骨橋蛋白在胸腺瘤組織中的表達(dá)及臨床意義

朱 健 劉 勇 朱水波 蔣 煒 夏 峰 余冬敏 梁江水

廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心胸外科，湖北武漢 430070

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的一種磷酸蛋白，Senger等[1]于1979年首次在惡性轉(zhuǎn)化的上皮細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，OPN表達(dá)于多種腫瘤組織中，包括胃癌、腎癌、甲狀腺癌、肺癌、食管癌等腫瘤組織，具有較好的敏感性[2]。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)關(guān)于OPN在人胸腺瘤組織中表達(dá)情況的報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)OPN在胸腺瘤中的表達(dá)情況，以探討其對(duì)胸腺瘤臨床診斷和患者預(yù)后判斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院胸腺瘤切除標(biāo)本患者53例的完整病例資料，其中，男29例，女24例，年齡22～70歲，中位年齡49歲，27例合并重癥肌無(wú)力（myasthenia gravis，MG）。 53例術(shù)前行胸部高分辨率CT檢查，均診斷為前上縱隔腫瘤，未行放療和（或）化療。術(shù)后按Masaoka分期標(biāo)準(zhǔn)[3]分為：Ⅰ期（非侵襲性胸腺瘤）31例，Ⅱ期13例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例（Ⅱ～Ⅳ期為侵襲性胸腺瘤）。根據(jù)2004年正式的WHO胸腺瘤組織分型標(biāo)準(zhǔn)[4]分為：A型8例、AB型24例（A、AB型為低度惡性）、B型20例（其中，B1型8例，B2型10例，B3型2例），C型1例（B、C型為高度惡性）。取同期20例非腫瘤胸腺（nonneoplastic thymus，NNT）組織（取自先、后天性心臟病等）作為對(duì)照，其中，男11例，女9例，中位年齡47歲。兩組一般情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 試劑

一抗兔抗人OPN單克隆抗體、二抗生物素標(biāo)記羊抗兔IgG試劑盒、DAB顯色試劑盒等試劑均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

全部標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4 μm厚的連續(xù)切片2張，1張供免疫組化染色，1張供HE染色復(fù)核診斷。免疫組織化學(xué)采用SP法，依據(jù)試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行。HE染色按常規(guī)進(jìn)行。

1.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷方法

采用雙盲法，由兩名病理科高年資醫(yī)師隨機(jī)選取5個(gè)10×40倍視野，根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)分[5]：①染色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞為準(zhǔn)，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞記0分，顯黃色記1分，顯棕黃色記2分，顯棕褐色記3分；②陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比例＜5%記0分，5%～25%記1分，26%～50%記2分，≥51%記3分；再按①×②的結(jié)果分為兩級(jí)：0分為陰性；1～9分為陽(yáng)性。有4張切片結(jié)果判定不一致，遂采用武漢同濟(jì)千屏病理科圖文綜合信息管理系統(tǒng)HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)免疫組化測(cè)量程序判定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。筆者參考Masaoka分期標(biāo)準(zhǔn)和WHO胸腺瘤組織分型標(biāo)準(zhǔn)及結(jié)合黃壯士等[6]對(duì)類似數(shù)據(jù)的合并方式，將Masaoka分期中Ⅱ～Ⅳ期合并后與Ⅰ期作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；將WHO胸腺瘤組織分型中A、AB型合并后與B、C型合并后作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)分析

免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)顯示，OPN主要表達(dá)在胸腺瘤腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿中，少量彌散表達(dá)在炎癥細(xì)胞、腫瘤周圍基質(zhì)及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中。

2.2 各組間OPN表達(dá)陽(yáng)性率比較

OPN在NNT組與胸腺瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見表1。在Masaoka分期Ⅰ期組與Ⅱ～Ⅳ期組間陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。在WHO分型A/AB型胸腺瘤組與B/C型胸腺瘤組間陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。在合并MG的胸腺瘤組與不合并MG的胸腺瘤組間陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表1 OPN在胸腺瘤組織和NNT組織中的表達(dá)情況（例）

表2 OPN在胸腺瘤Masaoka不同分期組間的表達(dá)情況（例）

表3 OPN在胸腺瘤WHO不同分型組間的表達(dá)情況（例）

表4 OPN在胸腺瘤是否合并MG組間的表達(dá)情況（例）

3 討論

胸腺瘤是成人最常見的前上縱隔腫瘤，約占50%[7]。目前臨床主要采用Masaoka分期法[3]，臨床Ⅰ期：包膜完整，鏡下無(wú)包膜浸潤(rùn)；臨床Ⅱ期：侵犯周圍胸膜或脂肪組織，或鏡下包膜浸潤(rùn)；臨床Ⅲ期：侵犯鄰近器官（心包、大血管、肺等）；臨床Ⅳa期：胸膜或心包播散；臨床Ⅳb期：淋巴道或血道轉(zhuǎn)移。其中Ⅰ期為非侵襲性胸腺瘤，Ⅱ～Ⅳ期為侵襲性胸腺瘤。而組織學(xué)分型主要根據(jù)2004年正式的WHO胸腺腫瘤組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)[4]，A型：髓質(zhì)型；AB型：兼具A型和B型胸腺瘤樣成分；B型：混合型（B1型：皮質(zhì)為主型，器官樣；B2型：皮質(zhì)型；B3型：鱗狀上皮樣、分化好的胸腺癌）；C型：胸腺癌；其中，A、AB型為低度惡性，B、C型為高度惡性。由于胸腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，細(xì)胞多樣化，單純從細(xì)胞學(xué)形態(tài)上很難在“腺瘤”和“腺癌”之間劃一條涇渭分明的界線。病理科醫(yī)生往往需要借助特殊標(biāo)記物染色的表達(dá)情況作為診斷的參考依據(jù)。

OPN是一種相對(duì)分子量約為44 kD的具有多種生物學(xué)功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白。它有一個(gè)N端信號(hào)序列及Gly-Arg-Gly-Asp-Ser細(xì)胞黏附序列，并含有28個(gè)功能結(jié)合區(qū)，包括鈣結(jié)合域、凝血酶裂解位點(diǎn)等，這使其具有多種功能，在細(xì)胞的黏附遷移、信號(hào)傳導(dǎo)及組織修復(fù)中具發(fā)揮著重要作用[8]。有研究報(bào)道，骨橋蛋白在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中有重要的作用，其具體機(jī)制可能有以下幾個(gè)方面：①通過(guò)與其受體-整合素和CD44結(jié)合后發(fā)揮作用[9]；②與血管通透性因子（VPF）/血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）發(fā)揮協(xié)同作用[10]；③通過(guò)自分泌及旁分泌途徑發(fā)揮作用[11]；④通過(guò)抑制一氧化氮（NO）的產(chǎn)生，使轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞易于存活[12]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，OPN主要表達(dá)于胸腺瘤腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿中，少量彌散表達(dá)在炎癥細(xì)胞、腫瘤周圍基質(zhì)及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中。據(jù)此筆者推斷胸腺瘤腫瘤細(xì)胞本身能夠產(chǎn)生和分泌骨橋蛋白，并通過(guò)分泌的骨橋蛋白來(lái)改變周圍的微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤迅速生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移；骨橋蛋白也可能通過(guò)旁分泌方式，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞和周圍的基質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。在本實(shí)驗(yàn)中，OPN的陽(yáng)性表達(dá)率在胸腺瘤中高于NNT組織，提示OPN參與了胸腺瘤的發(fā)生；OPN在Masaoka分期為Ⅱ～Ⅳ期的胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ期胸腺瘤，提示胸腺瘤中OPN的表達(dá)與腫瘤的侵襲性相關(guān)；OPN的陽(yáng)性表達(dá)率在WHO分型為B/C型的胸腺瘤中高于良性A/AB型胸腺瘤，提示OPN的表達(dá)與胸腺瘤的惡性程度相關(guān)；另外，OPN在合并MG的胸腺瘤和不合并MG的胸腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明OPN在胸腺瘤中的表達(dá)，與其是否合并MG無(wú)明顯相關(guān)性。

綜上所述，OPN可能在胸腺瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，OPN的表達(dá)可能成為胸腺瘤臨床診斷和患者預(yù)后判斷的一個(gè)重要參考指標(biāo)。

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