IL-17在急慢性濕疹皮損中的表達(dá)及意義

趙廣瓊，陽小敏，傅 旭，駱 麗，郭瑞珍

(1.遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬珠海醫(yī)院 皮膚科，廣東 珠海 519100；2.遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)在讀研究生,廣東 珠海 519100；3. 遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū) 病理學(xué)教研室，廣東 珠海 519100)

IL-17在急慢性濕疹皮損中的表達(dá)及意義

趙廣瓊1，陽小敏2，傅 旭2，駱 麗1，郭瑞珍3

(1.遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬珠海醫(yī)院 皮膚科，廣東 珠海 519100；2.遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)在讀研究生,廣東 珠海 519100；3. 遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū) 病理學(xué)教研室，廣東 珠海 519100)

目的探討白細(xì)胞介素17(IL-17)在濕疹發(fā)病機(jī)制中的作用。方法急性和慢性濕疹患者各20例，正常組10例，采用鏈霉素抗生物素-過氧化物酶連接(SP)法，檢測(cè)IL-17在表皮及真皮細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)。結(jié)果IL-17在正常皮膚組織細(xì)胞未見表達(dá)，IL-17在急性、慢性濕疹皮疹表皮角質(zhì)形成細(xì)胞及真皮浸潤淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中均有不同程度的表達(dá)，IL-17在急性濕疹中的表達(dá)明顯高于慢性濕疹 (P<0.05)。結(jié)論IL-17可能在濕疹發(fā)病的初始階段發(fā)揮一定的作用。

白細(xì)胞介素17；濕疹； Thl7細(xì)胞

濕疹是一種常見的、病因復(fù)雜的皮膚變態(tài)反應(yīng)性疾病，臨床上急性期皮損以丘皰疹為主，有滲出傾向，慢性期以苔蘚樣變?yōu)橹鳌０l(fā)病率占皮膚科門診病人的20%～30%。由于其病程長、易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的生活和工作[1]。許多研究已經(jīng)證實(shí)，免疫異常是其發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]，但確切發(fā)病機(jī)制仍未完全明確。為更深入地了解濕疹的發(fā)病機(jī)制，本課題通過選擇急慢性濕疹患者各20

例，通過與正常人10例進(jìn)行對(duì)照，觀察IL-17在急性慢性濕疹皮損細(xì)胞中水平的表達(dá)，分析其相關(guān)性，進(jìn)一步明確細(xì)胞因子在急慢性濕疹發(fā)病機(jī)制中的作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

1.1.1 濕疹組 所有病例均來自我院皮膚科門診明確診斷的濕疹患者，參考皮膚性病學(xué)第7版的判斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中急性和慢性濕疹組各20例，急性組男8例，女性12例，平均年齡27.5歲。慢性組男13例，女7例，平均年齡32.6歲。正常組男5例，女5例，平均年齡25歲。

1.1.2 正常對(duì)照組：取自整形手術(shù)邊緣正常皮膚10例，各組年齡、性別構(gòu)成比無顯著性差異(P>0.05)。所有患者切取皮疹前2周未系統(tǒng)或局部使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和抗生素，無本病以外的免疫性疾病、系統(tǒng)性疾病和感染性疾病。

1.2 方法

1.2.1 HE染色 組織經(jīng)包埋、脫水處理，切成3 μm切片，經(jīng)二甲苯、梯度酒精脫水化，蘇木素浸染3分鐘；流水沖洗1 min；伊紅染液浸染2 min，流水沖洗1 min；梯度酒精脫水，二甲苯透明，干燥后中性樹膠封片。鏡下觀察皮疹組織病理變化：急性濕疹表現(xiàn)為表皮內(nèi)海綿形成，真皮淺層毛細(xì)血管擴(kuò)張，血管周圍有淋巴細(xì)胞浸潤，少數(shù)為中性和嗜酸性粒細(xì)胞；慢性濕疹表現(xiàn)為角化過度與角化不全，棘層肥厚明顯，真皮淺層毛細(xì)血管壁增厚，膠原纖維變粗[1]。

1.2.2 免疫組化染色 采用鏈霉素抗生物素-過氧化物酶連接(SP)法。兔抗人白介素-17抗體(批號(hào)為bs-1183R)，購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。DAB試劑購自福州邁新公司 (批號(hào)1106090031)；UltraSensitiveTM S-P超敏試劑盒(羊抗兔IgG)(批號(hào)：KIT-9706/9707/9708)。嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)操作流程及抗體說明書進(jìn)行。

1.2.3 染色評(píng)分方法 半定量評(píng)分，排除非特異染色，以細(xì)胞質(zhì)中棕黃色顆粒狀染色為陽性標(biāo)準(zhǔn)，每張切片由兩位實(shí)驗(yàn)者獨(dú)立計(jì)數(shù)，取平均值。在光鏡下計(jì)數(shù)，40×10倍視野下，于每個(gè)組織片內(nèi)隨機(jī)選取5個(gè)視野，用5×5網(wǎng)格目鏡微尺分別計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)及所觀察的細(xì)胞總數(shù)，取其平均值。計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分率。

1.2.4 結(jié)果判斷 結(jié)果分析方法根據(jù)Shimizu法[3]改良而成。染色強(qiáng)度用0-3級(jí)評(píng)分：0級(jí)為無染色，1級(jí)為輕度染色，2級(jí)為中度染色，3級(jí)為強(qiáng)染色。染色范圍采用陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，分0-4級(jí)：0級(jí)為無染色，1級(jí)為<10%的細(xì)胞染色，2級(jí)為10%～20%的染色，3級(jí)為>20%的染色。上述兩項(xiàng)相加為著色程度積分，染色總評(píng)分表示IL-17在皮膚組織中表達(dá)的強(qiáng)弱。

結(jié)果：0,1為陰性；2為弱陽性；3為陽性；4及大于4為強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組在性別、年齡構(gòu)成比上無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

2.1 IL-17在正常皮膚表皮及真皮內(nèi)均未見表達(dá)。在急慢性濕疹皮損表皮角質(zhì)形成細(xì)胞及真皮浸潤淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)(見表1)。

表1各組皮損處IL-17在表皮及真皮陽性細(xì)胞的染色強(qiáng)度

組別例數(shù)IL-17表達(dá)強(qiáng)度++++++-平均秩正常100001040.00急性201082011.95慢性200451131.80

注：2=31.53。

第1組和第2組比較，P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第1組和第3組比較，P>0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第2組和第3組比較，P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 濕疹I(lǐng)L-17免疫組化DAB染色結(jié)果 急性濕疹皮損表皮角質(zhì)形成細(xì)胞及真皮浸潤淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中可見大量棕黃色顆粒沉積(見圖1A)；慢性濕疹皮損表皮角質(zhì)形成細(xì)胞及真皮浸潤淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中可見棕黃色顆粒沉積(見圖1B)。

注：圖A:急性濕疹組；圖B:慢性濕疹組。 圖1 濕疹TL-免疫組化DAV染色結(jié)果(10×40)

3 討論

根據(jù)細(xì)胞的功能，經(jīng)典地將CD4﹢T細(xì)胞分為Thl、Th2輔助細(xì)胞以及T調(diào)節(jié)細(xì)胞三個(gè)亞群[4]。近年來研究中發(fā)現(xiàn)一種特殊的輔助型T細(xì)胞，這群CD4﹢T細(xì)胞同傳統(tǒng)Thl、Th2、T調(diào)節(jié)細(xì)胞具有明顯不同的特征：表達(dá)控制其分化的獨(dú)特轉(zhuǎn)錄因子—孤獨(dú)受體(orphan nuclear receptor，RORγt)[5]，因主要分泌IL-17而命名為Thl7細(xì)胞，在防御胞外菌感染、介導(dǎo)慢性炎癥、自身免疫病和腫瘤發(fā)病中發(fā)揮重要作用[6]。隨著對(duì)Thl7細(xì)胞研究的深人，發(fā)現(xiàn)Thl7細(xì)胞除和SLE、系統(tǒng)性硬皮病、炎癥性腸病和銀屑病等自身免疫性疾病相關(guān)外，Thl7細(xì)胞與過敏性哮喘、AD等過敏性疾病關(guān)系密切[7-8]。IL-17通過增加人成纖維母細(xì)胞黏附因子ICAM-1的表達(dá)，激活靶細(xì)胞內(nèi)NF-KB和MAPK以及刺激上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、IL-8、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、PGE-2等效應(yīng)因子，參與宿主的炎癥反應(yīng)[9]，而這些細(xì)胞因子中的部分在濕疹皮損中大量增加[10]。同時(shí)越來越多的研究表明[11]，IL-17在皮膚表面屏障的宿主防御反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用，在濕疹患者中，疾病的嚴(yán)重程度與表皮定植的金黃色葡萄球菌有關(guān)，國內(nèi)外研究大多應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中Thl7相關(guān)細(xì)胞因子，但利用免疫組化檢測(cè)皮損中IL-17表達(dá)的報(bào)道很少，本課題應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)IL-17在急慢性濕疹皮損中的表達(dá)，初步探討IL-17在濕疹發(fā)病機(jī)制中的作用。

本研究結(jié)果顯示，IL-17在急慢性濕疹皮損表皮角質(zhì)形成細(xì)胞及真皮浸潤淋巴細(xì)胞中均有表達(dá)，急性濕疹的IL-17表達(dá)明顯高于慢性濕疹(P<0.05),與國外研究結(jié)果相符[12-13]，推測(cè)IL-17參與了濕疹發(fā)病的初始階段。濕疹在未來的臨床治療中，尋求更有效的疾病干預(yù)靶點(diǎn)有非常重要的意義,應(yīng)用IL-17中和抗體或阻斷它們的分泌通路來治療濕疹可能是解決濕疹反復(fù)發(fā)作的一條思路。本研究只是整個(gè)課題研究項(xiàng)目的一部分 ，分析資料僅來自40例濕疹，還需進(jìn)一步研究證實(shí)。

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[收稿2012-09-12;修回2013-02-27]

(編輯：譚秀榮)

ExpressionandsignificanceofInterleukin-17inthelesionsofacuteandchroniceczema

Zhaoguangqiong1,Yangxiaomin2,Fuxu2,Luoli1,Guoruizhen3

(1.Department of Dermatology, The Fifth Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Guangdong Zhuhai 519100, China; 2.Graduate student,The Zhuhai Campus of Zunyi Medical University, Guangdong Zhuhai 519100, China; 3.Department of Pathology,The Zhuhai Campus of Zunyi Medical University,Guangdong Zhuhai 519100, China)

ObjectiveTo investigate the role of Interleukin-17 (IL-17) in the pathogenesis of eczema.MethodsTwenty acute eczema cases, 20 chronic eczema cases and 10 normal cases were selected. IL-17 expression in the cytoplasm of the epidermal and dermal cells was detected with streptavidin-biotin-peroxidase (SP) method.ResultsIL-17 was not detected in cells of normal skin. Different IL-17 expression levels were shown in the epidermal keratinocytes and dermal infiltrating lymphocytes of acute and chronic skin lesions. IL-17 expression in acute eczema was more than that in chronic eczema (P<0.05).ConclusionIL-17 might play an important role in the initial stage of eczema.

IL-17; eczema; Thl7 cell

R758.23

A

1000-2715(2013)02-0128-03

珠海市科技工貿(mào)和信息化局項(xiàng)目(NO：珠科工貿(mào)信〔2011〕404);貴州省科技廳項(xiàng)目(NO：黔科合丁字〔2011〕2260)。