肺炎支原體肺炎患兒誘導(dǎo)痰液中白細(xì)胞介素-4及γ-干擾素檢測的意義

孫 節(jié),程 遙,蔡紅珠,熊 艷,范典標(biāo),李 鋒

(上海市第六人民醫(yī)院金山分院兒科,上海,201599)

肺炎支原體(MP)是引起兒童和青壯年急性呼吸道感染的常見病原,發(fā)病機(jī)制學(xué)說主要包括呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫學(xué),而關(guān)于其所致肺炎的發(fā)病機(jī)制目前仍不十分清楚。有研究[1]認(rèn)為,體液免疫和細(xì)胞免疫共同參與了肺炎支原體肺炎(MPP)的發(fā)病過程,機(jī)體輔助性Th1細(xì)胞/輔助性Th2細(xì)胞(Th1/Th2)失衡,導(dǎo)致免疫功能紊亂,在MPP的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。臨床上通過測定細(xì)胞因子變化,將白細(xì)胞介素-4(IL-4)活性作為Th2功能指標(biāo),干擾素(IFN-γ)活性作為 Th1功能指標(biāo),以間接反映Th1/Th2的變化[2-3]。本研究對MPP患兒誘導(dǎo)痰中IL-4及IFN-γ進(jìn)行了檢測,皆在探討其在MPP免疫發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年5月—2012年12月本院收治的確診MPP患兒68例,所有患兒均符合《實(shí)用兒科學(xué)》(第7版)[2]中MPP的診斷標(biāo)準(zhǔn),且通過微量顆粒凝集法測定血清MP-IgM抗體陽性,急性期未經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、激素及免疫調(diào)節(jié)劑治療,以及恢復(fù)期臨床癥狀、體征及胸部X線表現(xiàn)消失或明顯減輕。其中男46例,女 22例;年齡3～14歲,平均(6.33±2.25)歲。將患兒根據(jù)病情程度分為輕癥組43例和重癥組25例,輕癥組為肺部體征輕,胸部X線表現(xiàn)為支氣管肺炎改變或間質(zhì)性肺炎改變;重癥組為肺部體征明顯,有實(shí)變體征,胸部X線表現(xiàn)為大葉性肺炎改變或有胸腔積液,和(或)有肺外并發(fā)癥。同時(shí)選擇同期30名兒科門診體檢正常的兒童作為對照組,其中男18例,女 12例;年齡 3～13歲,平均(6.33±2.25)歲。病例組與對照組年齡、性別比較無顯著差異(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

痰液誘導(dǎo)參照pin等[3]方法采集,誘導(dǎo)前漱口咽部,以清除口咽、后鼻部污染物。用3%高滲鹽水超聲霧化吸入,時(shí)間<30 min,有痰時(shí),將痰咳出至一清潔平皿中,選痰標(biāo)本時(shí),取棄唾液符合標(biāo)準(zhǔn)的痰液1 mL(痰圖片鏡下見柱狀上皮細(xì)胞和較多的吞噬細(xì)胞、鱗狀上皮細(xì)胞<20%),加入等滲痰液保護(hù)液,漩渦振蕩3～5 min使其成均勻狀態(tài),2000 r/min,4℃以下離心10 min,取上清液,置-70℃冰箱內(nèi)保存待測。

分別選取白介素-4(IL-4)及干擾素γ(IFN-γ)酶聯(lián)免疫試劑盒,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ的含量。

2 結(jié) 果

2.1 不同病期MPP患兒與對照組誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ含量比較

急性期患兒誘導(dǎo)痰IL-4含量和IL-4/IFN-γ比值均顯著高于恢復(fù)期患兒及對照組兒童,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而恢復(fù)期患兒與對照組兒童 IL-4、IFN-γ含量及IL-4/IFN-γ比值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 不同病期MPP患兒與對照組誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ含量比較()

表1 不同病期MPP患兒與對照組誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ含量比較()

與恢復(fù)期比較,＊＊P<0.01;與對照組比較,##P<0.01。

組別 例數(shù) IL-4/(μ g/L) IFN-γ/(μ g/L) IL-4/IFN-γ急性期 68 12.47±3.28＊＊##54.68±10.41 0.23±0.19＊＊##恢復(fù)期 59 5.12±3.42 52.78±6.880.15±0.14對照組 30 4.23±3.56 51.24±8.450.14±0.12

2.2 2組患兒急性期與恢復(fù)期誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ含量比較

急性期患兒中,輕癥組誘導(dǎo)痰IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值顯著低于重癥組,且IL-4含量顯著高于恢復(fù)期輕癥組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);急性期重癥組IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值顯著高于恢復(fù)期重癥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 2組患兒急性期與恢復(fù)期誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ含量比較()

表2 2組患兒急性期與恢復(fù)期誘導(dǎo)痰IL-4及IFN-γ含量比較()

與重癥組比較,＊P<0.05,＊＊P<0.01;與恢復(fù)期比較,#P<0.05,##P<0.01。

分期 組別 例數(shù) IL-4/(μ g/L) IFN-γ/(μ g/L) IL-4/IFN-γ急性期輕癥組 4310.24±3.02＊＊## 53.88±8.79 0.18±0.15＊重癥組 2513.36±3.83## 56.27±11.45 0.27±0.17#恢復(fù)期輕癥組 37 4.87±3.39 51.58±6.75 0.13±0.12重癥組 226.12±4.11 54.11±6.92 0.16±0.16

3 討 論

研究[4-5]表明,MPP除與病原直接侵犯有關(guān)外,還與免疫紊亂、免疫失衡等有密切聯(lián)系,是免疫性疾病的一種,體液免疫和細(xì)胞免疫共同參與MPP發(fā)病過程。Th1/Th2反應(yīng)在人類肺疾病中的作用已經(jīng)引起人們的關(guān)注,Th1細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-2、IL-12、TNF-β 等促炎癥介質(zhì) ,可增強(qiáng)殺傷炎癥細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用,介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答[6]。Th2細(xì)胞可產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子,以抗炎癥介質(zhì)為主,促進(jìn)抗體產(chǎn)生,介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。正常情況下,Th1/Th2通過分泌細(xì)胞因子,彼此調(diào)節(jié),相互制約,相對平衡,以維持正常的免疫狀態(tài)。研究[7]認(rèn)為,MPP患兒存在Th1/Th2失衡,Th2反應(yīng)占優(yōu)勢,IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值的增高程度對判斷MPP病情輕重具有重要意義。Hacken等[8]研究證實(shí),在MP感染的哮喘患者中血清IL-4增加,提示MP感染Th2反應(yīng)占優(yōu)勢。

MPP治療除使用有效抗生素治療外,重癥患者可給予激素治療,是否需要外來IFN-γ干預(yù)或應(yīng)用抗IL-4單抗及受體拮抗免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)行干預(yù),眾說不一。Atkinson等[9]認(rèn)為,IFN-γ干預(yù)可能對降低抗體Th2樣反應(yīng),使Th2免疫反應(yīng)類型向Th1轉(zhuǎn)化,達(dá)到平衡起積極作用。Pan等[10]認(rèn)為,補(bǔ)充或阻斷某種細(xì)胞因子都會(huì)干擾機(jī)體自身的免疫反應(yīng),可能造成更大的損傷。因此,闡明Th1/Th2在MPP中的關(guān)系至關(guān)重要。目前,對于MPP免疫機(jī)制的研究多采用血液標(biāo)本測定介質(zhì),其不能直接反應(yīng)呼吸道炎癥的真實(shí)情況,誘導(dǎo)痰液分析作為一種實(shí)用、直接的非侵入性研究方法,在兒童呼吸道疾病研究中日益受到重視。由于在多種呼吸系統(tǒng)疾病中,誘導(dǎo)痰和支氣管肺泡灌洗液(BALF)檢測的各項(xiàng)指標(biāo)具有良好的相關(guān)性,支氣管誘導(dǎo)痰中炎癥介質(zhì)等檢測指標(biāo)明顯優(yōu)于在患兒中難于開展且創(chuàng)傷性較大的BALF[11-12]。與支氣管活栓、BALF等檢測相比,誘導(dǎo)痰技術(shù)具有可重復(fù)操作性強(qiáng)、安全性高、患兒耐受性好等特點(diǎn),以痰作標(biāo)本更經(jīng)濟(jì)、便捷,且無明顯并發(fā)癥,此方法不僅為研究分子生物學(xué)機(jī)制提供了簡便易行的方法,而且最適于臨床動(dòng)態(tài)觀察,指導(dǎo)抗感染治療。本研究結(jié)果表明,急性期患兒誘導(dǎo)痰IL-4含量和IL-4/IFN-γ比值均顯著高于恢復(fù)期患兒及對照組兒童,說明急性期患兒中IL-4含量和IL-4/IFN-γ比值明顯增加;急性期患兒中,輕癥組誘導(dǎo)痰IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值顯著低于重癥組,且IL-4含量顯著高于恢復(fù)期輕癥組,急性期重癥組IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值顯著高于恢復(fù)期重癥組,進(jìn)一步證實(shí)急性期輕、重癥患兒IL-4含量和IL-4/IFN-γ比值明顯增加,且重癥患兒增加更為明顯。

綜上所述,MPP患兒存在Th1/Th2功能紊亂,且 Th2反應(yīng)占優(yōu)勢,IL-4及IFN-γ均參與MPP患兒免疫狀態(tài)改變,在MPP發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮一定作用。

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