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    木薯渣多級逆流厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸條件的探討

    2013-11-06 08:52:46朱玉連聶偉李瑞孔巧平古碧周敬紅
    生物質(zhì)化學工程 2013年4期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)酸逆流厭氧發(fā)酵

    朱玉連,聶偉,李瑞,孔巧平,古碧,周敬紅

    (廣西大學輕工與食品工程學院,廣西 南寧 530004)

    木薯是我國僅次于水稻、甘薯、甘蔗、玉米的第五大作物[1],2010年廣西省木薯種植面積達到了30萬公頃,產(chǎn)量達到600萬t,其種植面積與產(chǎn)量均占全國的70% 以上[2]。木薯主要用于生產(chǎn)淀粉、酒精等,每生產(chǎn)1 t淀粉,同時會產(chǎn)出3 t木薯渣[3]。木薯渣中含有大量碳水化合物,如纖維素、半纖維素和淀粉[4]。在厭氧發(fā)酵過程中,這些底物降解速率有很大差別,淀粉降解速率快,而纖維素、半纖維素則難以利用,降解率低[5-7]。隨著發(fā)酵的進行,游離態(tài)揮發(fā)性有機酸的累積會對產(chǎn)酸細菌產(chǎn)生抑制效應,導致底物降解率的下降。本研究針對木薯渣成分的特點,采用多級逆流厭氧發(fā)酵工藝[8-9],通過在各級反應瓶間將發(fā)酵的上清液與發(fā)酵物底物進行逆向流動,使難降解的殘余底物與新鮮料液接觸提高底物降解率,同時使新加入木薯渣混合物與較高濃度的產(chǎn)物反應,降低抑制作用。木薯渣逆流厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸過程中,底物濃度和底物停留時間(SRT)是影響厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸的重要因素。合理的發(fā)酵條件有利于木薯渣厭氧發(fā)酵高效產(chǎn)酸,同時有利于提高木薯渣的降解率,在實際生產(chǎn)中更有利于發(fā)酵產(chǎn)物的提取和生產(chǎn)成本的節(jié)約。本實驗在前期研究的基礎(chǔ)上,研究不同底物濃度和不同底物停留時間對木薯渣多級逆流厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸情況及木薯渣降解率的影響。

    1 實驗

    1.1 原料與實驗方法

    1.1.1 木薯渣來源與性質(zhì) 木薯渣(底物)取自廣西明陽生化有限公司,此木薯渣是新鮮壓榨出來的,存放時間不長。木薯渣的總固形物(TS)含量為41.1%。絕干木薯渣的揮發(fā)性固體(VS)含量為97.9%、綜纖維素含量為59.31%、木質(zhì)素含量為5.88%、淀粉含量為10.4% 和總有機碳(TOC)為 46.1%。

    1.1.2 接種污泥性質(zhì)及馴化 接種所用厭氧顆粒污泥含水率是93.6%,TS為6.4%,VS為85.3%。將厭氧污泥接種到有效容積為1 L的錐形瓶中,然后將錐形瓶放入105℃ 恒溫烘箱中,加熱2 h,以殺滅種泥中的產(chǎn)甲烷菌等非芽孢菌,處理完后的污泥置于4℃ 冰箱中保存[10]。

    1.1.3 實驗方法 本實驗采用固液相雙向逆流發(fā)酵工藝[8],每一組逆流發(fā)酵裝置有3個發(fā)酵瓶,分別編號1、2、3,向3個瓶中分別加入相同濃度的木薯渣和相同濃度的接種污泥,底物與接種物按5∶1的比例加入接種污泥,加水至2 000 mL,充氮氣保持錐形瓶中的厭氧環(huán)境,用橡膠塞塞緊,置于35℃ 的恒溫水浴振蕩器中,進行厭氧發(fā)酵。普通厭氧發(fā)酵9 d后,進行逆流操作,3個發(fā)酵瓶中分離出的固體和液體流動方向相反,1號瓶中分離出的固體加入到2號瓶中,2號瓶中的固體加入到3號瓶中,3號瓶中的固體用來測發(fā)酵過程中木薯渣降解率,同時向1號瓶中補充新鮮的木薯渣和接種污泥。3號瓶中分離出的液體加入到2號瓶中,2號瓶中的液體加入到1號瓶中,1號瓶中的液體用來分析發(fā)酵液中的有機酸濃度,分析采用氣相色譜儀[11]測定,同時向3號瓶中補充新鮮的料液。

    1.2 分析測定方法

    1.2.1 常規(guī)指標 固含量、總有機碳、揮發(fā)性有機物按參考文獻[12]測定,纖維素含量、木質(zhì)素含量按參考文獻[13]測定。淀粉按GB/T 5009.9-2008進行分析。

    1.2.2 發(fā)酵液中揮發(fā)性有機酸(VOA)的測定 從反應瓶中取出5 mL發(fā)酵液置于離心管中,20 000 r/min離心10 min,用標準取樣器取上清液2 mL注入頂空瓶中,密封。氣相色譜儀條件如下:采用頂空進樣,頂空進樣器平衡溫度90℃,色譜柱型號DB-FFAP,加熱室溫度150℃,檢測器溫度250℃。升溫程序:柱箱初始溫度50℃,然后以20℃/min升溫速率,升到130℃,保留1 min,然后以5 ℃ /min 升溫速率,升到 160 ℃,保留 1 min[14]。

    1.3 各項指標的計算

    木薯渣厭氧發(fā)酵中底物降解率、VOA產(chǎn)率、乙酸產(chǎn)率、VOA轉(zhuǎn)化率和乙酸的轉(zhuǎn)化率計算方法[8]如下:

    式中:η1—底物降解率,%;W0—初始VS的質(zhì)量,g;W1—發(fā)酵結(jié)束VS的質(zhì)量,單位g。

    式中:η2—VOA產(chǎn)率,g/g;W0—初始VS的質(zhì)量,g;W2—VOA的產(chǎn)量,g。

    式中:η3—乙酸產(chǎn)率,g/g;W0—初始VS的質(zhì)量,g;W3—乙酸的產(chǎn)量,g。

    式中:η4—VOA轉(zhuǎn)化率,g/g;Wt—反應消耗VS的質(zhì)量,g;W2—VOA的產(chǎn)量,g。

    式中:η5—乙酸轉(zhuǎn)化率,g/g;Wt—反應消耗VS的質(zhì)量,g;W3—乙酸的產(chǎn)量,g。

    其中:底物為加入發(fā)酵瓶中的木薯渣;初始VS量為發(fā)酵初始時發(fā)酵瓶中木薯渣的揮發(fā)性固體含量。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 底物濃度對木薯渣產(chǎn)酸效果的影響

    實驗選用的5個底物(木薯渣)濃度分別為20、40、60、80和100 g/L。木薯渣多級逆流厭氧發(fā)酵工藝中,進行9 d的普通厭氧發(fā)酵后,開始每隔3 d進行一次逆流操作。隨著逆流操作的進行,不同底物濃度下發(fā)酵產(chǎn)物乙酸濃度和VOA濃度的變化如圖1所示。

    圖1 木薯渣濃度對乙酸(a)和VOA(b)濃度的影響Fig.1 Effect of concentration of cassava dregs on the concentration of acetic acid(a)and VOA(b)

    由圖1可知,隨著底物濃度的增大,發(fā)酵產(chǎn)物乙酸和VOA的濃度不斷增大。在底物濃度為20 g/L時,逆流發(fā)酵工藝運行穩(wěn)定后,乙酸濃度穩(wěn)定在1.3 g/L左右,VOA濃度穩(wěn)定在2.3 g/L左右,當?shù)孜餄舛忍岣叩?0 g/L的時候,待發(fā)酵工藝穩(wěn)定運行后,乙酸濃度穩(wěn)定在4.3 g/L左右,VOA濃度穩(wěn)定在6.2 g/L左右,與底物濃度為20 g/L時有了明顯的提高,當?shù)孜餄舛壤^續(xù)增加到100 g/L時,發(fā)酵產(chǎn)物乙酸和VOA的濃度與底物濃度為80 g/L的時候相比,提高幅度很小,此時逆流發(fā)酵工藝對木薯渣的發(fā)酵產(chǎn)酸能力達到一個較大值,發(fā)酵產(chǎn)生的VOA濃度沒有發(fā)生顯著提高。

    由表1可知,底物濃度為20 g/L時VOA和乙酸產(chǎn)率為最高,每克初始VS達到0.11 g VOA,每克初始VS達到0.06 g AC,隨著底物濃度從40 g/L增大到80 g/L,VOA產(chǎn)率和乙酸產(chǎn)率變化不大,但乙酸占VOA中的比例從61.1% 增加到69.2%;底物濃度從80 g/L增大到100 g/L時,每克初始VS,VOA產(chǎn)率從0.08 g下降到0.07 g,每克初始VS,乙酸產(chǎn)率從0.05 g下降到0.04 g,乙酸占VOA中的比例下降到67.5%,底物降解率也下降至20.7%。

    表1 底物濃度對底物的降解率、VOA和乙酸產(chǎn)率的影響Table 1 Effects of substrate concentration on the production of VOA and the substrate decomposition

    由以上實驗結(jié)果可知,高底物濃度條件下逆流厭氧發(fā)酵,可以得到較高濃度的乙酸和VOA;低底物濃度條件下,VOA的產(chǎn)率最高,底物的降解率也較好。但是在較低的底物濃度,VOA及乙酸濃度也低,不利于后續(xù)的利用。在較高的底物濃度下,底物濃度為80 g/L時,VOA的產(chǎn)率維持在較高的水平,為0.08 g,同時VOA及乙酸的濃度分別為6.23和4.31 g/L,均高于其他底物濃度水平的發(fā)酵結(jié)果。由此可知,底物濃度為80 g/L時,木薯渣厭氧多級逆流發(fā)酵可以達到資源化利用的最佳效果。

    2.2 底物停留時間對木薯渣產(chǎn)酸效果的影響

    逆流厭氧發(fā)酵工藝中底物停留時間(SRT,新加的底物從進入1號瓶到排出3號瓶共需的天數(shù))是影響發(fā)酵產(chǎn)酸的一個重要因素。實驗中取4組2 L的錐形瓶,每一組的底物停留時間分別為6、9、12和15 d,取同等絕干量的木薯渣和接種污泥(底物濃度為80 g/L),分別添加到發(fā)酵瓶中。底物停留時間為6 d,逆流操作開始后每隔2 d進行一次逆流操作;底物停留時間為9 d,逆流操作開始后每隔3 d進行一次逆流操作;底物停留時間為12 d,逆流操作開始后每隔4 d進行一次逆流操作;底物停留時間為15 d,逆流操作開始后每隔5 d進行一次逆流操作。

    比較4個底物停留時間(6、9、12和15 d)產(chǎn)酸的效果,分別取1號發(fā)酵瓶中的上清液進行分析,乙酸及VOA濃度變化見圖2。逆流發(fā)酵工藝產(chǎn)酸穩(wěn)定后,不同底物停留時間下乙酸和VOA的濃度變化如表2。

    圖2 底物停留時間對木薯渣發(fā)酵產(chǎn)乙酸和VOA濃度的影響Fig.2 Effects of SRT on the concentration of acetic acid and VOA

    表2 逆流工藝穩(wěn)定后底物停留時間對乙酸和VOA濃度的影響Table 2 Effect of SRT on concentration of acetic acids and VOA after countercurrent process stability

    由圖2和表2可知,隨著底物停留時間的從6 d增加到12 d,逆流工藝發(fā)酵產(chǎn)生的乙酸和VOA濃度分別從3.39和5.16 g/L提高到5.12和6.75 g/L。可知底物停留時間為15 d時,工藝穩(wěn)定后乙酸濃度穩(wěn)定在4.30 g/L左右,總VOA濃度穩(wěn)定在6.43 g/L左右。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),底物停留時間少于12 d的時候,隨著底物停留時間的延長,發(fā)酵產(chǎn)生的乙酸和VOA濃度不斷提高,但底物停留時間增加到15 d時,發(fā)酵產(chǎn)生的乙酸和總VOA濃度并未隨時間的延長而提高,反而有所下降。木薯渣逆流厭氧發(fā)酵工藝,底物停留時間過短或過長都不能達到最佳的產(chǎn)酸效果,本次實驗中最佳的底物停留時間是12 d,此時的產(chǎn)酸效果最好。

    木薯渣在不同底物停留時間下的降解率、VOA和乙酸轉(zhuǎn)化率、產(chǎn)率見表3。在底物停留時間為6 d時,木薯渣的降解率及VOA產(chǎn)率均為最低,分別為20.5%和0.064 g/g,木薯渣中的有機質(zhì)不能被微生物完全利用就被排出發(fā)酵體系,導致底物降解率及VOA和乙酸的產(chǎn)率較低;隨著底物停留時間的延長,木薯渣的降解率不斷提高,VOA和乙酸的產(chǎn)率增加,乙酸占總VOA中的比例不斷提高,但較長的停留時間,會因發(fā)酵產(chǎn)物的積累,發(fā)酵液中VOA會抑制產(chǎn)酸菌的活性,VOA及乙酸的產(chǎn)率下降。在底物停留時間為12 d時,乙酸和VOA的產(chǎn)率為最高,每克VS分別達到0.064 g和0.084 g,乙酸占VOA中的比例達到最高,為75.9%,每克VS,VOA和乙酸的轉(zhuǎn)化率分別為0.31 g和0.24 g,木薯渣中的有機質(zhì)能夠得到有效利用,能得到較高濃度的VOA,同時能夠使發(fā)酵產(chǎn)物的抑制作用不會影響到產(chǎn)酸菌的活性。

    綜合比較可知,在底物停留時間為12 d時,木薯渣的產(chǎn)乙酸及VOA效果為最佳。

    表3 底物停留時間對底物降解率、VOA和乙酸轉(zhuǎn)化率及產(chǎn)率的影響Table 3 Effects of SRT on substrate decomposition and VOA production during countercurrent anaerobic fermentation

    3 結(jié)論

    3.1 采用固液相雙向逆流厭氧工藝發(fā)酵木薯渣,底物濃度較低時可以獲得較好的乙酸轉(zhuǎn)化率,但揮發(fā)性有機酸及乙酸的產(chǎn)率較低;底物濃度較高可以獲得較高濃度的揮發(fā)性有機酸及乙酸,酸的產(chǎn)率及轉(zhuǎn)化率也較高。

    3.2 在底物濃度為80 g/L,底物停留時間在12 d時為最佳,揮發(fā)性有機酸濃度達到6.75 g/L,乙酸占總揮發(fā)性有機酸中的比例達到75.9%,底物降解率達到27.1%。

    3.3 木薯渣厭氧發(fā)酵條件雖然得到優(yōu)化,但是產(chǎn)酸效果和木薯渣降解率仍達不到較高的水平,仍有大量的纖維素和半纖維素沒有得到有效降解,在后續(xù)的研究中,有必要針對木薯渣中存在大量的纖維素和半纖維素的特點,進行有效的預處理,以提高木薯渣在厭氧發(fā)酵過程中的產(chǎn)酸效率和有機質(zhì)的降解效果。

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