貴州省煙田雜草主要病毒檢測及分析

何永福， 王 楠， 葉照春， 陸德清， 王莉爽， 吳石平

(貴州省植物保護研究所，貴州貴陽 550006)

貴州省煙田雜草主要病毒檢測及分析

何永福， 王 楠， 葉照春， 陸德清， 王莉爽， 吳石平

(貴州省植物保護研究所，貴州貴陽 550006)

為了明確貴州省煙田雜草攜帶煙草病毒病的情況，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，檢測了貴州省10個縣(市)27個鄉(xiāng)鎮(zhèn)83塊煙田30科70種853份雜草樣本。結(jié)果得出，共有18科44種179個雜草樣本攜帶病毒，病毒檢出率占總樣本數(shù)的20.98%，其中TMV、CMV、PVY的檢出率分別為12.31%、6.33%、2.34%，以TMV檢出率最高；腺梗豨薟、小飛蓬、藜、馬唐、尼泊爾蓼、桃葉蓼等雜草的帶毒率分別為44.12%、42.86%、38.46%、36.51%、36.36%、35.48%，以腺梗豨薟、小飛蓬的帶毒率較高；27個雜草樣本共檢測到2種以上病毒的復合侵染，檢出率為22.13%，有16個雜草樣本受到TMV和CMV 2種病毒的復合侵染，占13.11%，馬唐、桃葉蓼受病毒復合侵染的概率高于其他雜草。

病毒??；煙草；煙田雜草；貴州

煙草是貴州省的支柱產(chǎn)業(yè)之一，煙草病毒病的發(fā)生使煙草的生產(chǎn)遭受了重大損失[1]。據(jù) Lucas 報道，煙草上的病毒病有近40種[2]，目前我國已發(fā)現(xiàn)的煙草病毒病有16種，其中引致煙草花葉病的病毒主要有煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV)、黃瓜花葉病毒(cucumber mosaic virus，CMV)、馬鈴薯 Y 病毒 (potato virus Y，PVY)等 3 種病毒[3]。目前相關病毒病檢測的報道大都是關于煙草本身的病毒種類及帶毒情況檢測的報道，如李斌等對四川省主要煙區(qū)的煙葉標本進行病毒病種類檢測，巢進等對湖南省煙草病毒病種類的鑒定[4-5]等，但是對煙田雜草攜帶煙草病毒病情況檢測的報道甚少，關于貴州省煙田雜草帶毒情況的檢測目前還未見報道。本研究針對貴州省煙田雜草攜帶煙草病毒病的情況進行檢測，初步明確煙田雜草的帶毒種類，為煙草病毒病的綜合防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 雜草樣本的采集 2012年6—8月，分別在貴州省道真縣、遵義縣、威寧縣、福泉市、平塘縣、興義市、印江縣、思南縣、黔西縣、大方縣10個縣(市)27個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的83塊煙田采集 853個雜草樣本，用采樣袋封好并將其放入事先準備好的冰盒中，帶回室內(nèi)備用。

1.1.2 雜草樣品的鑒定及分樣 將采集到的雜草樣本進行分類鑒定[6]，選取部分樣品葉片作檢測用。

1.1.3 病毒檢測試劑盒 病毒檢測血清試劑盒由美國阿格迪(Agdia)公司生產(chǎn)，采用96孔酶標板。選取的目標病毒為在國內(nèi)煙草上普遍發(fā)生的TMV、CMV、PVY 3種。

1.2 檢測方法

采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[7-8]進行檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 貴州省不同煙區(qū)雜草攜帶病毒的檢測結(jié)果

貴州省10個縣(市)27個鄉(xiāng)鎮(zhèn)83塊煙田853份雜草樣本的病毒血清學(ELISA)檢測結(jié)果見表1。可以看出在853份雜草樣本中，TMV、CMV、PVY的帶毒率分別為12.31%、6.33%、2.34%，以TMV最高。27個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的煙田雜草中均檢出帶有TMV，有22個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的煙田雜草帶有CMV，有14個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的煙田雜草帶有PVY，表明TMV、CMV、PVY在田間不僅侵染煙草，同時還侵染煙田雜草。

2.2 貴州省煙區(qū)不同種類雜草攜帶病毒的檢測結(jié)果

貴州省煙區(qū)不同種類雜草攜帶病毒的檢測結(jié)果見表2，可以看出采集的853份雜草樣本隸屬30科70種，ELISA檢測帶有TMV、CMV、PVY的雜草有18科44種，其中腺梗豨薟、小飛蓬、藜、馬唐、尼泊爾蓼、桃葉蓼等雜草的帶毒率分別為44.12%、42.86%、38.46%、36.51%、36.36%、35.48%，以腺梗豨薟、小飛蓬的帶毒率較高。853份雜草樣本中有179個雜草樣本攜帶病毒，占總樣本數(shù)的20.98%。179個帶毒雜草樣本中有105份雜草樣本攜帶TMV，占總樣本數(shù)的12.31%，占帶毒雜草樣本的58.66%；有54份雜草樣本攜帶CMV，占總樣本數(shù)的6.33%，占帶毒雜草樣本的30.17%；有20份雜草樣本攜帶PVY，占總樣本數(shù)的2.34%，占帶毒雜草樣本的11.17%。另外674個樣品未檢測出帶有TMV、CMV、PVY。

表1 貴州省不同煙區(qū)雜草攜帶病毒的檢測結(jié)果Table 1 The detection results of weeds carrying viruses indifferent tobacco areas of Guizhou Province

表2 貴州省煙區(qū)不同種類雜草攜帶病毒檢測結(jié)果Table 2 The detection rates of different kinds of weeds carrying viruses in tobacco areas of Guizhou Province

續(xù)表2Table2(Contiued)

科名雜草種類攜帶病毒樣本數(shù)TMVCMVPVY合計樣本(份)帶毒率(%)蕁麻科糯米團Gonostegiahirta(Bl.)Miq.000040唇形科紫蘇Perillafrutescens(L.)Britton1001911.11葡萄科烏蘞莓Cayratiajaponica(Thunb.)Gagnep.000020酢漿草科酢漿草OxaliscorniculataL.000070爵床科爵床Rostellulariaprocumbens(L.)Nees0101520.00木賊科筆管草EquisetumdebileRoxb.000040馬鞭草科馬鞭草VerbenaofficinalisL.000030商陸科商陸PhytolaccaacinosaL.000020車前科車前草PlantagoasiaticaL.000040景天科東南景天SedumalfrediiHance000020豆科三葉草TrifoliumsubterraneumL.000040毛茛科毛茛RanunculusjaponicusThunb.1001333.33合計105542017985320.98

2.3 TMV、CMV、PVY復合侵染煙田雜草的檢測結(jié)果

TMV、CMV、PVY復合侵染煙田雜草的檢測結(jié)果見表3，可以看出在122個陽性樣本中，27個雜草樣本檢測到2種以上病毒的復合侵染，占22.13%。其中TMV+CMV復合侵染馬唐、狗尾草、雀稗、雙穗雀稗、小飛蓬、黃花蒿、野艾蒿、苦荬菜、勝紅薊、桃葉蓼、尼泊爾廖、藜、蔊菜，有16個樣本，占13.11%；TMV+PVY復合侵染馬唐、腺梗豨薟、桃葉蓼、蔊菜，有5個樣本，占4.10%；CMV+PVY復合侵染小飛蓬、野茼蒿、桃葉蓼、尼泊爾廖蓼，有4個樣本，占3.28%；TMV+CMV+PVY復合侵染馬唐和野茼蒿，有2個樣本，占1.64%；23份馬唐陽性樣本中，有2份樣品受TMV+CMV的復合侵染，2份樣品受TMV+PVY的復合侵染，1份樣品受TMV+CMV+PVY的復合侵染；11份桃葉蓼陽性樣本中，1份樣品受TMV+CMV的復合侵染，1份樣品受TMV+PVY的復合侵染，1份樣品受CMV+PVY的復合侵染?？梢娫谒鶛z測的雜草陽性樣本中，馬唐、桃葉蓼受病毒復合侵染的概率高于其他雜草。

表3 TMV、CMV、PVY病毒復合侵染煙田雜草檢測結(jié)果Table 3 The detection results of mixed-infection of TMV，CMV，PVY in weeds of tobacco fields

3 結(jié)論與討論

通過對貴州省煙田853份雜草樣本的病毒血清學(ELISA)檢測結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)煙田雜草TMV、CMV、PVY的帶毒率分別為12.31%、6.33%、2.34%，以TMV最高，表明TMV、CMV、PVY在田間不僅侵染煙草，同時還侵染煙田雜草。

所采集的853份雜草樣本隸屬30科70種，有179個雜草樣本攜帶煙草病毒，占總樣本數(shù)的20.98%，18科44種雜草攜帶TMV、CMV、PVY，以腺梗豨薟、小飛蓬、藜、馬唐、尼泊爾蓼、桃葉蓼等雜草的帶毒率較高。

在853份雜草樣本中，27個雜草樣本檢測到2種以上病毒的復合侵染，占22.13%，TMV+CMV復合侵染馬唐、狗尾草、雀稗、雙穗雀稗、小飛蓬、黃花蒿、野艾蒿、苦荬菜、勝紅薊、桃葉蓼、尼泊爾蓼、藜，均高于其他復合侵染病毒組合，馬唐、桃葉蓼受病毒復合侵染的樣品數(shù)高于其他雜草。

研究結(jié)果得出，煙田發(fā)生的很多雜草是煙草病毒病的中間寄主。因此在煙草病毒病的防治工作中，不僅要針對煙草植株進行防治，同時還要施用抗病毒制劑以防治煙田雜草，才能有效控制煙草病毒病的危害，這在煙草病毒病的防治中是前人仍未涉及到的。筆者認為，防控煙田雜草不僅可以減輕雜草對煙草植株的危害，同時還能減輕田間病毒病的發(fā)生和危害。但是在田間控草的情況下，病毒病的減輕程度是怎樣的還有待進一步研究。

[1]謝聯(lián)輝，林奇英，謝莉妍. 福建煙草病毒種群及其發(fā)生頻率的研究[J]. 中國煙草學報，1994，2(1)：25-32.

[2]Lucas G B.Disease of tobacco[M]. Raleigh，N C USA：N C State University，1975：427-548.

[3]楊 健，張金霖，王清友，等. 煙草病毒病抗性種質(zhì)資源鑒定與創(chuàng)新研究進展[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學，2010(23)：96-99.

[4]李 斌，夏先全，姚 革，等. 四川煙草主產(chǎn)區(qū)煙草病毒種類及流行分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學報，2007，20(6)：1237-1240.

[5]巢 進，張洪波，肖啟明，等. 湖南省煙草病毒病種類的鑒定[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學，2008(4)：104-106，108.

[6]李揚漢. 中國雜草志[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.

[7]田 波. 植物病毒研究方法[M]. 北京：科學出版社，1987.

[8]青 玲，劉映紅，馬麗娜. 武隆煙區(qū)煙草病毒病的病原初步鑒定[J]. 西南農(nóng)業(yè)大學學報：自然科學版，2005，27(3)：319-322.

DeterminationandAnalysisofVirusPresentinMainWeedsofTobaccoFieldsinGuizhouProvince

HE Yong-fu，WANG Nan，YE Zhao-chun LU De-qing，WANG Li-shuang，WU Shi-ping

(Guizhou Province Institute of Plant Protection，Guiyang 550006，China)

ITo determine weeds carrying tobacco virus diseases in tobacco fields of Guizhou Province，samples of 853 weeds belonging to 30 families and 70 species were collected in 83 tobacco fields in 27 towns of 10 counties (cities) in Guizhou Province and tested by an ELISA method. A total of 179 weed samples，equivalent to 21%，from 18 families and 44 species carried viruses. Tobacco mosaic virus (TMV)，cucumber mosaic virus (CMV)，and potato virus Y (PVY) were detected in 12.3%，6.3% and 2.3% of the samples，respectively. Virus carrying rate inSiegesbeckiapubescensMakino，Conyzacanadensis(L.) Cronq.，ChenopodiumalbumL.，Digitariasanguinalis(L.)Scop.，PolygonumnepalenseMeisn.，andPolygonumpersicariaL. was 44.1%，42.9%，38.5%，36.5%，36.4% and 35.5%，respectively. Twenty-seven weed samples were infected by more than two viruses，and the virus detection rate was 22.1%. Sixteen weed samples were simultaneously infected by TMV and CMV，which represented 13.1% of the total samples tested. Virus mixed-infection rates ofD.sanguinalisandP.persicariawere higher than those of the other weeds.

virus disease；tobacco；weeds in tobacco fields；Guizhou

S451

A

1003-935X(2013)01-0015-05

何永福，王 楠，葉照春，等. 貴州省煙田雜草主要病毒檢測及分析[J]. 雜草科學，2013，31(1)：15-19.

2012-01-04

資金項目：中國煙草總公司貴州省公司科技項目專項(編號：201022)。

何永福(1965—)，男，貴州鳳岡人，副研究員，從事農(nóng)業(yè)有害生物研究工作。Tel：(0851)3761712；E-mail：heyongfu08@163.com。