厚樸不同提取工藝對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響

張慧敏，任 虹，何 瑤，劉 芳

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)技術(shù)學(xué)院，四川成都 611137;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川成都 611137)

厚樸不同提取工藝對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響

張慧敏1，任 虹2，何 瑤2，劉 芳2

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)技術(shù)學(xué)院，四川成都 611137;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川成都 611137)

為探討厚樸60%，70%，95%乙醇熱回流提取工藝對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響，采用小鼠甩尾實驗和熱板實驗測定厚樸提取液的鎮(zhèn)痛作用.實驗結(jié)果顯示，厚樸提取物組1，2，3號均能延長小鼠的甩尾痛域和熱板痛域(P＜0.05或P＜0.01)，其中60%乙醇熱回流提取組有強于70%乙醇熱回流提取組和95%乙醇熱回流提取組的趨勢，3種厚樸提取物對小鼠有明顯的鎮(zhèn)痛作用，60%乙醇熱回流提取組較優(yōu).

厚樸;提取工藝;甩尾實驗;熱板實驗

0 引言

藿香正氣制劑具有解表化濕、理氣和中的功效，常用于外感風(fēng)寒、內(nèi)傷濕滯或夏傷暑濕所致的感冒，癥見頭痛昏重、胸膈脾悶、脘腹脹痛、嘔吐泄瀉，胃腸型感冒見上述證侯者［1-2］.厚樸作為該方臣藥，功善行氣燥濕，降逆平喘，其功效主治基本符合人們利用藿香正氣系列制劑治療中暑、感冒和胃腸道不適等病癥.據(jù)中國食品藥品監(jiān)督管理局最新數(shù)據(jù)顯示，目前共有703種獲得了國藥準(zhǔn)字的藿香正氣制劑，是全國具有最多生產(chǎn)廠家生產(chǎn)且生產(chǎn)量最大的中成藥之一［3］.通過對相關(guān)文獻(xiàn)所收載藿香正氣制劑標(biāo)準(zhǔn)與文獻(xiàn)的查閱發(fā)現(xiàn)，目前厚樸提取工藝主要采用60%、70%、95%乙醇進(jìn)行熱回流.此外，還有學(xué)者研究利用超臨界CO2萃取、超聲法提取厚樸的工藝方法［3-6］.同時，厚樸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中又多是以厚樸酚為主要指標(biāo).這種制備工藝不統(tǒng)一與質(zhì)控指標(biāo)單一的矛盾，難以充分體現(xiàn)藿香正氣制劑的工藝設(shè)計與質(zhì)量控制的合理性和科學(xué)性.據(jù)此，本研究選用藿香正氣方中厚樸為模型藥物，就其不同提取工藝對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響進(jìn)行了研究，以期結(jié)合藥效作用優(yōu)選出厚樸在鎮(zhèn)痛作用方面效果顯著的提取工藝.

1 儀器與材料

1.1 儀器和試劑

實驗所用的儀器包括:R501B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申順生物科技有限公司)，HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)，RB-200智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司).

實驗所用的試劑包括:吲哚美辛腸溶片(25 mg/片)，重慶科瑞制藥有限責(zé)任公司，厚樸飲片(批號，120612)，四川科倫天然藥液有限公司.

1.2 實驗動物

實驗用昆明種小鼠，由成都達(dá)碩生物科技有限公司(實驗動物生產(chǎn)許可證編號，SCXK(川)2008-24)提供.

1.3 實驗藥液的制備

1)60%乙醇熱回流工藝樣品制備.取厚樸40 g，用60%乙醇200 mL，加熱回流3次，每次1 h，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇后，調(diào)整體積為1 000 mL.

2)70%乙醇熱回流工藝樣品制備.取厚樸40 g，用70%乙醇200 mL，加熱回流3次，每次1 h，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇后，調(diào)整體積為1 000 mL.

3)95%乙醇熱回流工藝樣品制備.取厚樸80 g，用95%乙醇200 mL，加熱回流3次，每次1 h，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇后，調(diào)整體積為1 000 mL.

4)將吲哚美辛腸溶片配成2.5 mg/mL的水溶液.

2 實驗方法

甩尾反應(yīng)和舔足反應(yīng)為脊髓反射，是防御性的反射，主要在脊髓水平進(jìn)行整合［7-11］.因此，本研究選取小鼠甩尾潛伏期和小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期作為研究厚樸鎮(zhèn)痛的主要指標(biāo)，以考察厚樸不同提取工藝的鎮(zhèn)痛作用.

2.1 小鼠甩尾實驗

選取體重18～22 g清潔級昆明種小鼠40只，雌雄各半.適應(yīng)數(shù)天后，隨機分為4組:陽性對照組(吲哚美辛腸溶片組)，厚樸藥物組1號(60%乙醇熱回流提取組)，2號(70%乙醇熱回流提取組)，3號(95%乙醇熱回流提取組).

在甩尾實驗時，將小鼠用容器固定，使其尾下部1/3垂直浸入48℃恒溫水浴鍋中，以其尾部進(jìn)入水面到回縮出水面的時間記為甩尾潛伏期(TFL).為防止小鼠燙傷，浸水截止時間為15 s，TFL超過15 s者，痛閾記為15 s.給藥前測痛閾2次，間隔5 min，取平均值記為基礎(chǔ)痛閾.然后將厚樸藥物組1號灌胃給予60%乙醇熱回流厚樸提取物(0.1 mL/只)，厚樸藥物組2號灌胃給予70%乙醇熱回流厚樸提取物(0.1 mL/只)，厚樸藥物組3號灌胃給予95%乙醇熱回流厚樸提取物(0.1 mL/只)，陽性對照組灌胃給予吲哚美辛腸溶片水溶液(0.1 mL/只)，分別測定各組小鼠在灌胃后0.5、1、2、3 h后的甩尾痛閾.

2.2 熱板實驗

首先取雌雄各半小鼠，置于55.0±0.5℃熱板上，開始計時，直至小鼠舔后足或跳出時停止計時，這段時間為該小鼠的潛伏期.給藥前先測定小鼠的基礎(chǔ)潛伏期，潛伏期大于30 s則淘汰，以此篩選出合格小鼠40只，分組及給藥方法同“2.1"項.篩選完24 h后開始給藥，在末次給藥0.5、1、2 h后再次測定小鼠的舔足時間，超過40 s不舔足者按40 s計.測定用藥前后各組舔足時間，并將其作為疼痛反應(yīng)指標(biāo).

3 實驗結(jié)果

3.1 不同提取工藝提取物對小鼠甩尾潛伏期影響

厚樸不同提取工藝提取物對小鼠熱水甩尾潛伏期的影響如表1所示.

表1 厚樸不同提取工藝提取物對小鼠熱水甩尾潛伏期的影響( ± s，n=10)

表1 厚樸不同提取工藝提取物對小鼠熱水甩尾潛伏期的影響( ± s，n=10)

注:與基礎(chǔ)痛域比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＞0.05.

給藥后痛域/s分組 基礎(chǔ)痛域/s 0.5 h 1 h 2 h 3 h陽性對照組 4.3±2.1 6.2±1.9＊＊5.9±1.7＊＊5.7±1.2＊＊ 4.6±2.3*厚樸藥物組1 4.3±1.9 6.6±2.1＊＊6.3±1.4＊＊ 4.9±0.9* 4.5±1.1＊＊＊厚樸藥物組2 4.4±1.1 6.1±0.9＊＊5.8±1.1＊＊ 4.7±1.2* 4.6±1.3＊＊＊厚樸藥物組3 4.5±2.5 5.9±1.3＊＊5.5±0.4＊＊ 4.7±1.0* 4.5±1.9＊＊＊

3.2 不同提取工藝提取物對小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期影響

厚樸不同提取工藝提取物對小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期的影響如表2所示.

表2 厚樸不同提取工藝提取物對小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期的影響(±s，n=10)

表2 厚樸不同提取工藝提取物對小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期的影響(±s，n=10)

注:與基礎(chǔ)痛域比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＞0.05.

給藥后痛域/s分組 基礎(chǔ)痛域/s 0.5 h 1 h 2 h陽性對照組 19.1±5.1 24.1±3.3＊＊23.4±5.8＊＊ 22.2±3.5*厚樸藥物組1 21.3±6.7 25.7±6.3＊＊ 23.3±4.4* 22.6±5.3＊＊＊厚樸藥物組2 18.9±4.4 22.4±2.9＊＊ 21.4±4.5* 19.7±4.1＊＊＊厚樸藥物組3 19.7±4.5 22.2±4.8＊＊ 21.5±3.6* 20.7±2.9＊＊＊

4 結(jié)論與討論

《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，厚樸“主中風(fēng)傷寒，頭痛，寒熱，驚悸，氣血痹，死肌，去三蟲".現(xiàn)代藥理研究也表明厚樸有鎮(zhèn)痛作用，此與藿香正氣制劑用于頭痛昏重、脘腹脹痛等癥狀的功效相符合.

實驗結(jié)果顯示，與基礎(chǔ)痛域相比厚樸3種提取工藝的提取物均可顯著延長小鼠的甩尾痛域和熱板痛域(P＜0.01)，表明厚樸提取物對小鼠有明顯、有效的鎮(zhèn)痛作用.在延長小鼠的甩尾痛域方面，厚樸的3種提取物組小鼠在0.5 h和1 h時痛域與其基礎(chǔ)痛域相比存在顯著性差異(P＜0.01)，在2 h時痛域與其基礎(chǔ)痛域相比存在差異(P＜0.05)，在3 h時痛域與其基礎(chǔ)痛域相比無顯著性差異(P＞0.05).在延長熱板舔足痛域方面，厚樸的3種提取物組小鼠在0.5 h時痛域與其基礎(chǔ)痛域相比存在顯著性差異(P＜0.01)，在1 h時痛域與其基礎(chǔ)痛域相比存在差異(P＜0.05)，在2 h時痛域與其基礎(chǔ)痛域相比無顯著性差異(P＞0.05)，其中厚樸藥物組1號(60%乙醇熱回流提取組)呈現(xiàn)出優(yōu)于其余2組的趨勢.

中藥制劑療效的好壞，其提取工藝是極為重要的影響因素之一.從厚樸不同提取工藝對小鼠甩尾痛域和熱板痛域的影響實驗結(jié)果可以看出，60%乙醇熱回流提取組優(yōu)于70%乙醇熱回流提取組和95%乙醇熱回流提取組.因此，本研究下一步擬采用HPLC、LC-MS等技術(shù)對3種不同提取工藝制備的提取液進(jìn)行化學(xué)成分的分析，同時結(jié)合厚樸中的有效成分含量、其他藥效學(xué)指標(biāo)、生產(chǎn)成本等因素，進(jìn)一步篩選出制備工藝合理、質(zhì)量穩(wěn)定可控且臨床療效顯著的最佳提取工藝技術(shù)線路.

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［1］彭成，白禮西.名優(yōu)中成藥研究與應(yīng)用——藿香正氣液［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011.

［2］國家藥典委員會.中國藥典(一部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］國家藥典委員會.中藥成方制劑［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996.

［4］孟蕾蕾，李夢，王國平.HPLC法測定藿香正氣膠囊中厚樸酚與和厚樸酚的含量［J］.齊魯藥事，2007，26(8):466-467.

［5］宋粉云，毋福海，鐘兆健，等.HPLC測定拈痛丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2007，22(3):324-326.

［6］丁廣宇.厚樸生品及炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥代動力學(xué)和組織分布研究［D］.沈陽:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

［7］王黎光，馬常義，王淑珍，等.莨菪類生物堿對嗎啡依賴小鼠痛閾影響的比較［J］.中國臨床康復(fù)，2004，8(20):4046-4047.

［8］朱自平，張明發(fā)，沈雅琴，等.厚樸的鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用［J］.中草藥，1997，28(10):613-615.

［9］王穩(wěn)，吳廷廷，王曉娟，等.山莨菪堿對地西泮小鼠催眠和鎮(zhèn)痛作用的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2011，27(2):274-276.

［10］鐘凌云，霍慧君，祝婧，等.不同姜制厚樸抗炎鎮(zhèn)痛作用實驗研究［J］.中藥材，2012，35(10):1576-1579.

［11］張一肖，田艷艷，宋致靜，等.加巴噴丁對七氟烷小鼠鎮(zhèn)痛、催眠、遺忘作用的影響［J］.上海醫(yī)學(xué)，2011，34(6):444-447.

Effects of Magnolia Officinalis with Different Extraction Techniques on Analgesia Function in Mice

ZHANG Huimin1，REN Hong2，HE Yao2，LIU Fang2
(1.Medical Technology College，Chengdu University of Traditional Chinese Medicince，Chengdu 611137，China;2.Pharmacy College，The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine，State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research，Development and Utilization of Chinese Medicine Resources，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)

This paper studies the effects of Magnolia Officinalis with 60% ，70% ，95%ethanol thermal circumfluence extraction techniques on analgesic function in mice.Analgesia function of Magnolia Officinalis extract is studied by using mice tail-flick test and hot-plate test.The experimental results show that，Magnolia Officinalis group No.1，No.2 and No.3 all can prolong the tail-flick and hotplate pain threshold of mice(P＜0.05 or P＜0.01)，and the 60%ethanol thermal circumfluence extraction group is better than the 70%ethanol thermal circumfluence extraction group and 95%ethanol thermal circumfluence extraction group.Magnolia Officinalis with three kinds of extracting techniques all have significant analgesic effects on mice，and the 60%ethanol thermal circumfluence extraction group is proved to be optimal.

Magnolia Officinalis;extraction technique;tail-flick test;hot-plate test

R917

A

1004-5422(2013)03-0235-03

2013-06-23.

張慧敏(1988—)，女，碩士，從事中藥新制劑與新劑型研究.