CIK細(xì)胞的心包腔內(nèi)灌注在惡性心包積液治療中的臨床研究

熊銳華，田秀榮△，姚紅兵，任 慶，唐新云，李金燕，曾麗莎，黃桂君▲

（中國人民解放軍第一八一醫(yī)院：1.腫瘤治療中心；2.肝膽外科，廣西桂林 541002）

惡性心包積液多為惡性腫瘤轉(zhuǎn)移所致，是晚期腫瘤的常見并發(fā)癥之一。中、大量心包積液屬急、危、重癥。若不及時(shí)治療可能導(dǎo)致患者死亡。目前治療惡性心包積液多采用盡量抽盡積液，于心包腔內(nèi)灌注化療藥物以抑制心包積液生成的方法，但該法存在不良反應(yīng)重、耐受性差等問題。2009年8月至2011年3月，本院采用心包腔內(nèi)灌注細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷（cytokine-induced killer，CIK）細(xì)胞治療惡性心包積液，取得了滿意的療效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院經(jīng)病理學(xué)和（或）細(xì)胞學(xué)證實(shí)的惡性心包積液患者45例，其中，男26例，女19例；年齡29～63歲，平均49歲；非小細(xì)胞肺癌27例，小細(xì)胞肺癌7例，乳腺癌轉(zhuǎn)移6例，消化系統(tǒng)轉(zhuǎn)移3例，B細(xì)胞惡性淋巴瘤2例；身體功能狀態(tài)（Karnofsky′s performance status，KPS）評(píng)分均不低于60分。

1.2 分組 將上述病例按治療方案分為化療組和CIK組。化療組22例，其中，男15例，女7例；年齡29～61歲，平均48歲；非小細(xì)胞肺癌13例，小細(xì)胞肺癌3例，乳腺癌轉(zhuǎn)移4例，消化系統(tǒng)轉(zhuǎn)移2例。CIK組23例，其中，男12例，女11例；年齡30～63歲，平均51歲；非小細(xì)胞肺癌14例，小細(xì)胞肺癌4例，乳腺癌轉(zhuǎn)移2例，消化系統(tǒng)轉(zhuǎn)移1例，B細(xì)胞惡性淋巴瘤2例。兩組患者在性別、年齡、病理類型方面的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有入組患者治療前均簽署知情同意書，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)論證通過。

1.3 CIK細(xì)胞的制備 外周血以淋巴細(xì)胞分離液分離并收集單個(gè)核細(xì)胞，以磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌3次，將細(xì)胞按2×106／mL的密度懸浮于RPMI 1640完全培養(yǎng)基中，加入干擾素γ（interferonγ，IFN-γ）1 000U／mL，于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后加入CD3單抗100ng／mL、白細(xì)胞介素2（interleukin 2，IL-2）1 000U／mL繼續(xù)培養(yǎng)，每隔2～3d分瓶1次，并補(bǔ)充RPMI 1640完全培養(yǎng)基及IL-2。培養(yǎng)10～14d檢測(cè)無污染后，收集CIK細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)約為1×109個(gè)），離心，生理鹽水洗滌3次，以生理鹽水20mL重懸細(xì)胞制成CIK細(xì)胞懸液。

1.4 CIK細(xì)胞的表型及病原學(xué)檢測(cè) 培養(yǎng)第10天，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面CD3、CD4、CD8、CD56等表面抗原情況，CD3＋CD56＋細(xì)胞所占百分比應(yīng)不低于20%，CD3＋CD8＋不低于40%，并經(jīng)微生物學(xué)檢測(cè)證實(shí)細(xì)菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素均為陰性。

1.5 治療方法 在B超或CT引導(dǎo)下行心包腔穿刺置管引流術(shù)，徹底引流心包積液?；熃M患者于心包腔內(nèi)灌注順鉑（60mg）及地塞米松（5mg），1次／周，連續(xù)2～3周；CIK 組患者于心包腔內(nèi)灌注CIK細(xì)胞懸液，每次注入的細(xì)胞數(shù)約為1×109個(gè)，連續(xù)3d。灌注藥物或CIK細(xì)胞懸液后夾管，并囑患者2h內(nèi)不斷轉(zhuǎn)動(dòng)體位，以使藥物或CIK細(xì)胞懸液與心包腔充分接觸?；熃M患者還給予止嘔、水化、利尿等對(duì)癥處理；CIK組患者預(yù)防性口服“吲哚美辛”。兩組患者定期采用彩色多普勒超聲儀檢測(cè)心包積液情況，并復(fù)查血常規(guī)、肝功能、腎功能。

1.6 療效評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 心包積液的療效評(píng)判按照WHO統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，完全緩解（complete remission，CR）：心包積液完全消失，并持續(xù)4周以上；部分緩解（partial remission，PR）：心包積液減少不低于50%，并持續(xù)4周以上；無變化（no change，NC）：心包積液減少未達(dá)到50%或病情進(jìn)展，將CR＋PR計(jì)為有效。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 療效的比較 化療組及CIK組心包積液患者治療的有效率分別為81.8%（18／22）、95.6%（22／23）。CIK 組患者的療效優(yōu)于化療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組心包積液患者療效的比較

2.2 不良反應(yīng)的比較 化療組患者存在骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、肝功能及腎功能損害等不良反應(yīng)；而CIK組患者的上述不良反應(yīng)均未發(fā)生，CIK組患者白細(xì)胞減少及胃腸道反應(yīng)的發(fā)生率明顯低于化療組（P＜0.05）。CIK組有3例患者出現(xiàn)中、低度發(fā)熱，體溫最高達(dá)38.3℃，均在2～3h后自行緩解，不影響治療的繼續(xù)進(jìn)行。

表2 兩組患者不良反應(yīng)的比較

續(xù)表2 兩組患者不良反應(yīng)的比較

3 討 論

惡性心包積液臨床上很常見，約10%～20%的惡性腫瘤患者并發(fā)惡性心包積液［1-2］，常因惡性腫瘤轉(zhuǎn)移所致，以肺癌、乳腺癌、惡性淋巴瘤等最為常見［3］，其中肺癌、乳腺癌所致惡性心包積液的發(fā)生率占其總發(fā)生率的60%～75%［4］。心包積液患者多以心包填塞癥狀為首發(fā)，如呼吸困難、疲勞、乏力、咳嗽、端坐呼吸等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)心力衰竭、心音遙遠(yuǎn)、奇脈等方面的癥狀及體征。若不及時(shí)處理，患者多死于心包填塞。因此，惡性心包積液，尤其是中、大量心包積液需積極治療。

目前對(duì)惡性心包積液處理中最常用的方法是徹底引流心包積液，然后向心包腔內(nèi)灌注化療藥物（順鉑最常用）行腔內(nèi)化療，有效率在80%左右［5-6］。但由于化療藥物的不良反應(yīng)，限制了其臨床應(yīng)用，尤其是一般狀況較差、無法耐受化療的患者。

隨著腫瘤免疫治療技術(shù)的發(fā)展，逐漸出現(xiàn)了采用淋巴因子激活的殺傷（lymphokine activated killer，LAK）細(xì)胞、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）及CIK細(xì)胞等進(jìn)行過繼性免疫治療的方法，這種方法以殺傷活性高、抗癌譜廣、不良反應(yīng)小、患者易耐受等特點(diǎn)逐漸被醫(yī)務(wù)工作者和患者接受，并廣泛應(yīng)用于臨床。國外學(xué)者曾將TIL向心包腔內(nèi)灌注用于惡性心包積液的治療［7］。目前國內(nèi)尚未見CIK細(xì)胞心包腔灌注治療惡性心包積液的報(bào)道，筆者曾將CIK細(xì)胞懸液行胸腔內(nèi)灌注治療惡性胸腔積液，療效顯著［8］。

基于上述研究，筆者將CIK細(xì)胞懸液于心包腔內(nèi)灌注治療惡性心包積液，同時(shí)以心包腔內(nèi)灌注順鉑為對(duì)照。研究結(jié)果顯示，CIK心包腔灌注的療效優(yōu)于順鉑心包腔灌注，分析其原因，除了CIK細(xì)胞具有較好的抗腫瘤活性外，還可能與CIK細(xì)胞的連續(xù)灌注使療效得到增強(qiáng)有關(guān)，而采用化療藥物心包腔灌注的治療間隔需1周。在不良反應(yīng)方面，接受CIK細(xì)胞心包腔灌注治療的患者除個(gè)別出現(xiàn)一過性中、低度發(fā)熱外，未發(fā)現(xiàn)其他不良反應(yīng)，而采用順鉑心包腔灌注化療的患者均出現(xiàn)了一定程度的骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)及肝、腎功能損傷等不良反應(yīng)，CIK組患者白細(xì)胞減少及胃腸道反應(yīng)的發(fā)生率明顯低于化療組（P＜0.05），提示CIK細(xì)胞心包腔灌注的不良反應(yīng)程度低于順鉑心包腔灌注化療，患者能更好地耐受，尤其對(duì)于一般情況差或本身有貧血，白細(xì)胞、血小板下降或肝、腎功能障礙而無法耐受化療或其他高強(qiáng)度治療的惡性心包積液患者，CIK細(xì)胞心包腔灌注治療對(duì)他們來說是最佳選擇。本研究中CIK細(xì)胞心包腔灌注治療惡性心包積液的療效優(yōu)于筆者既往報(bào)道的采用CIK細(xì)胞胸腔灌注治療惡性胸腔積液的療效，這可能與心包腔容積較胸腔容積小、CIK細(xì)胞的治療濃度更高、抗腫瘤活性更強(qiáng)有關(guān)。通過有效控制心包腔積液，大大改善了患者的生存質(zhì)量，延長了患者的生存期，更重要的是，為后續(xù)的抗腫瘤治療創(chuàng)造了條件。同時(shí)，筆者也曾嘗試CIK細(xì)胞腹腔灌注治療惡性腹腔積液，但效果不理想，這可能與惡性腹腔積液形成原因及腹腔環(huán)境更復(fù)雜、腹膜腔面積和容積大、CIK細(xì)胞無法達(dá)到有效的治療濃度有關(guān)。

總之，CIK細(xì)胞心包腔內(nèi)灌注是一種療效好、不良反應(yīng)小、安全性高的治療方法，值得在惡性心包積液的治療中推廣引用。

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［8］熊銳華，田秀榮，伍靖武，等.CIK細(xì)胞治療惡性胸腔積液的臨床研究［J］.腫瘤，2010，30（11）：973-975.