牛病毒性腹瀉－黏膜病的血清學(xué)調(diào)查

雷程紅，郭芙莉，魏 蕾，舒 展，呂春華，黃楊波，吳智年，姚 剛

（1．新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊830052；2．阿勒泰地區(qū)動物疾病控制與診斷中心，新疆 阿勒泰836500；3．新疆哈巴河縣畜牧獸醫(yī)站，新疆 哈巴河836700）

牛病毒性腹瀉－黏膜?。˙VD）是由牛病毒性腹瀉－黏膜病病毒（BVDV）感染而引起的一種復(fù)雜、臨床類型多樣的疾病。病毒引致的急性疾病稱為牛病毒性腹瀉，引致的慢性持續(xù)性感染稱為黏膜病。目前，該病遍及全世界，給許多國家的畜牧業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。該病自1980年被證明在我國存在［1］以來至今，幾乎遍及全國各省區(qū)，部分省市的牛群中BVDV 抗體陽性率高達80%［2－4］。近幾年，新疆也陸續(xù)發(fā)生BVDV感染病例［5］。

為了解牛病毒性腹瀉－黏膜病的發(fā)生情況，2011年11月我們對哈巴河縣188頭牛隨機采血，采用ELISA方法，進行了牛病毒性腹瀉－黏膜病抗體檢測，以期為重視、預(yù)防和控制該病提供參考。

1 材料與方法

1．1 材料 被檢血清：哈巴河縣20個行政村的100頭牛、6個養(yǎng)殖小區(qū)的39頭牛，以及6個中小養(yǎng)殖場的49頭牛隨機采血，分離血清，于－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

檢測試劑：牛病毒性腹瀉－黏膜病毒ELISA抗體檢測試劑盒（比利時Bio－X公司）。

主要儀器設(shè)備：酶標儀，96孔90°V型微量反應(yīng)板，微量加樣器和吸頭，1．5mL離心管和離心管架，微量振蕩器、溫箱、冰箱、離心機。

1．2 方法 稀釋樣品：在96孔90°V型微量反應(yīng)板上用血清稀釋液2倍稀釋待檢血清和陰陽性血清。將稀釋好的血清移到ELISA板上，每孔100μL，37℃溫育2h。用洗滌液洗板3次，最后1次將孔拍干。

加酶標抗體：每孔100μL，37℃溫育0．5h。洗板如前。

加底物：每孔100μL，18℃～24℃避光放置10 min。

加終止液：每孔50μL，終止反應(yīng)。

結(jié)果判讀：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值，計算后判定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2．1 共檢測188頭牛血清，陽性170頭，陽性率90．4%，其中中小養(yǎng)殖場的陽性率最高，為98%，行政村和養(yǎng)殖小區(qū)的感染率相近，分別為88%、87．2%。結(jié)果見表1。

表1 BVDV抗體檢測

2．2 采樣縣海拔高，氣候惡劣，冬季漫長，災(zāi)害天氣頻繁，時常對該縣牲畜以及超載過牧的游牧生產(chǎn)方式造成嚴重威脅，牲畜未擺脫“夏壯、秋肥、冬瘦、春死”和大災(zāi)多死、小災(zāi)少死的局面。冬春季節(jié)牲畜抗病力明顯下降是該病感染率高的原因之一。另據(jù)調(diào)查，養(yǎng)殖戶科學(xué)飼養(yǎng)管理意識不強，外來車輛隨意進出養(yǎng)殖場，牛羊混養(yǎng)，人畜共用水源，糞便不堆積處理，圈舍簡陋衛(wèi)生差，擠奶消毒不嚴等等飼養(yǎng)管理方面存在的問題也在一定程度上有助于該病的發(fā)生。2．3 該縣未見有BVD記載，未開展過BVDV檢測，也未注射過BVD疫苗，該病從何而來？據(jù)調(diào)查，1980年以前，該縣牲畜只往外調(diào)運不引進，1980年以后開始引進良種牲畜，進行良種繁育。由此推測該病可能由引種帶入。

該病不僅感染牛，也感染綿羊、山羊、豬、鹿以及野生反芻獸［6］。該縣地處邊境，牲畜以草場放牧為主，該縣及附近縣有野生動物活動。因此，不排除該病是由野生動物感染家畜或互有感染或家畜之間相互感染的可能；另外，該縣牲畜繁殖有人工授精和自然交配，不排除由污染的精液傳播本病的可能［7］。

3 討論

3．1 近些年來隨著生活水平的提高，人們對牛肉和牛奶的需求量日益增長，致使養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展迅速。各地活畜交易頻繁使得許多牛病蔓延擴散，我國的牛病毒性腹瀉－黏膜病就是在引進國外牛時傳入的，目前很多省市、自治區(qū)都有該病報道，且感染率高。從這次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果看，該病在調(diào)查縣普遍存在，且感染率高，應(yīng)引起有關(guān)部門和養(yǎng)殖戶的高度重視。

3．2 該病能引起感染牛免疫力低下而誘發(fā)廣泛性感染，懷孕牛發(fā)生BVDV感染時可垂直傳播給胎兒，致使出生的犢牛終身帶毒，并在牛場中不斷排放大量病毒，污染牛場，引起該病的傳播［8］。這次調(diào)查結(jié)果說明，推測牛群中有持續(xù)性感染牛存在。下一步就是要對這些陽性牛進行抗原檢測，一旦檢測出抗原就可以確定哪些是持續(xù)性感染牛，從而對這些牛采取凈化處理。

3．3 該病在國外引起高度重視，但在我國則不然。究其原因主要有二：一是該病對牛造成的死亡率較小，不會造成重大公共衛(wèi)生問題，其經(jīng)濟和政治影響遠遠不及重大的人畜共患病，比如布魯菌病、結(jié)核病、包蟲病和口蹄疫嚴重，因此沒有引起有關(guān)部門和養(yǎng)殖戶的重視。其二是對該病的流行規(guī)律和危害的宣傳力度不夠，各級政府和養(yǎng)殖戶對該病的危害了解不多，因此沒有防制該病的意識。

3．4 綜合防控措施建議 借鑒國外經(jīng)驗，建議應(yīng)在以下幾方面做好防控工作。

3．4．1 在全疆范圍對該病進行一次普查：從檢測結(jié)果看，在采樣縣BVD感染率高，推測新疆其他地方很可能也存在該病感染，因此有必要對牛進行一次全疆范圍的普查，在采樣點還可以對羊和豬進行該病抽查，因為BVD也感染羊和豬。以此了解和掌握該病在新疆的感染情況，為進一步有效防控該病提供依據(jù)。

3．4．2 淘汰病原陽性牛 在普查的基礎(chǔ)上，進行該病病原檢測，對病原陽性牛堅決予以淘汰，逐步凈化牛群。

3．4．3 免疫預(yù)防 我國目前缺少國產(chǎn)BVDV疫苗，使用進口疫苗成本較高，在這種情況下，可以在該病感染率較高的地方先嘗試使用豬瘟弱毒疫苗［9］。豬瘟弱毒疫苗在預(yù)防BVD中有一定作用，其預(yù)防效果也見于一些研究報道［10］，但使用豬瘟疫苗要慎重，因為該苗是活苗，它在牛體內(nèi)是否會發(fā)生變異而帶來其他問題不是很清楚。

3．4．4 加強檢疫 不僅在新疆牛、羊、豬進出口檢疫中要加大對該病的檢疫力度，對于新疆各地之間引進牛時的檢疫以及對凍精的檢疫，也建議加上對該病的檢測。

［1］ 李佑民，劉振潤，武銀蓮．牛病毒性腹瀉黏膜病病毒株（長春184）的分離與鑒定［J］．中國獸醫(yī)學(xué)報，1983，3（2）：113－120．

［2］ 張俊杰，凌宗帥，黃凱，等．北京地區(qū)規(guī)模化奶牛場牛病毒性腹瀉病血清學(xué)調(diào)查［J］．中國奶牛，2010（10）：41－42．

［3］ 石冬梅，張華，鄧紅雨，等．河南省奶牛病毒性腹瀉－黏膜病血清學(xué)調(diào)查［J］．中國農(nóng)學(xué)通報，2011，27（7）：335－337．

［4］ 胥元鵬，陳學(xué)燦，崔正瀛，等．湖南規(guī)模奶牛場牛病毒性腹瀉的血清學(xué)調(diào)查［J］．中國獸醫(yī)雜志，2011，47（2）：36－37．

［5］ 牛國輝，季新成，段曉東，等．牛病毒性腹瀉病毒的分離與鑒定［J］．新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，47（5）：986－991．

［6］ 吳文輝，衛(wèi)秀余，余紅梅，等．豬群BVDV感染狀況調(diào)查及成因初步分析［J］．上海畜牧獸醫(yī)通訊，2011（4）：35－37．

［7］ Gard J A，Givens M D，Stringfellow D A．Bovine viral diarrhea virus（BVDV）：Epidemiologic concerns relative to semen and embryos［J］．Theriogenology，2007，68：434－442．

［8］ 王連江，齊長明，陳燕軍，等．牛病毒性腹瀉病（BVD）的危害及防制［J］．中國奶牛，2007（9）：33－34．

［9］ 王慧慧，時坤，于本峰，等．牛病毒性腹瀉疫苗的研究進展［J］．經(jīng)濟動物學(xué)報，2010（1）：59－62．

［10］劉亞剛，殷中瓊，劉世貴，等．豬瘟弱毒苗預(yù)防牛病毒性腹瀉／黏膜病的短期安全性與微量中和試驗［J］．四川大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2003（5）：970－973．