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    丹梔逍遙散對大腸桿菌感染致漫性盆腔炎大鼠模型治療作用的實驗研究

    2013-09-26 08:25:41程樂曹耀丹陳慧
    中國現(xiàn)代中藥 2013年2期
    關(guān)鍵詞:丹梔盆腔炎黏度

    程樂,曹耀丹,陳慧

    (1.成都軍區(qū)77126部隊醫(yī)院,重慶 402760;2.成都軍區(qū)空軍95696部隊醫(yī)院,重慶 402260;3.重慶市中藥研究院,重慶 400065)

    丹梔逍遙散對大腸桿菌感染致漫性盆腔炎大鼠模型治療作用的實驗研究

    程樂1*,曹耀丹2,陳慧3

    (1.成都軍區(qū)77126部隊醫(yī)院,重慶 402760;2.成都軍區(qū)空軍95696部隊醫(yī)院,重慶 402260;3.重慶市中藥研究院,重慶 400065)

    目的:探討丹梔逍遙散對大腸桿菌感染致慢性盆腔炎大鼠模型治療作用及其作用機理。方法:采用大腸桿菌感染致慢性盆腔炎大鼠模型。手術(shù)10d后灌胃給藥,丹梔逍遙散給藥劑量分別為40,20,10g生藥·kg-1,正常組和模型組每天灌服等容量的蒸餾水,20d后處死動物,取出兩側(cè)子宮稱重,計算炎癥腫脹度、腫脹率、抑制率,并取子宮進(jìn)行宮腔狹窄、閉鎖或擴張、炎細(xì)胞浸潤和上皮細(xì)胞壞死脫落等病理組織學(xué)指標(biāo)評分;另外取血進(jìn)行血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)檢測。結(jié)果:丹梔逍遙散高劑量和低劑量組能明顯減輕大腸桿菌致子宮內(nèi)膜損傷所致大鼠子宮炎癥,降低其腫脹度與腫脹率;高劑量組能明顯降低大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型白細(xì)胞含量;高、中劑量組大鼠病變程度較模型組有明顯改善,宮腔狹窄、閉鎖或擴張、炎細(xì)胞浸潤和上皮細(xì)胞壞死脫落等指標(biāo)評分均有顯著降低。各劑量組能明顯降低大腸桿菌感染所致慢性盆腔炎模型大鼠的全血黏度(高切、低切)、血漿黏度、變形指數(shù)、剛性指數(shù)、還原黏度(高切、低切)。結(jié)論:丹梔逍遙散對大腸桿菌引起子宮內(nèi)膜損傷所致慢性盆腔炎大鼠模型具有明顯抗炎作用和活血化瘀作用。

    丹梔逍遙散;盆腔炎;抗炎作用;活血化瘀

    盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜發(fā)生的炎性疾病,包括子宮內(nèi)膜炎、輸卵管卵巢炎、盆腔結(jié)締組織炎和盆腔腹膜炎等,臨床癥狀有白帶過多、經(jīng)量增多、月經(jīng)不調(diào)、腰痛、下腹墜脹等,甚至導(dǎo)致輸卵管膿腫、阻塞,異位妊娠或不孕癥等,本病屬中醫(yī)“下腹痛”“月經(jīng)不調(diào)”“帶下”等范疇[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為是正不勝邪,余邪未盡,濕熱之毒瘀積胞宮,乃致臟腑功能失調(diào),肝氣不舒,氣血瘀滯,沖任失調(diào),經(jīng)行不暢。丹梔逍遙散出自《內(nèi)科摘要》,是在《太平惠民和劑局方》所載“逍遙散”基礎(chǔ)上加丹皮、梔子二藥組成,具有清熱養(yǎng)血、疏肝健脾的作用,現(xiàn)臨床上采用丹梔逍遙散加減治療慢性盆腔炎獲得滿意療效,但未見相關(guān)實驗研究的報道,故本研究旨在探討丹梔逍遙散對大腸桿菌感染致慢性盆腔炎大鼠模型治療作用的影響,為臨床研究提供實驗依據(jù)。

    1 材料

    1.1 藥物和試劑

    將丹梔逍遙散藥材粗粉按處方比例混合,加水煎煮3次,每次2h,合并煎液,放置過濾使沉淀,取上清液濃縮至稠膏狀,即得。婦炎康片(昆明云健制藥有限公司,批號:201002113)。

    乙醚(上海馬陸制藥廠,批號:20020111);營養(yǎng)肉湯(北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司,批號:040203);大腸桿菌(Escherichia,E.coli)(重慶醫(yī)科大學(xué)微生物臨床診斷中心,編號:ATCC20019);肝素鈉(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?;瘜W(xué)試劑公司,1.0g/支,批號:F000128)。

    1.2 動物

    SD大鼠:60只,雌性,SPF級動物,合格證號:SCXK(渝)20070006號,重慶市中藥研究院實驗動物實驗室提供。

    1.3 主要儀器

    AW220型電子天平(日本 SHIMADZU公司);YXQ.SG41-280型電熱手提壓力蒸汽消毒器(上海醫(yī)用核子儀器廠);HH.B11型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠);離心機(北京醫(yī)用離心機廠,型號:LG5-2A);全自動血液流變快測儀(重慶大學(xué)維多生物工程研究所,型號:FASCO-3010B);YJ-1450型醫(yī)用凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備公司)。

    2 方法[4-5]

    2.1 實驗方法

    取200g左右雌性大鼠60只,隨機分為6組,每組10只,除正常組外其余各組大鼠乙醚麻醉后,碘酒消毒于下腹部正中剪一約1cm小口,暴露并固定子宮,抽取制備好的大腸桿菌懸液(濃度約為6×106)0.2mL,于子宮分叉處進(jìn)針插入右側(cè)子宮,用注射器針尖機械性損傷子宮內(nèi)膜組織,然后注入菌液,縫合傷口,正常喂養(yǎng)。手術(shù)10d后灌胃給藥,每日1次,連續(xù)20d,正常組和模型組給予同等體積蒸餾水。

    末次給藥后1h處死動物,取出兩側(cè)子宮稱重,計算炎癥腫脹度=右側(cè)致炎子宮-左側(cè)正常子宮,腫脹率 =(腫脹度/左側(cè)子宮)×100%,抑制率=(模型組子宮腫脹率-給藥組子宮腫脹率)/模型組子宮腫脹率。另外取血測定紅細(xì)胞壓積,腹主動脈取血4mL注入肝素抗凝試管中,用全自動血液流變快測儀自動測定全血黏度,再將全血離心,自動測定血漿黏度,并自動計算出聚集指數(shù)、剛性指數(shù)、變形指數(shù)。

    取子宮進(jìn)行宮腔狹窄、閉鎖或擴張、炎細(xì)胞浸潤和上皮細(xì)胞壞死脫落等病理組織學(xué)指標(biāo)評分。宮腔狹窄、閉鎖或擴張評分標(biāo)準(zhǔn)為:無明顯病變記為0分;病變小于1/3記為1分;1/3~2/3病變記為2分;2/3以上病變記為3分。炎細(xì)胞浸潤評分標(biāo)準(zhǔn)為:無炎細(xì)胞浸潤記為0分;少數(shù)散在或灶性且僅在黏膜層記為1分;散在或灶性但深入肌層記為2分;多數(shù)散在或灶性并累及全層記為3分。黏膜層及腺體萎縮評分標(biāo)準(zhǔn)為:各層次清晰記為0分;黏膜固有層腺體結(jié)構(gòu)消失記為1分;肌層與黏膜層分界不清記為2分;全層結(jié)構(gòu)不清記為3分。上皮細(xì)胞壞死脫落評分標(biāo)準(zhǔn)為:單層柱狀上皮記為0分;上皮細(xì)胞扁平或脫落小于1/3記為1分;上皮細(xì)胞扁平或脫落1/3~2/3記為2分;全層上皮細(xì)胞變性壞死記為3分。

    2.2 統(tǒng)計方法

    3 結(jié)果

    3.1 對慢性盆腔炎大鼠模型子宮和白細(xì)胞的影響

    由表1和表2可見,與正常組相比,模型組大鼠子宮腫脹度、腫脹率明顯增大、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)明顯升高,表明造模成功;丹梔逍遙散高劑量和低劑量組能明顯減輕大腸桿菌致子宮內(nèi)膜損傷所致大鼠子宮炎癥,降低其腫脹度與腫脹率;丹梔逍遙散高劑量組能明顯降低大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型白細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果表明,丹梔逍遙散對大腸桿菌引起子宮內(nèi)膜損傷所致慢性盆腔炎大鼠模型具有明顯抗炎作用。

    表1 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型子宮腫脹的影響(±s)

    表1 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型子宮腫脹的影響(±s)

    注:(1)n=10,(2)與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

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    表2 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型白細(xì)胞的影響(±s)

    表2 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型白細(xì)胞的影響(±s)

    注:(1)n=10,(2)與模型組比較,*P<0.05

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    3.2 對慢性盆腔炎大鼠模型血液流變學(xué)的影響

    由表3可見,與模型組相比,丹梔逍遙散各劑量組能明顯降低大腸桿菌感染所致慢性盆腔炎模型大鼠的全血黏度(高切、低切)、血漿黏度、變形指數(shù)、剛性指數(shù)、還原黏度(高切、低切)。表3結(jié)果表明,丹梔逍遙散對大腸桿菌引起子宮內(nèi)膜損傷所致慢性盆腔炎大鼠模型有明顯的活血化瘀作用。

    3.3 對慢性盆腔炎大鼠模型子宮病理組織學(xué)的影響

    鏡下觀察顯示正常組動物大鼠子宮黏膜上皮呈低柱狀,完整無損,黏膜層內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞分布均勻,黏膜層、環(huán)縱肌層、漿膜層完整,界限清晰;子宮腺體結(jié)構(gòu)正常,無增生或萎縮現(xiàn)象。模型組大鼠子宮具有宮腔狹窄、閉鎖或擴張、黏膜層及腺體萎縮、上皮細(xì)胞壞死脫落、炎細(xì)胞浸潤等病變,基本符合臨床慢性盆腔炎的病理特點,說明造模成功。

    由表4和圖1可見,與正常組相比,模型組大鼠子宮各種病理改變各項指標(biāo)評分均有明顯升高;丹梔逍遙散高、中劑量組大鼠病變程度較模型組有明顯改善,宮腔狹窄、閉鎖或擴張、炎細(xì)胞浸潤和上皮細(xì)胞壞死脫落等指標(biāo)評分均有顯著降低(P<0.01~0.05)。結(jié)果表明,丹梔逍遙散對大腸桿菌感染所致慢性盆腔炎大鼠模型有一定的治療作用。

    表3 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(±s)

    表3 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(±s)

    注:(1)n=10,(2)與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

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    表4 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型子宮病理變化評分的影響(±s)

    表4 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型子宮病理變化評分的影響(±s)

    注:(1)n=10,(2)與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01

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    圖1 對大腸桿菌感染所致大鼠慢性盆腔炎模型子宮病理變化的影響(×100)

    4 討論

    近年來臨床上盆腔炎發(fā)病率逐年上升,慢性盆腔炎常為急性盆腔炎未能徹底治療,或患者體質(zhì)較差,病程遷延所致,但亦可無急性炎癥病史。常見致病體有鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌、厭氧菌、淋球菌、支原體、衣原體等,慢性炎癥形成的瘢痕粘連以及盆腔充血,可引起下腹部墜脹、疼痛及腰骶部酸痛。丹梔逍遙散為疏肝健脾,理氣活血之要方。方中柴胡、香附疏肝理氣;當(dāng)歸、赤芍、丹皮、莪術(shù)活血化瘀;茯苓、白術(shù)健脾化濕;配甘草培補脾土,扶正以祛邪;黃芩清熱涼血,敗醬草、蒲公英、忍冬藤、白花蛇舌草清熱解毒。諸藥合用,共奏行氣活血、清熱解毒、化瘀止痛之功[6]。在本實驗室條件下,丹梔逍遙散對大腸桿菌感染致慢性盆腔炎大鼠模型有較好的抗炎作用和有明顯的活血化瘀作用,這種抗炎和活血化瘀作用為丹梔逍遙散能在慢性盆腔炎的治療中發(fā)揮顯著作用提供了實驗依據(jù)。

    [1]陳奇.中藥藥效研究思路與方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:854.

    [2]馬諸榮,蘇德模.藥品微生物學(xué)檢驗手冊[M].北京:科學(xué)出版社,2000:197-210.

    [3]陳天壽.微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1995:183.

    [4]魏云,吳愛萍,楊世平.婦炎康治療慢性盆腔炎的實驗研究[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2012,2(2):9-11.

    [5]李文紅,太鴻彬,楊建宏.盆腔消癥灌腸液對慢性盆腔炎大鼠血液流變學(xué)的影響[J].河北中醫(yī),2011,33(1):112-114.

    [6]王喬,曾安貴.丹梔逍遙散加減在慢性盆腔炎治療中的應(yīng)用效果觀察[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2011,8(4):52-53.

    The Experimental Study of Danzhi Xiaoyao Power on the Therapeutic Effect of Chronic Pelvic Inflammatory Disease Rat M odel Reduced by E.coli Infection

    CHENG Le1*,CAO Yao-dan2,CHEN Hui3
    (1.77,126 Troops Hospital of the Chengdu Military Region,Chongqing 402260,China;2.95,696 Troops Hospital of Chengdu Military Region Air Force,Chongqing 402260,China;3.Chongqing Academy of Chinese Materia Medica;Chongqing 400065,China)

    Objective:To study the therapy effect on chronic pelvic inflammatory disease ratmodel induced by E.coli infection by Danzhi Xiaoyao Power(DZXYP)and its mechanism of action.M ethods:Using chronic pelvic inflammatory disease ratmodel induced by E.coli infection.After 10 days surgery for drug lavage,DZXY Pdrug dose respectively 40,20 and 10g crude drug·kg-1,normal grou Pand model grou Ptaking the capacity of distilled water every day.After twenty days,putting to death animals,taking out on both sides of the uterus weighing,calculating inflammation swelling degree,swelling rate and inhibition rate,and taking the uterus in uterine cavity stenosis,blocking or expansion,inflammatory cells infiltration and epithelial cell necrosis off and pathological histology index score,taking blood and blood rheology test related indicators.Results:DZXY Phigh dose and low dose grou Pcan obviously reduce the inflammation of rat uterine;reduce the swelling degree and swelling rate.High dose grou Pcan obviously reduce leukocyte contents of the chronic pelvic inflammation model rats.Compared with model group,high and middle dose grou Pof rats lesion degree were obviously improved,uterine narrow,blocking or expansion,inflammatory cells infiltration and epithelial cell necrosis come index score were significantly reduced.Each dose grou Pcan obviously reduce the chronic pelvic inflammation model rats of whole blood viscosity,plasma viscosity,deformation index,rigid index,reducing viscosity.Conclusion:DZXY Phas significant anti-inflammatory effects and promote blood circulation to remove blood stasis role in the chronic pelvic inflammationmodel rats caused by the E.coli infection.

    Danzhi Xiaoyao Power(DZXYP);Pelvic inflammatory disease;Anti-inflammatory effects,Promoting blood circulation to dissipate blood stasis

    2012-08-24)

    *[通訊作者]程樂,E-mail:48857657@qq.com

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