TopoⅡα在乳腺癌組織中表達及其與蒽環(huán)類藥物敏感性的關(guān)系

肖華伍 歐陽取長

近年來在我國，乳腺癌的發(fā)病率直線攀升，已經(jīng)成為婦女惡性腫瘤死亡的主要原因［1］。目前，化療在乳腺癌的治療中仍占有重要的地位，蒽環(huán)類藥可說是乳腺癌化療的基石，但目前尚缺乏預(yù)測化療敏感性的精確指標，也難以判斷蒽環(huán)類藥物自身治療效果和不良反應(yīng)之間的平衡點。DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱalpha(DNA topoisomcrasenⅡα，TopoⅡα)是DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ的同功酶，為各類抗腫瘤藥物的作用靶點。其分子量為170 kD，基因定位于17q21～22，以ATP供能發(fā)揮催化活性。TopoⅡα是引導(dǎo)DNA復(fù)制的1個多酶復(fù)合物的重要組成部分，在基因的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。有研究表明［2］，TopoⅡα表達最高的時候是在細胞的快速增殖期，故此可以認為細胞的增殖潛能同TopoⅡα的表達量成正比。我們應(yīng)用SP免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測TopoⅡα在乳腺癌中表達水平，并分析TopoⅡα表達與蒽環(huán)類藥物化療療效的敏感性關(guān)系，旨在為乳癌化療藥物的選擇提供科學(xué)依據(jù)，為臨床個體化治療提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取湖南省腫瘤醫(yī)院乳腺癌標本68例，均為女性，年齡22～65歲，平均年齡(45.5±6.8)歲。化療前行乳腺標本的穿刺活檢，其中HER2均為陽性，其中絕經(jīng)前患者46例，絕經(jīng)后患者22例，PR陽性11例，陰性57例，臨床分期Ⅱ期55例，Ⅲ期13例。所有患者采用蒽環(huán)類方案化療4個周期，化療前后行乳腺及腋下MRI、CT或B超檢查。根據(jù)世界衛(wèi)生組織乳腺惡性腫瘤病理分類方法［3］:浸潤性導(dǎo)管癌 44例，占64.7%;導(dǎo)管內(nèi)癌 4例，占 5.9%;髓樣癌 6例，占8.8%;腺癌和黏液性腺癌均為7例，各占10.3%。

1.2 免疫組化檢測方法

鼠抗人TopoⅡα、ER、PR、HER-2單克隆抗體購自上海麥莎生物科技有限公司，而SP試劑盒均購自北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司。全部乳腺癌組織標本都先經(jīng)過10%的甲醛固定，石臘包埋，切片的厚度為4 μm，組織切片用3%的雙氧水溶液處理10 min，然后按順序加入Ⅰ抗(抗TOPⅡ)、Ⅱ抗(抗TOPⅡ)，然后用DAB顯色和蘇木精復(fù)染后封片進行觀察。Ⅰ抗被TBS液替代，作為陰性對照;而陽性對照則采用已知的扁桃體組織。

1.3 判定標準

TopoIIα判斷標準:由兩位高年資的醫(yī)生在雙盲條件下用顯微鏡進行觀察，陽性表達是指在乳腺癌細胞核內(nèi)有棕黃色顆粒，若陽性細胞數(shù)＜5%為(－)，5%～10%為(±)，11%～50%為(+)，51%～75%為(++)，＞75%為(+++)。其中(+)～(+++)為TopoⅡα陽性患者，(－)及(±)為 TopoⅡα陰性患者。

療效判斷按1981年WHO制定的實體瘤療效評價標準:完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，穩(wěn)定(SD)，進展(PD)，總有效率(RR)=CR+PR。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 15.3的統(tǒng)計軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計。計數(shù)資料使用卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 蒽環(huán)類藥物療效與TopoⅡα表達的關(guān)系

服用蒽環(huán)類抗腫瘤藥物并且療效達完全緩解的4例患者中TopoⅡα陽性3例，占75.0%，而32例療效達部分緩解的患者中TopoⅡα陽性20例，占62.5%;26例療效達穩(wěn)定的患者中TopoⅡα陽性表達14例，占53.8%;余7例病情進展的患者中TopoⅡα陽性表達4例，占42.8%。結(jié)果表明TopoⅡα表達水平與蒽環(huán)類藥物的療效有一定相關(guān)性。

2.2 TopoⅡα表達與蒽環(huán)類藥物療效的關(guān)系

69例乳腺癌中TopoⅡα陽性表達40例，其中蒽環(huán)類藥物有效23例，有效率為57.5%，而TopoⅡα陰性表達29例中蒽環(huán)類藥物有效13例，有效率僅為44.8%，兩者差異顯著，P＜0.05，結(jié)果表明 TopoⅡα陽性患者應(yīng)用蒽環(huán)類藥物的治療效果顯著高于TopoⅡα陰性患者。

2.3 不同蒽環(huán)類方案的療效與TopoⅡα表達的關(guān)系

比較蒽環(huán)類聯(lián)合烷化劑、蒽環(huán)類聯(lián)合烷化劑及5-Fu、蒽環(huán)類聯(lián)合紫杉醇、蒽環(huán)類聯(lián)合烷化劑及紫杉醇、蒽環(huán)類聯(lián)合多西紫杉醇5種不同的蒽環(huán)類方案的療效，結(jié)果表明對蒽環(huán)類藥物有效的乳腺癌患者其聯(lián)合方案與TopoⅡα表達無顯著相關(guān)性，見表1。

表1 不同蒽環(huán)類方案的療效與TopoⅡα表達的關(guān)系

3 討論

針對乳腺癌患者預(yù)后的評估指標及與療效相關(guān)的生物學(xué)標志物是當前研究的熱門方向。DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱalpha(DNA topoisomcrasenⅡα，TopoⅡα)是DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ的同功酶，在真核細胞中同基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和修復(fù)等密切相關(guān)的1種蛋白酶，在不同類型的腫瘤細胞和組織中TopoⅡα的表達與預(yù)后具有一定的相關(guān)性。

臨床上針對TopoⅡα為靶點的抗癌藥物應(yīng)用越來越廣泛，特異性強，選擇性好，能夠選擇性地作用于癌細胞，臨床療效顯著。該類藥物統(tǒng)稱為為抑TopoⅡα抑制劑。可將這類藥物分成嵌入型和非嵌入型兩大類［4］。嵌入型藥物通過藥物結(jié)構(gòu)分子中所帶有的類似于嘧啶堿的多環(huán)類結(jié)構(gòu)，并將其植入到DNA與TopoⅡα相互結(jié)合的雙鏈中，干擾TopoⅡα發(fā)揮正常的作用，抑制腫瘤細胞DNA鏈與TopoⅡα的再連接，從而導(dǎo)致DNA雙鏈不穩(wěn)定而發(fā)生斷裂致使細胞死亡。此類藥物以蒽環(huán)類藥物為代表(例如阿霉素、依托泊甙等)。其表達的減少將會造成響腫瘤對化療的敏感性下降。有研究表明［5］，腫瘤細胞對于蒽環(huán)類抗腫瘤藥物的敏感程度同其細胞內(nèi)TopoⅡα蛋白的表達水平密切相關(guān)。非嵌入型就是指［6-7］，該類藥物能夠直接同TopoⅡα或著DNA雙鍵結(jié)合，從而干擾酶發(fā)揮正常的功能，以鬼臼乙叉甙、替尼泊甙等為其典型代表。

故此，TopoⅡα在乳腺癌組織中的表達與其預(yù)后的相關(guān)指標存在一定程度上的聯(lián)系，乳腺癌組織生長速度越快，浸潤程度越深，越廣泛，TopoⅡα表達的陽性越多，乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移則越嚴重，由此表明腫瘤組織中TopoⅡα的表達水平與疾病的進展同樣呈正相關(guān)［8-11］。此外，TopoⅡα同Her-2作為兩個相互獨立的預(yù)后和治療相關(guān)因子，其免疫組化的陽性表達具有相類似的臨床意義［12-14］。對于乳腺癌患者在進行化療治療前若對于TopoⅡα的表達水平進行檢測，從而有助于醫(yī)生判斷患者的預(yù)后并相應(yīng)地選擇合適的化療方案，從而有針對性地提高療效。

TopoⅡα在乳腺癌組織中的表達與蒽環(huán)類藥物輔助化療中的研究結(jié)果表明［15-16］，TopoⅡα陽性組的患者采用蒽環(huán)類藥物化療方案中總體生存期顯著高于TopoⅡα陰性組患者。此外，還有實驗比較TopoⅡα高表達的晚期乳癌患者采用蒽環(huán)類藥物和紫杉醇類藥物的化療效果，結(jié)果表明［17-18］TopoⅡα陽性表達的患者給予單一藥物阿霉素進行治療，其癥狀緩解率相對較高，表明體內(nèi)TopoⅡα蛋白高表達的乳腺癌患者依然可以通過蒽環(huán)類抗腫瘤藥物化療取得顯著的療效。

在此次研究過程中以接受過蒽環(huán)類藥物新輔助化療的患者作為所研究的對象，對TopoⅡα在乳腺癌組織中的表達情況進行檢測和分析，研究結(jié)果表明TopoⅡα陽性組患者蒽環(huán)類藥物治療療效顯著要高于TopoⅡα陰性組的患者，而在比較含蒽環(huán)類藥物的不同化療方案療效時，TopoⅡα的表達水平?jīng)]有顯著的差異?？偠灾?，TopoⅡα能夠評估乳腺癌的生物學(xué)行為及其預(yù)后，預(yù)測蒽環(huán)類藥物對于化療的敏感程度，對于相應(yīng)地選擇合適的治療方案具有至關(guān)重要的指導(dǎo)價值。

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