HPLC法測定勞木布阿瓦中甘草苷含量

魯瑞芹

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10ATvp泵，SCL-10 Avp型系統(tǒng)控制器，SPD-10Avp型檢測器，CLASS-VP色譜工作站。島津 μ V-1700型紫外-可見分光光度計，德國 Satori μ s BP211 d型電子天平[2]。

1.2 試藥 甘草苷對照品(批號:111610-200503);中國藥品生物制品檢定所;甲醇、乙醇、乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。原藥材由烏蘭察布市中心醫(yī)院提供，由烏蘭察布市藥檢所中藥室模擬處方。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 流動相:乙腈-0.5%冰乙酸(19∶81)。柱溫30℃。流速:1.0 ml/min。進(jìn)樣量:10 μl。檢測波長276nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計不得低于4000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取甘草苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率50 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 ml，置 50 ml量瓶中，用 20%乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得[3]。

2.4 陰性對照溶液的制備 取按處方比例制備的缺甘草的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備法制成陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液 、陰性對照溶液各10 μl，注入色譜儀，同法測定，結(jié)果在峰相應(yīng)的位置上，陰性對照無干擾[4]，結(jié)果見圖 1，2，3

圖1 甘草苷高效液相色譜

圖2 樣品高效液相色譜圖

2.6 線性關(guān)系 取濃度為73.4 μg/ml的對照品溶液，精密吸取 0.5、1、2、3、4、5 ml溶液分別置 5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各取10 μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析[5]，得回歸方程:Y=2.658640X-381.25

r=0.9999，表明甘草苷在0.0734 μg～0.7340 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖3 陰性高效液相色譜圖

2.7 精密度 取同一模擬樣品供試品6份，各約1 g，精密稱定，分別按含量測定項下方法操作，測定每份供試品含量，RSD為0.85%，表明精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗 取模擬樣品，精密稱定5份，按‘2.3'項下方法測定甘草苷的含量，平均為 3.243 mg/g，RSD為0.72%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進(jìn)樣測定甘草苷峰面積，RSD為0.49%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收試驗 取供試品(模擬樣品，含量3.215 mg/g)9份，各約0.3 g，精密稱定，在其中3份中各精密加入用甲醇配制的甘草苷對照品溶液(濃度為0.40 mg/ml)1 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的50%)、另3份中各精密加入上述對照品溶液2 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的100%)、其余3份中各精密加入上述對照品溶液3 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的150%)分別按含量測定項下的方法操作，測定每份供試品含量[6]，計算回收率，結(jié)果平均回收率為99.65%。見表1。

表1 甘草苷加樣回收試驗結(jié)果

2.11 樣品含量測定 分別吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入色譜儀，測定6份樣品的含量，結(jié)果分別 3.221、3.219、3.250 、3.285 、3.256 、3.230 mg/g。

3 討論

甘草中的甘草苷含量測定方法采用反相色譜法結(jié)果準(zhǔn)確易行，重現(xiàn)性好。

[1]國家藥典委員會.一部.中國藥典，2005.

[2]李翠，徐必學(xué)，張永萍，梁光義.甘草中甘草苷的含量測定方法研究.時珍國醫(yī)國藥，2009，(03).

[3]劉育辰.甘草質(zhì)量評價多指標(biāo)檢測方法的建立及其在不同來源甘草藥材鑒別上的應(yīng)用.北京中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[4]HPLC法測定養(yǎng)血愈風(fēng)酒中人參皂苷Rg1的含量.2003全國苗醫(yī)藥學(xué)術(shù)研討會特輯，2003.

[5]段天璇，馬長華，王文全，閻永紅，魏勝利，李梢.HPLC-MS法鑒定甘草的指紋圖譜.中國藥師，2009，(04).

[6]伍蔚萍，閻宏濤，孫文基.HPLC法測定甘草中甘草苷的含量.藥物分析雜志，2004，(04).