB1）quantified by ELISA with a monoclonal antibody that does not cross－react with HMGB2［J］.Clin Chem，2003，49（9）：1535.

［7］Wang H，Bloom O，Zhang M，et al.HMG－1as a late mediator of endotoxin lethality in mice［J］.Science，1999，285（5425）：248.

［8］Taguchi A，Blood DC，del Toro G，et al.Blockade of RAGE－amphoterin signaling suppresses tumour growth and metastases［J］.Nature，2000，405（6784）：354.