注射用鹽酸頭孢替安無菌檢查方法的建立及驗證

賀愛玲

注射用鹽酸頭孢替安為第二代頭孢菌素類抗生素, 其抗菌作用機理是阻礙細菌細胞壁的合成。它對革蘭陰性菌和陽性菌均具有廣泛的抗菌作用。本文通過多次驗證試驗, 對無菌檢查中的沖洗液和沖洗量進行了考察, 建立了適宜的檢查方法。

1 試驗材料

1.1 試驗樣品 注射用鹽酸頭孢替安(上海新先鋒藥業(yè)有限公司 , 規(guī)格 0.5 g)

1.2 試驗菌株 金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大腸埃希菌［CMCC(B)44102］、枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］、銅綠假單胞菌CMCC(B)10104］、生孢梭菌［CMCC(B)64941］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］ 均購于中國食品藥品檢定研究院。

1.3 試藥 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(100915)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(110331)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(1111072)、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(101118)、改良馬丁液體培養(yǎng)基(120515)均購于中國食品藥品檢定研究院。

1.4 儀器 HTY-2000A型集菌儀、高壓蒸汽滅菌器、凈化間、凈化臺、生化培養(yǎng)箱。

2 方法

2.1 菌液制備 取經(jīng)35 ℃培養(yǎng)18 h的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮肉湯培養(yǎng)物, 用0.9%無菌氯化鈉溶液進行10倍遞增稀釋, 使菌數(shù)約為50～100 cfu·ml-1。取經(jīng)35 ℃培養(yǎng)24 h的生孢梭菌的新鮮液體培養(yǎng)物, 用0.9%無菌氯化鈉溶液進行10倍遞增稀釋, 使菌數(shù)約為 50～100 cfu·ml-1。

取經(jīng)25 ℃培養(yǎng)24 h的白色念珠菌的新鮮液體培養(yǎng)物,用0.9%無菌氯化鈉溶液進行10倍遞增稀釋, 使菌數(shù)約為50～100 cfu·ml-1。

取經(jīng) 25 ℃培養(yǎng) 5 d 的黑曲霉的瓊脂斜面培養(yǎng)物 , 加 3～5 ml0.9%無菌氯化鈉溶液洗下霉菌孢子, 用0.9%無菌氯化鈉溶液進行 10 倍遞增稀釋 , 使孢子數(shù)約為 50～100 cfu·ml-1［1］。

2.2 方法 試驗組 取一次性全封閉三聯(lián)集菌器, 先用少量0.9%無菌氯化鈉溶液將膜潤濕, 取15支樣品, 注入200 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液, 充分溶解后, 全量過濾, 再用pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液邊振搖邊沖洗, 每桶的沖洗量為500 mL, 每次 100 mL, 在最后一次沖洗時加入試驗菌 , 過濾 , 然后加入相應(yīng)的培養(yǎng)基, 作為試驗組, 6種試驗菌同法操作。

陽性對照組 取一次性全封閉三聯(lián)集菌器, 注入相應(yīng)的培養(yǎng)基, 然后分別加入各試驗菌。

陰性對照組 取一次性全封閉兩聯(lián)集菌器 , 用 pH 7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液邊振搖邊沖洗, 每桶的沖洗量為500 mL, 每次100 mL, 然后將相應(yīng)的培養(yǎng)基加入到濾筒內(nèi)。

盛有硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的培養(yǎng)器置于35 ℃培養(yǎng)5 d；盛有改良馬丁液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)器置于25 ℃培養(yǎng)5 d, 觀察各試驗菌生長情況, 結(jié)果見表1(表中“+”表示有菌生長,“-”表示未見菌生長, 表2同)。

表1 驗證試驗各菌生長情況

3 結(jié)果

以此試驗方法, 試驗組各試驗菌均生長良好。因此, 注射用鹽酸頭孢替安的無菌檢查法為：先用少量0.9%無菌氯化鈉溶液將膜潤濕, 取規(guī)定量供試品, 注入200 mL0.9%無菌氯化鈉溶液, 充分溶解后全量過濾, 沖洗液為pH 7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液, 沖洗量為每膜500 mL, 陽性對照菌選用大腸埃希菌, 同時進行陰性對照試驗, 按照2010年版二部中國藥 典要求進行培養(yǎng), 結(jié)果見表2。

表2 注射用鹽酸頭孢替安無菌檢查試驗結(jié)果

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典(二部). 北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：附錄 107- 116.