金銀花多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用

劉蓓 劉玉紅

·實(shí)驗(yàn)研究·

金銀花多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用

劉蓓 劉玉紅

目的研究金銀花多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用。方法用MTT法體外觀察金銀花多糖在不同濃度對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果金銀花多糖在濃度10～250 μg/ml時(shí)可顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，以濃度100 μg/ml時(shí)作用最為明顯。結(jié)論金銀花多糖體外具有免疫促進(jìn)作用。

金銀花；多糖；淋巴細(xì)胞增殖

多糖在抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、促進(jìn)免疫等方面都發(fā)揮著重要生物活性，因此對(duì)多糖的研究與開(kāi)發(fā)已越來(lái)越引起人們的關(guān)注。我們前期研究表明，清熱解毒類(lèi)中藥金銀花，其多糖組分可以抑制小鼠S180肉瘤的生長(zhǎng)并且沒(méi)有明顯的毒副作用[1]。為進(jìn)一步探討其抗腫瘤的作用機(jī)制，基于多種多糖確切的免疫增強(qiáng)活性報(bào)道，本文采用脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，研究了金銀花多糖體外的免疫活性。

1 實(shí)驗(yàn)材料

金銀花多糖(自制[1])；RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco公司)；刀豆蛋白A(ConA)(Sigma公司)；噻唑籃(MTT)(Sigma公司)。BALB/c小鼠，體重(20+2.0)g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1脾淋巴細(xì)胞懸液制備 取小鼠頸椎脫臼處死，70%酒精浸泡10 min，取脾，研磨過(guò)100目篩網(wǎng)，Hank’s液沖洗，收集脾細(xì)胞懸液，離心，棄上清；加紅細(xì)胞裂解液(Tris-NH4Cl)10 ml，混勻脾細(xì)胞，靜止4～5 min，離心，棄上清，Hank’s液洗2～3遍，用RPMI-1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為6～8×106個(gè)/ml。

2.2測(cè)定法 于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入100 μl細(xì)胞懸液，再加入100 μl不同濃度的金銀花多糖溶液，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組(Control，加100 μl培養(yǎng)液)、陽(yáng)性對(duì)照組(加100 μl ConA，濃度10 μg/ml)。置5%CO2，37℃培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，于每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入酸化的20%的SDS溶液120 μl裂解細(xì)胞，過(guò)夜，在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的A(測(cè)定波長(zhǎng)570nm，參比波長(zhǎng)630nm)。計(jì)算結(jié)果:淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)=供試樣品組吸光值/空白對(duì)照組吸光值。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1。不同濃度的金銀花多糖(10～250 μg/ml)均可顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，在濃度100 μg/ml時(shí)作用最強(qiáng)，增殖指數(shù)為1.172，高于或低于此濃度，促進(jìn)作用減弱，呈鐘罩形的劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)。說(shuō)明金銀花多糖具有一定的免疫促進(jìn)作用，為金銀花多糖抑制小鼠S180腫瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制之一。

表1 金銀花多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

注：*P<0.05 and**P<0.01 vs. control group

4 討論

多數(shù)多糖是通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用發(fā)揮抗腫瘤作用或治療其他免疫缺陷性疾病。脾臟是T、B淋巴細(xì)胞定居和接受抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所，它們與機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫密切相關(guān)。本文研究了金銀花多糖體外對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明在濃度10～250 μg/ml范圍內(nèi)，金銀花多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖具有不同程度的刺激作用，并且有最適劑量，超過(guò)或低于最適劑量則效應(yīng)減弱，呈鐘罩形的劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)，這種特點(diǎn)與許多免疫調(diào)節(jié)劑的量效關(guān)系曲線(xiàn)的特點(diǎn)相似，提示其免疫調(diào)節(jié)作用具有雙向性。金銀花多糖的免疫調(diào)節(jié)作用可能為其抗腫瘤作用機(jī)制之一。

[1] 劉玉紅，劉玉國(guó)，蔣海強(qiáng). 金銀花多糖對(duì)小鼠S180肉瘤的抑制作用與機(jī)制研究. 腫瘤學(xué)雜志，2012,18(8)：584-587.

山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：200818)

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劉玉紅 E-mail: liuyuhongwu@126.com