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    利用菠蘿皮渣混菌發(fā)酵生產(chǎn)高蛋白質(zhì)生物飼料的研究

    2013-10-25 05:42:34廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院
    中國飼料 2013年7期
    關(guān)鍵詞:混菌皮渣粗蛋白質(zhì)

    廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 張 健

    優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料緊缺是制約畜牧業(yè)發(fā)展的主要因素之一,開發(fā)利用非食用資源、廢棄資源和低消化性飼料,通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)蛋白質(zhì)是解決蛋白質(zhì)飼料短缺問題的最好途徑 (鄭銳東,2011;何海燕和覃擁靈,2007)。菠蘿是我國南方重要的水果資源,菠蘿皮渣是菠蘿加工產(chǎn)生的副產(chǎn)物,占全果重量的50% ~60%(苑艷輝,2005),大量廢棄的菠蘿皮渣在腐爛變質(zhì)的過程中給環(huán)境造成了嚴(yán)重的污染,因此,研究菠蘿皮渣混菌發(fā)酵生產(chǎn)高蛋白生物飼料具有一定的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。

    1 材料和方法

    1.1 菌種 綠色木霉(Trichoderma viride)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)均為實(shí)驗(yàn)室保藏。

    1.2 材料與試劑 菠蘿皮渣,取自市售菠蘿加工廢棄物,烘干,粉碎過10目篩備用;花生餅粉為市售;其余試劑均為分析純。

    1.3 培養(yǎng)基 斜面培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基、麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基均參照周德慶(2006)配制。

    酵母種子培養(yǎng)基:麥芽汁培養(yǎng)基。

    固體發(fā)酵培養(yǎng)基:粉碎菠蘿皮渣1000 g,另加入花生餅粉 100 g,(NH4)2SO430 g, KH2PO45 g,MgSO4·7H2O 5 g,料水比為 1∶0.5。

    1.4 主要儀器 太倉DHZ-DA全溫度振蕩培養(yǎng)箱、上海楚定SPX-150型生化培養(yǎng)箱、上海海康FA214電子分析天平、杭州匯爾YXQ-LS-100SII型全自動(dòng)數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌器 、杭州匯爾DGX-8243B型高溫恒溫鼓風(fēng)干燥箱、凱氏定氮儀。

    1.5 方法

    1.5.1 菌株活化 無菌條件下將保藏菌種轉(zhuǎn)接至斜面培養(yǎng)基,28℃培養(yǎng)72 h復(fù)蘇菌種。

    1.5.2 酵母種子擴(kuò)大培養(yǎng) 取活化后的酵母斜面菌種轉(zhuǎn)接到種子培養(yǎng)基,28℃、180 r/min培養(yǎng)36 h。

    1.5.3 固體發(fā)酵 滅菌固體培養(yǎng)基冷卻后接入約1 cm×1 cm PDA斜面培養(yǎng)物,30℃發(fā)酵48 h后接入酵母,接種量為10%,進(jìn)行混合菌種發(fā)酵。

    1.5.4 測定方法 發(fā)酵產(chǎn)物的蛋白質(zhì)含量以凱氏定氮法進(jìn)行測定(王秀奇,2011)。

    1.5.5 發(fā)酵條件優(yōu)化 選取硫酸銨添加量、料水比、酵母接種量、混菌發(fā)酵溫度、混菌發(fā)酵時(shí)間5個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),研究發(fā)酵條件的最優(yōu)化組合。試驗(yàn)采用L25(56)的正交設(shè)計(jì)方法,正交試驗(yàn)因素與水平見表1。

    表1 因素與水平

    2 結(jié)果及分析

    正交試驗(yàn)結(jié)果與極差分析結(jié)果見表2。

    表2 正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析

    由表2可知,RD>RC>RE>RB>RA,即各因素對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白質(zhì)含量影響的主次順序依次為:發(fā)酵溫度、酵母接種量、發(fā)酵時(shí)間、料水比、硫酸銨添加量;最佳發(fā)酵條件組合是A2B1C3D4E5,即硫酸銨添加量3%,料水比1∶0.3,酵母接種量15%,發(fā)酵溫度33℃,發(fā)酵時(shí)間108 h。根據(jù)此最優(yōu)發(fā)酵組合做六平行三重復(fù)追加試驗(yàn),結(jié)果見表3。由表3可見,在優(yōu)化發(fā)酵條件下,發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白質(zhì)含量為26.98%,是發(fā)酵前粗蛋白質(zhì)含量 (4.73%)的5.70倍。

    由表4可知,在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的5個(gè)因素中,發(fā)酵溫度和發(fā)酵時(shí)間兩個(gè)因素對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白質(zhì)含量有顯著影響。

    表4 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

    3 結(jié)論

    本研究通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),確定以菠蘿皮渣混菌發(fā)酵生產(chǎn)高蛋白質(zhì)生物飼料的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:粉碎菠蘿皮渣1000 g,另加入花生餅粉100 g,(NH4)2SO430 g,KH2PO45 g ,MgSO4·7H2O 5 g,料水比為1∶0.3;最優(yōu)發(fā)酵工藝為:酵母接種量15%,發(fā)酵溫度33℃、發(fā)酵時(shí)間108 h;在此發(fā)酵條件下,發(fā)酵產(chǎn)物的粗蛋白質(zhì)含量達(dá)26.98%,是未發(fā)酵前粗蛋白質(zhì)含量(4.73%)的5.70倍。

    [1]何海燕,覃擁靈.利用甘蔗糖蜜生產(chǎn)飼料酵母發(fā)酵條件的研究[J].中國飼料,2007,7:38 ~ 41.

    [2]苑艷輝.菠蘿皮的綜合利用[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2005,31(2):145 ~147.

    [3]王秀奇.基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)(第二版)[M].北京:高等教育出社,2011.113~121.

    [4]鄭銳東.微生物混合發(fā)酵產(chǎn)SCP飼料研究進(jìn)展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,23(4):133~135.

    [5]周德慶.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程 (第二版)[M].北京:高等教育出版社,2006.371~372.

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