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    HPLC法測定勞木布阿瓦中甘草苷含量

    2013-11-21 03:26:16魯瑞芹
    中國實用醫(yī)藥 2013年4期
    關(guān)鍵詞:法測定甘草乙腈

    魯瑞芹

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器 LC-10ATvp泵,SCL-10 Avp型系統(tǒng)控制器,SPD-10Avp型檢測器,CLASS-VP色譜工作站。島津 μ V-1700型紫外-可見分光光度計,德國 Satori μ s BP211 d型電子天平[2]。

    1.2 試藥 甘草苷對照品(批號:111610-200503);中國藥品生物制品檢定所;甲醇、乙醇、乙腈為色譜純,水為高純水,其他試劑均為分析純。原藥材由烏蘭察布市中心醫(yī)院提供,由烏蘭察布市藥檢所中藥室模擬處方。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件 流動相:乙腈-0.5%冰乙酸(19∶81)。柱溫30℃。流速:1.0 ml/min。進(jìn)樣量:10 μl。檢測波長276nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計不得低于4000。

    2.2 對照品溶液的制備 精密稱取甘草苷對照品適量,加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。即得。

    2.3 供試品溶液的制備 取本品1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇20 ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率500W,頻率50 kHz)30 min,取出,放冷,再稱定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液5 ml,置 50 ml量瓶中,用 20%乙腈稀釋至刻度,搖勻,即得[3]。

    2.4 陰性對照溶液的制備 取按處方比例制備的缺甘草的陰性對照樣品,按供試品溶液的制備法制成陰性對照溶液。

    2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液 、陰性對照溶液各10 μl,注入色譜儀,同法測定,結(jié)果在峰相應(yīng)的位置上,陰性對照無干擾[4],結(jié)果見圖 1,2,3

    圖1 甘草苷高效液相色譜

    圖2 樣品高效液相色譜圖

    2.6 線性關(guān)系 取濃度為73.4 μg/ml的對照品溶液,精密吸取 0.5、1、2、3、4、5 ml溶液分別置 5 ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,各取10 μl進(jìn)樣,按上述色譜條件測定,以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析[5],得回歸方程:Y=2.658640X-381.25

    r=0.9999,表明甘草苷在0.0734 μg~0.7340 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

    圖3 陰性高效液相色譜圖

    2.7 精密度 取同一模擬樣品供試品6份,各約1 g,精密稱定,分別按含量測定項下方法操作,測定每份供試品含量,RSD為0.85%,表明精密度良好。

    2.8 重現(xiàn)性試驗 取模擬樣品,精密稱定5份,按‘2.3'項下方法測定甘草苷的含量,平均為 3.243 mg/g,RSD為0.72%,表明本方法重復(fù)性良好。

    2.9 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液,分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進(jìn)樣測定甘草苷峰面積,RSD為0.49%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.10 加樣回收試驗 取供試品(模擬樣品,含量3.215 mg/g)9份,各約0.3 g,精密稱定,在其中3份中各精密加入用甲醇配制的甘草苷對照品溶液(濃度為0.40 mg/ml)1 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的50%)、另3份中各精密加入上述對照品溶液2 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的100%)、其余3份中各精密加入上述對照品溶液3 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的150%)分別按含量測定項下的方法操作,測定每份供試品含量[6],計算回收率,結(jié)果平均回收率為99.65%。見表1。

    表1 甘草苷加樣回收試驗結(jié)果

    2.11 樣品含量測定 分別吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μl,注入色譜儀,測定6份樣品的含量,結(jié)果分別 3.221、3.219、3.250 、3.285 、3.256 、3.230 mg/g。

    3 討論

    甘草中的甘草苷含量測定方法采用反相色譜法結(jié)果準(zhǔn)確易行,重現(xiàn)性好。

    [1]國家藥典委員會.一部.中國藥典,2005.

    [2]李翠,徐必學(xué),張永萍,梁光義.甘草中甘草苷的含量測定方法研究.時珍國醫(yī)國藥,2009,(03).

    [3]劉育辰.甘草質(zhì)量評價多指標(biāo)檢測方法的建立及其在不同來源甘草藥材鑒別上的應(yīng)用.北京中醫(yī)藥大學(xué),2011.

    [4]HPLC法測定養(yǎng)血愈風(fēng)酒中人參皂苷Rg1的含量.2003全國苗醫(yī)藥學(xué)術(shù)研討會特輯,2003.

    [5]段天璇,馬長華,王文全,閻永紅,魏勝利,李梢.HPLC-MS法鑒定甘草的指紋圖譜.中國藥師,2009,(04).

    [6]伍蔚萍,閻宏濤,孫文基.HPLC法測定甘草中甘草苷的含量.藥物分析雜志,2004,(04).

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