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    天南星提取物的抗炎作用及機制研究

    2013-09-19 09:27:54錢金栿
    大理大學(xué)學(xué)報 2013年9期
    關(guān)鍵詞:小鼠

    李 楊,陸 倩,錢金栿*

    (1.大理學(xué)院,云南大理 671003;2.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000)

    天南星為天南星科天南星屬植物,以塊莖入藥,其中云南資源最為豐富。其味苦、辛溫、有毒,具有燥濕化痰、祛風(fēng)止痛、散結(jié)消腫等功效,用于咳嗽,眩暈,驚風(fēng)等;外用治癰腫,蛇蟲咬傷〔1〕。天南星具有抗腫瘤、抗驚厥、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、祛痰、抗心律失常、抗氧化、殺滅釘螺、抗菌和抗炎等多種藥理活性〔2-5〕。但目前尚未見報道天南星提取物對急、慢性炎癥的作用研究,本實驗對天南星提取物抗炎作用及機制研究進行初步探討,以期為其臨床應(yīng)用和新藥開發(fā)提供實驗依據(jù)。

    1 實驗材料

    1.1 藥材 實驗用天南星采自云南大理蒼山,經(jīng)大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院夏從龍副教授鑒定為天南星科天南星屬植物天南星(Arisaemaerubescens(Wall.)Schott)。

    1.2 實驗動物 昆明種小白鼠,6~8周齡,體重18~22 g,雌雄各半。由昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,動物合格證號:SCXK(滇)2011-0004。

    1.3 實驗儀器及試劑 紫外分光光度儀(TU-1901,北京譜析通用儀器有限責(zé)任公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R-210,瑞士Buchi公司);電子天平(AL204-1C,梅特勒-托利多儀器有限公司);低速離心機(上海手術(shù)器械廠);醋酸(上海申博化工有限公司,批號:1103101);二甲苯(汕頭市達濠精細化學(xué)品有限公司,批號:20080919);阿司匹林腸溶片(南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司,批號:110904)。

    2 實驗方法

    2.1 天南星提取物樣品的準備 取天南星植株地下部分塊莖經(jīng)清洗、去皮、切片、干燥、粉碎,經(jīng)95%乙醇回流提取,再經(jīng)70%乙醇回流提取,過濾,減壓濃縮得醇提取物,加水溶解后經(jīng)乙酸乙酯萃取,得到乙酸乙酯提取物。取天南星塊莖粉末經(jīng)蒸餾水回流提取,過濾,得天南星水提取物。取天南星果實粗粉,經(jīng)甲醇回流提取6次,過濾后合并濾液,減壓濃縮得甲醇提取物,加水溶解后經(jīng)石油醚萃取,得到石油醚提取物。將上述提取物分別冷凍干燥后備用〔6〕。

    將上述提取物用生理鹽水溶解后,加入0.5%CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)后制成口服制劑,加入凡士林后攪拌均勻得外涂制劑(凡士林加熱熔化,放置,冷卻至50℃左右)。

    2.2 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 取小鼠60只,雌雄各半,隨機分為空白對照(生理鹽水)組、陽性對照(阿司匹林)組、果實石油醚提取物組,塊莖醇提取物組、塊莖乙酸乙酯提取物組和水提取物組,每組10只。灌胃給藥,連續(xù)3 d,末次給藥1 h后,于每只小鼠左耳雙面均勻涂抹二甲苯0.02 mL,右耳不涂作為對照,30 min后頸椎脫臼處死,用6 mm打孔器分別在雙耳相同位置打下耳片并稱重,以同一小鼠左右兩耳片重量差值為腫脹度,并計算腫脹抑制率〔7-8〕。

    腫脹抑制率=〔(空白對照組腫脹度-給藥組腫脹度)/空白對照組腫脹度〕×100%

    2.3 對小鼠棉球肉芽腫增生的影響 昆明種小鼠60只,分組同“2.2”項。將10 mg棉球種植于小鼠皮下,自手術(shù)后每日足部涂藥1次,連續(xù)7 d。末次給藥后24 h后頸椎脫臼處死,剝離棉球肉芽組織,置恒溫70 ℃烘箱烘至恒重,計算肉芽腫重量(mg)〔9-10〕。

    肉芽腫重量=肉芽腫干重-棉球重量

    2.4 對醋酸致小鼠毛細血管通透性的影響 取小鼠60只,分組同“2.2”項。灌胃給藥,1 次/d,連續(xù)7 d,末次給藥1 h后,尾靜脈注射0.5%伊文思藍生理鹽水溶液0.1 mL,并立即腹腔注射0.6%醋酸0.1 mL/10 g,20 min后頸錐脫臼處死,5 mL生理鹽水沖洗,洗液以3000 r/min離心15 min,取上清液于590 nm處測吸光度〔11〕。

    3 實驗結(jié)果

    3.1 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 天南星塊

    莖醇提取物、乙酸乙酯提取物、天南星果實石油醚提取物與生理鹽水組相比,小鼠耳廓腫脹度明顯下降(P<0.01)。與阿司匹林組比較,天南星乙酸乙酯提取物差異無統(tǒng)計學(xué)意義,提示其能顯著抑制二甲苯致小鼠耳腫脹。見表1。

    表1 天南星提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s,n=10)

    表1 天南星提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s,n=10)

    注:與生理鹽水組比較*P<0.05,**P<0.01;與阿司匹林組比較﹟P<0.05,﹟﹟P<0.01。

    組別 劑量/(g/kg) 腫脹度/mg 腫脹抑制率/%生理鹽水 - 1.92±0.69 -阿司匹林 0.30.86±0.53** 55天南星塊莖醇提取物 201.30±0.43**﹟ 32天南星塊莖乙酸乙酯提取物 200.99±0.35** 48天南星塊莖水提取物 201.54±0.47*﹟﹟ 18天南星果實石油醚提取物 201.24±0.62**﹟ 35

    3.2 對小鼠棉球肉芽腫增生的影響 與生理鹽水組比較,天南星塊莖醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物、天南星果實石油醚提取物肉芽腫質(zhì)量顯著下降(P<0.01),說明上述幾組對小鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用。見表2。

    3.3 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 與生理鹽水組比較,天南星塊莖乙酸乙酯提取物、天南星果實石油醚提取物(P<0.01)以及天南星塊莖醇提取物(P<0.05)伊文思藍滲出量顯著下降,提示能抑制冰醋酸所致的小鼠毛細血管通透性。見表3。

    表2 天南星提取物對小鼠棉球肉芽腫增生的影響(±s)

    表2 天南星提取物對小鼠棉球肉芽腫增生的影響(±s)

    注:與生理鹽水組比較*P<0.05,**P<0.01;與阿司匹林組比較﹟P<0.05,﹟﹟P<0.01。

    組別 劑量/(g/kg) n 肉芽腫干質(zhì)量/mg生理鹽水 - 887.52±11.89阿司匹林 0.31031.18±9.46**天南星塊莖醇提取物 201050.26±8.21**﹟﹟天南星塊莖乙酸乙酯提取物 201045.87±9.20**﹟﹟天南星塊莖水提取物 201057.12±9.64**﹟﹟天南星果實石油醚提取物 201049.54±8.82**﹟﹟

    表3 天南星提取物對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(±s)

    表3 天南星提取物對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(±s)

    注:與生理鹽水組比較*P<0.05,**P<0.01;與阿司匹林組比較﹟P<0.05,﹟﹟P<0.01。

    組別 劑量/(g/kg) n 吸光度/A生理鹽水 - 100.25±0.04阿司匹林 0.390.04±0.06**天南星塊莖醇提取物 20100.08±0.01*﹟﹟天南星塊莖乙酸乙酯提取物 20100.05±0.07**﹟天南星塊莖水提取物 20100.18±0.03﹟﹟天南星果實石油醚提取物 2090.06±0.05**﹟﹟

    4 討論

    炎癥發(fā)展一般分為三期,早起以毛細血管擴張、通透性亢進為主,中期表現(xiàn)為血小板吸附及白細胞游走,晚期為肉芽組織增生〔12〕。二甲苯致小鼠耳腫脹模型和毛細血管通透性實驗屬于炎癥反應(yīng)的早期,棉球肉芽腫試驗屬于炎癥反應(yīng)的晚期〔13〕。

    前期研究了天南星提取物不同給藥方式對于致炎動物的影響。對于炎癥早期(二甲苯致小鼠耳廓腫脹)模型,天南星提取物內(nèi)服、外涂均表現(xiàn)出顯著的抗炎作用。對于炎癥晚期(棉球致小鼠肉芽腫)模型,天南星提取物內(nèi)服無明顯作用,而外涂則表現(xiàn)出顯著的抗炎作用;這也和傳統(tǒng)及現(xiàn)代臨床對天南星使用的表述相符(如“生南星可治療腮腺炎、外涂可治療肋軟管炎,天南星復(fù)方口服,治療急性牙周炎、牙周膿腫?!钡龋?。天南星這種藥效作用的差異性可能和給藥途徑、藥物的作用機制與作用靶點等有關(guān)系,提示有必要做進一步深入的探討和研究。

    實驗表明天南星塊莖醇提取物、乙酸乙酯提取物,天南星果實石油醚提取物均能明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹度;對小鼠棉球肉芽腫增生都有抑制作用(外涂);且能明顯抑制冰醋酸所致的小鼠毛細血管通透性。說明上述提取物對于炎癥前期、炎癥后期均顯示明顯的作用,抗炎作用可能與抑制毛細血管通透性有關(guān)。通過本次研究細化了天南星抗炎的活性部位,為其臨床應(yīng)用和進一步研究開發(fā)提供實驗依據(jù)。

    〔1〕中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部〔S〕.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:53-54.

    〔2〕杜瀟.天南星藥理作用和臨床應(yīng)用研究概況〔J〕.醫(yī)學(xué)信息:中旬刊,2011,24(7):3408-3408.

    〔3〕楊國平,錢金栿.天南星研究概述〔J〕.中國民族民間醫(yī)藥,2009,18(3):19-21.

    〔4〕趙紅霞,汪文來,于智敏,等.半夏、天南星的臨床應(yīng)用及現(xiàn)代研究〔J〕.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2005,11(12):955-956.

    〔5〕韋英杰,楊中林.天南星研究進展〔J〕.時珍國醫(yī)國藥,2001,12(3):264-265.

    〔6〕李東,武彥舒,王燦,等.青黛鎮(zhèn)痛、抗炎藥效學(xué)研究〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(13):137-140.

    〔7〕孫宜春.貴州苗藥芭蕉根鎮(zhèn)痛抗炎活性部位及其質(zhì)量評價研究〔D〕.貴陽:貴陽中醫(yī)學(xué)院,2009.

    〔8〕陳奇,卞如濂,陳修.中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.2版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:274-277.

    〔9〕洪小鳳,王濤,施貴榮,等.隔山消不同極性提取物抑菌作用實驗研究〔J〕.中成藥,2011,33(6):146-148.

    〔10〕劉麗華,陳文清,李加林.兔兒傘總黃酮抗炎作用研究〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志,2013,19(13):291-293.

    〔11〕徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(xué)〔M〕.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:882-911.

    〔12〕張文平,陳惠群,張文書,等.千里光總黃酮的抗炎作用研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥,2008,19(3):605.

    〔13〕劉平懷,劉洋洋,陳德力,等.野生南藥海南蘿芙木抗炎作用研究〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(2):117.

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