高效液相色譜法快速測定染色大黃魚的案例分析

王曉韡

福建寧德市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所 352100

食用檸檬黃的外觀為橙黃色粉末，微溶于酒精，不溶于其他有機溶劑。其學(xué)名為3-羧-5-羥（對磺苯）-4-（對磺苯基偶氮）鄰氮茂三鈉，英文名為Tartrazine。其結(jié)構(gòu)式如下：

圖1 檸檬黃的分子結(jié)構(gòu)式

檸檬黃是一種偶氮型酸性染料。主要用于食品、飲料、藥品及化妝品的著色，也用于羊毛、蠶絲的染色及制造色淀。水溶性合成色素，鮮艷的嫩黃色，廣泛用于冰淇淋、雪糕、果凍、酸奶、飲料、罐頭、糖果包衣等的著色。檸檬黃之所以能用做食品藥品染色劑，是因為它安全度比較高，基本無毒，不在體內(nèi)貯積，絕大部分以原形排出體外，少量可經(jīng)代謝，其代謝產(chǎn)物對人無毒性作用。但人如果長期或一次性大量食用檸檬黃、日落黃等色素含量超標(biāo)的食品，可能會引起過敏、腹瀉等癥狀，當(dāng)攝入量過大，超過肝臟負(fù)荷時，會在體內(nèi)蓄積，對腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害。

在寧德，溫州等地，近期內(nèi)接到多起舉報大黃魚染色案件，由于養(yǎng)殖大黃魚魚體顏色沒有野生鮮艷，不法商販?zhǔn)褂弥?、色澤鮮明、不易褪色、穩(wěn)定性好的合成著色劑檸檬黃或日落黃給大黃魚染色[1]，染色后魚體與野生大黃魚顏色相近，迎合部分消費者的不正確消費理念，達(dá)到以次充好的目的。

目前，測定檸檬黃和日落黃的方法有高效液相色譜法[2]，高效液相質(zhì)譜法[3]， ELISA法[4]等。由于魚本身有大量的脂肪和油脂，對分析方法要求高。使用固萃方法前處理成本高且容易堵柱。采取前處理改進(jìn)，以達(dá)到高效快速檢測合成色素的方法，來為快速打擊不法商販提供有力依據(jù)。

圖2 合成著色劑檸檬黃，日落黃的等吸收圖

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

Agilengt1260 Infinity高效液相色譜儀配有二級陣列紫外檢測器，檸檬黃，日落黃，莧菜紅，胭脂紅購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心（儲備液濃度0.5mg/mL），甲醇（色譜純），乙酸銨（分析純），超純水，無水乙醇（分析純），氨水（分析純），舉報案件黃魚樣品。

1.2 實驗方法與色譜條件

1.2.1 實驗方法

由于著色大黃魚一般為體表著色，引入大量魚肉不利于樣品處理和結(jié)果的有效分析，只取體表部分，用超純水進(jìn)行超聲浸泡，使用石油醚萃取樣品中的脂肪后取水層過聚酰胺粉小柱，用甲醇-甲酸（6+4）混合液洗滌后，使用超純水洗至中性，用無水乙醇-氨水-水溶液洗脫合成色素，收集解析液，乙酸中和，濃縮近干，加水定容后過0.45μm濾膜上機測試。

1.2.2 色譜條件

色譜柱： Agilent Eclipse Plus C18,5μm,4.6×150mm

流動相：甲醇-20mmol乙酸銨；

梯度洗脫：甲醇：10%~50%,5%/min;50%~90%，8%/min;90%~10%,20%/min

流速：1mL/min；

檢測波長： 428nm

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

從等吸收圖圖2中可以看出，合成著色劑檸檬黃，日落黃的最高吸收峰在428nm,為了達(dá)到出峰完美，檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的目的。采用428nm檢測波長。

2.2 流動相梯度洗脫的選擇

流動相等度洗脫時，無法將幾種合成著色劑有效地完全分離開，通過調(diào)節(jié)流動相的比例及使用梯度洗脫的方法，可以有效達(dá)到完全分離的效果如圖3，此分析方法中的流動相梯度洗脫可有效地用于分析食品中合成著色劑。

圖3 檸檬黃，日落黃，胭脂紅，莧菜紅標(biāo)樣的HPLC測定譜圖

2.3 案件大黃魚測定結(jié)果

舉報抽取的樣品測定結(jié)果如圖4所示，從測定的結(jié)果來看，舉報大黃魚樣品存在染色的現(xiàn)象，其染色物質(zhì)為合成著色劑檸檬黃，加入量為0.003g/kg。

圖4 大黃魚樣品中合成著色劑的HPLC測定譜圖

3 小結(jié)

本次試驗中的大黃魚樣品均檢測出含有檸檬黃色素，其被用來摻偽造假大黃魚，以達(dá)到“賣相好，銷路大”的不法目的，此類造假行為相當(dāng)普遍。由于合成色素對人體的危害大，故我們應(yīng)加大樣品抽查力度和執(zhí)法效率，希望業(yè)者買賣有良心，鼓勵市民舉報投訴，使不法行為無所遁形。

[1]陳建軍. 黃魚中摻有檸檬黃色素事件的調(diào)查.職業(yè)與健康，2002，18（5），43-44

[2]陳欣欣，謝婭黎，肖漢，楊彬. 現(xiàn)代食品科技， 2009，09

[3]黃曉雯. 超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測定紅燒老抽中六種合成色素的方法.食品工業(yè)科技, 2012, 33(16)

[4]邱凱，馬國文，柳增善，任立松，沈慶豐. 檸檬黃的ELISA檢測方法的建立.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2008,23（3），315-319