砂燙法與烘烤法對馬錢子中抗炎鎮(zhèn)痛成分影響*

★ 龔飛鵬 于歡 朱龍濤 龔千鋒

(1.江西省人民醫(yī)院 南昌 330000；2.江西中醫(yī)學院 南昌 330004；3.北京中醫(yī)藥大學 北京 100102)

砂燙法與烘烤法對馬錢子中抗炎鎮(zhèn)痛成分影響*

★ 龔飛鵬1,2于歡2,3朱龍濤2龔千鋒2**

(1.江西省人民醫(yī)院 南昌 330000；2.江西中醫(yī)學院 南昌 330004；3.北京中醫(yī)藥大學 北京 100102)

目的：建立馬錢子士的寧和馬錢子堿的含量測定方法，評價砂燙法與烘烤法對二者含量的影響。方法：分別制備砂燙馬錢子和烘烤馬錢子，采用高效液相色譜法測定士的寧和馬錢子堿含量，以C18柱為固定相，乙腈(A):水-乙酸-三乙胺(230∶2.4∶0.4)(B)=11∶89為流動相，檢測波長為254nm。結(jié)果：以200℃烘烤馬錢子30分鐘，士的寧和馬錢子含量水平與砂燙馬錢子水平相當。結(jié)論：砂燙馬錢子炮制過程溫度、時間對生物堿含量影響較大，而烘烤馬錢子工藝可控性更強，用來控制馬錢子質(zhì)量優(yōu)勢顯著。

HPLC法；士的寧；馬錢子堿；含量測定

馬錢子,為馬錢科植物馬錢Strychnosnux-vomicaL.或云南馬錢StrychnospierrianaAW. Hill的干燥成熟種子。始載于《本草綱目》，并為歷版《中國藥典》所收載。味苦、性寒、有大毒，歸肝、脾經(jīng)，具通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫之功效，臨床上常用于風濕痹痛、跌打損傷、麻木癱瘓等疾病。馬錢子中生物堿類成分為其有效成分，士的寧和馬錢子堿是總生物堿的主要有效成分，同時也是馬錢子的毒性成分，兩者之和幾乎占總生物堿的80-90%。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Dionex UltiMate3000)；PAD檢測器；Chromeleon工作站；KQ3200超聲波清洗器(杭州中拓儀器有限公司)；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；CFP-110X50型報喜龍電炒鍋(報喜龍電器廠)；Mettler AE240天平(十萬分之一)；FW100高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)；馬弗爐；GZX-9146MBE型數(shù)顯鼓風干燥箱(上海博訊實業(yè)有限公司)；自動雙重蒸餾器(上海亞榮生化儀器有限公司)。

1.2 試藥

士的寧(購于中國藥品生物制品檢定所，批號0705-200306)；馬錢子堿(購于中國藥品生物制品檢定所，批號0704-200104，經(jīng)純化后，用歸一法測定含量為98.5%)；甲醇(色譜純)(德國Merck公司)；乙腈(色譜純)(Merck公司)；哇哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2 5μm4.6mm×250mm；流動相：乙腈(A)：水-乙酸-三乙胺(230∶2.4∶0.4)(B)=11∶89；檢測波長：254nm；理論板數(shù)按士的寧峰計算應(yīng)不低于5 000。柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL。

2.2 馬錢子炮制品與溶液制備

砂燙馬錢子制備：取潔凈粗河沙加入鍋內(nèi)加熱，用溫程300℃溫度計距鍋底3mm測溫，待溫度至230℃時投入潔凈生馬錢子，掩埋30s左右，然后不斷翻動約3分鐘，至鼓起爆裂并顯棕褐色或深棕色時迅速出鍋，晾涼。將制備好的樣品用小型粉碎機粉碎，過三號篩備用。

烘烤馬錢子制備：放入已經(jīng)預熱至200℃的鼓風烘箱中進行烘制，30min后取出，晾涼。將制備好的樣品用小型粉碎機粉碎，過三號篩備用。

對照品溶液的制備：取士的寧6mg、馬錢子堿對照品5mg，精密稱定，分別置10mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2mL，置同一10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含士的寧0.12mg，馬錢子堿0.1mg)。

供試品溶液的制備：分別取砂燙馬錢子、烘烤馬錢子粉1.0g，加入20.0mL(pH=1)的鹽酸水。稱重，超聲提取20min，超聲功率250w。稱重，補足減失重量。過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，取1mL置于10mL容量瓶中，用pH=1的酸水定容，搖勻，分別用作砂燙馬錢子供試品溶液和烘烤馬錢子供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對照品溶液3、5、8、12、15、20μL，連續(xù)進樣3次。以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制工作曲線。士的寧的回歸方程為：Y=4.4453X+0.3525，r=0.9998、馬錢子堿的回歸方程為Y=3.4255X-0.6671，r=0.9991，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

精密吸取對照品溶液重復進樣6次，測定士的寧和馬錢子堿峰面積。其RSD為0.46%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12、24h進樣，供試品溶液24h中峰面積無大變化，士的寧RSD為1.84%，馬錢子堿RSD為1.99%。供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復性試驗

取同一批生馬錢子樣品，平行制備5份，分別進樣，測定峰面積值，士的寧RSD為1.5%，馬錢子堿RSD為1.89%。表明該實驗方法重現(xiàn)性好。

2.7 加樣回收試驗

采用加樣回收法，取已知含量的生品6份各0.1g，精密稱定，精密加人對照品適量，按供試品制備項下方法操作，測定樣品含量，計算回收率，結(jié)果士的寧的平均回收率為101.79%，RSD=3.51%;馬錢子堿的平均回收率為99.86%，RSD=3.86%。

2.8 樣品測定

精密吸取砂燙馬錢子供試品溶液、烘烤馬錢子供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定士的寧、馬錢子堿含量。結(jié)果見表1。

表1 士的寧、馬錢子堿含量測定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

馬錢子生物堿類抗炎鎮(zhèn)痛效果顯著。[1]魏世超等[2]研究發(fā)現(xiàn)馬錢子總生物堿部分能明顯地抑制大鼠足跖脹，并且還可明顯抑制大鼠肉芽組織增生，抑制率達37.60%，而士的寧及非生物堿部分對上述炎癥無明顯影響。馬錢子加熱過程中，士的寧既可以氧化為士的寧的氮氧化合物，也可以開環(huán)轉(zhuǎn)化為異士的寧，后兩者也可以進一步氧化或開環(huán)轉(zhuǎn)化為異士的寧的氮氧化合物，導致士的寧的含量降低，達到減低馬錢子毒性的作用。

然而在砂燙過程中，溫度高低、火力的大小及加熱時間對士的寧含量影響很大。因此經(jīng)驗不足的實驗者在操作時，如掌握不好溫度和時間，會對炮制品的質(zhì)量產(chǎn)生很大影響。與砂燙法相比，烘箱加熱的優(yōu)點是受熱均勻，溫度易控制，加熱時間相對較長，士的寧含量變化緩慢，因此炮制品的質(zhì)量容易控制。

[1]易炳學，周道根，龔千鋒，等.馬錢子醋制品對小鼠抗炎作用的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(12)：3 054-3 055.

[2]魏世超，徐麗君，張秀橋.馬錢子總生物堿對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用[J].中國藥理學通報，2001,17(4)：479-480.

DifferentInfluencebySandScaldingorElectricBakingtoAnti-inflammatoryandAnalgesicIngredientinNuxvomica*

GONGFei-peng1,2,YUHuan2,3,ZHULong-tao2,GONGQian-feng2**

1.JiangxiProvincialPeople'sHospital,Nanchang330000;2.Collegeofpharmacy&JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004;3.CollegeofTraditionalChineseMedicine&BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102

Objective: A HPLC based method was established for strychnine and brucine of Nuxvomica, to find the difference between Nuxvomica of stir-frying with sand and baking Nuxvomica. Methods: Make two different kinds of Nuxvomica decoction pieces. The analysis was carried out on C18column by HPLC with acetonitrile(A):water-acetic acid-triethylamine(230:2.4:0.4)(B)=11:89 as mobile phase, the detection wavelength was 254 nm.Results: The result shows that the level of strychnine and brucine in sand scalding Nuxvomica, equal to baking ones.Conclusion: As temperature and time is difficult to control for sand scalding Nuxvomica, baking Nuxvomica can be easily controled during processing in actual production

High-performance Liquid Chromatography, Strychnine, Brucine, Content Determination

國家中醫(yī)藥行業(yè)專項“中藥飲片調(diào)劑規(guī)范化研究”(項目編號：201007011)。

**通訊作者：龔千鋒(1952-)，男，教授，博士研究生導師，主要從事中藥炮制研究，E-mail:gongqf2002@163.com。

R283.1

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2013-10-10)