不同方法檢測正常人群血清甲胎蛋白比較

陳衛(wèi)文 劉雪輝 吳麗美 朱演葵

甲胎蛋白（A-fetoprotein，AFP）是原發(fā)性肝癌（PHC） 實驗室診斷和判斷肝病預(yù)后的重要指標，準確測定患者血清中AFP含量非常重要。臨床上測定AFP的常規(guī)方法有放射免疫法（RIA），酶免疫法（EIA）和膠體金法。近年來，化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)（CLIA）因其具有反應(yīng)快、靈敏度高、準確度高，標記物穩(wěn)定、對人體無放射性或毒性危害且特異性強等特點，是目前為止公認最好的微量定量檢測方法[1]。

筆者所在醫(yī)院的健康監(jiān)護科常年以正常健康體檢人群為調(diào)查對象，大批量篩查甲胎蛋白陽性的標本，酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）試劑成本低，敏感度高，適于大批量普查。本文旨在探討酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）和化學(xué)發(fā)光免疫檢測法（CLIA）檢測AFP敏感度和特異度，評價兩種方法的適用性。

1 材料與方法

1.1 標本 2012年6月到筆者所在醫(yī)院體檢的某單位正常公務(wù)員血清標本共2000份，其中男性1500例，女性500例。年齡28～56歲。

1.2 儀器與試劑 深圳愛康Uranus AE150全自動酶免儀，西門子Centuar化學(xué)發(fā)光儀。酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）試劑由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供。西門子Centuar化學(xué)發(fā)光免疫檢測法（CLIA）試劑均為原裝配套西門子Centuar校準物、質(zhì)控物和試劑。

1.3 方法 分別用酶聯(lián)免疫吸附試驗法，化學(xué)發(fā)光免疫檢測法測定某單位正常公務(wù)員血清標本共2000份，其中男性1500例，女性500例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 本實驗采用SPSS 11.0軟件。計數(shù)資料行 χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2000份正常公務(wù)員健康體檢的血清標本中，用酶聯(lián)免疫吸附試驗法和化學(xué)發(fā)光免疫檢測法檢測2000份正常公務(wù)員健康體檢的血清標本的甲胎蛋白，其中男性1500例，女性500例。年齡28～56歲。用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢出17例陽性，陽性率0.85%，敏感性為80.9%，1例經(jīng)確證為陰性，特異性為95%。假陽性率為5%[2]。用化學(xué)發(fā)光法檢測甲胎蛋白21例高于正常范圍，化學(xué)發(fā)光法檢出AFP高于正常范圍的21例中，陽性率1.05%，經(jīng)確證AFP高于正常范圍的21例均為陽性，敏感性為100%?；瘜W(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗法的敏感性比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗法的特異性比較差異有（P<0.05）。酶聯(lián)方法的精密度測定：批內(nèi)精密度測定用質(zhì)控血清在同一反應(yīng)板內(nèi)測定20個孔，測得（OD/CO值）X=2.30，S=0.2，CV=12.17%；批間精密度測定用同一批號質(zhì)控血清在每一反應(yīng)板測定一孔，連續(xù)測定20 d，測得（OD/CO值）X=2.21，S=0.30，CV=13.57%（OD為吸光度，CO為cut off值，X為均值，CV為變異系數(shù)）[3]。見表1。

表1 ELISA法和化學(xué)發(fā)光免疫檢測法檢測結(jié)果比較

3 討論

甲胎蛋白（α-fetoprotein，αFP或AFP）主要在胎兒肝中合成，分子量6.9萬，在胎兒13周AFP占血漿蛋白總量的1/3。在成人，AFP可以在大約80%的肝癌患者血清中升高，在生殖細胞腫瘤出現(xiàn)AFP陽性率為50%[4]。在其他腸胃管腫瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出現(xiàn)不同程度的升高。但當肝細胞發(fā)生癌變時，卻又恢復(fù)了產(chǎn)生這種蛋白質(zhì)的功能，而且隨著病情惡化它在血清中的含量會急劇增加，甲胎蛋白就成了診斷原發(fā)性肝癌的一個特異性臨床指標。過去一直認為是診斷原發(fā)性肝癌的特異性腫瘤標志物，具有確立診斷、早期診斷、鑒別診斷的作用[5]。近年大量的臨床卻發(fā)現(xiàn)，部分肝硬化患者會長期出現(xiàn)AFP達到上千，但多年都沒有肝癌的跡象；同時發(fā)現(xiàn)約20%的晚期肝癌患者，直至病故前，AFP仍不超過10。甲胎蛋白是肝癌的特異性標志，但血清甲胎蛋白陽性未必都是肝癌。在臨床中發(fā)現(xiàn)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高的患者同時有血清甲胎蛋白升高[6-7]。

酶聯(lián)免疫法是1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann，荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）[8]。ELISA現(xiàn)在已成為目前分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)（immunoenzymatic techniques）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附劑測定法，簡稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過顯色來檢測?；瘜W(xué)發(fā)光（chemiluminescence）是指伴隨化學(xué)反應(yīng)過程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象。某些物質(zhì)（發(fā)光劑）在化學(xué)反應(yīng)時，吸收了反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的化學(xué)能，使反應(yīng)的產(chǎn)物分子或反應(yīng)的中間態(tài)分子中的電子躍遷到激發(fā)態(tài)，當電子從激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時，以發(fā)射光子的形式釋放出能量，這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。由于方法學(xué)原理的不同，化學(xué)發(fā)光法較之酶聯(lián)免疫法敏感度和特異度高[9-10]。

本實驗運用酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法分別測定2000份健康人血清甲胎蛋白含量，除有1例經(jīng)用酶聯(lián)免疫法測不出，1例假陽性外，其余都相符?；瘜W(xué)發(fā)光法敏感度和特異度高，但試劑成本較高。酶聯(lián)免疫法的敏感度雖無化學(xué)發(fā)光法高，且受其他因素干擾會產(chǎn)生假陽性，但其試劑成本較低，適合于大批量健康人群體檢篩查用。為節(jié)約成本，可先采用酶聯(lián)免疫法篩查，血清甲胎蛋白陽性的標本用化學(xué)發(fā)光法定量測定，保證排除假陽性。對影像學(xué)肝臟異常的人用酶聯(lián)免疫法測不出甲胎蛋白陽性的標本用化學(xué)發(fā)光法定量測定，保證不漏檢1例。

[1] U.S.Department of Health and Human Services.Medicare，medicaid and CLIA program：regulations implementing the clinical laboratory provement amendment of 1988 （CLIA）.Final rule[J].Fed Regist，1992，57（1）：7002-7186.

[2] National Committee for Clinical Laborator Standards.EP9-A Method comparison and biasestimation using patient samples[S].Wayne，PA：NCCLS，1995：201-203.

[3]林峭影.兩種免疫分析系統(tǒng)檢測泌乳素的偏倚評估與可比性研究[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2010，13（1）：1355-1357.

[4]王治國.臨床檢驗質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：38-54.

[5]王羽.全國臨床檢驗操作規(guī)程[S].南京：東南大學(xué)出版社，2006：689.

[6]王庸晉.現(xiàn)代臨床檢驗學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2007：589.

[7]楊志英.兩種甲胎蛋白血清學(xué)檢測方法比較[J].中國社區(qū)醫(yī)師，2010，17（1）：147.

[8]黃嫵姣，黃憲章，周強，等.不同檢測系統(tǒng)甲胎蛋白測定結(jié)果的可比性研究[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2006，21（1）：360-363.

[9]嚴莉，喬翠玲.膠體金免疫層析法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測HCG的對比觀察[J].檢驗與臨床，2009，47（1）：111-114.

[10]王建宇.ELISA法與IRMA法在乙肝病毒血清標志物檢測結(jié)果分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師，2010，18（1）：164-165.