蠅蛆粉和L－肉堿對青魚生長、免疫與抗氧化指標(biāo)及抗病力的影響

明建華 葉金云 張易祥 楊 霞 吳成龍 邵仙萍 劉 沛

(湖州師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院1，湖州 313000)

(大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院2，大連 116023)

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)向集約化、規(guī)?；较虬l(fā)展，養(yǎng)殖環(huán)境中的各種脅迫因子不斷增多，易導(dǎo)致養(yǎng)殖動物病害滋生，而抗生素和化學(xué)合成消毒劑的使用會造成耐藥性和藥物殘留等諸多問題。因此，通過營養(yǎng)調(diào)控手段來提高魚類的免疫力和抗應(yīng)激能力日益受到重視。蠅蛆不僅蛋白質(zhì)與氨基酸含量高，而且體內(nèi)還含有抗菌肽、幾丁糖、凝集素等具有免疫調(diào)節(jié)功能的物質(zhì)［1－4］。王娓等［2］研究發(fā)現(xiàn)，蠅蛆可以顯著提高中國對蝦(Fenneropenaeus chinensis)的抗桿狀病毒感染能力，激活對蝦的酚氧化酶系統(tǒng)。陳乃松等［3］以少量蠅蛆粉替代魚粉飼喂凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)，在一定程度上提高了對蝦抵抗弧菌的能力，但對蝦生長和飼料效率無正面影響。張洪玉等［4］研究表明，蠅蛆可顯著提高中國對蝦的生長速度，并增強(qiáng)抗白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)的感染力。L－肉堿(β－羥基－γ－三甲胺丁酸)是一種多功能的綠色飼料添加劑，主要參與機(jī)體的能量代謝，是脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行β－氧化的載體，可以加速脂肪的氧化，具有節(jié)約蛋白質(zhì)、促進(jìn)生長等作用［5］。近些年來，人們發(fā)現(xiàn)L－肉堿還具有抗細(xì)胞凋亡、免疫調(diào)節(jié)及抗氧化等功能［6－7］。

青魚(Mylopharyngodon piceus Richardson)是我國傳統(tǒng)淡水養(yǎng)殖的“四大家魚”之一，據(jù)《2011中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒》，我國養(yǎng)殖青魚年產(chǎn)量為42.4萬t。近年來青魚養(yǎng)殖病害有逐年上升的趨勢，而有關(guān)蠅蛆粉、L－肉堿作為青魚免疫增強(qiáng)劑的相關(guān)研究在國內(nèi)外尚未見報道。鑒于此，本試驗(yàn)在青魚飼料中分別添加蠅蛆粉和L－肉堿，探討其對青魚魚種生長、免疫和抗氧化指標(biāo)以及抗病原菌感染能力的影響，以期為研制安全環(huán)保的飼料添加劑提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚種、添加劑及日糧

青魚:湖州荻港徐緣生態(tài)旅游開發(fā)有限公司水產(chǎn)養(yǎng)殖部。試驗(yàn)選擇270尾體質(zhì)健壯，規(guī)格和體重基本一致的青魚魚種，初始體重(72.23 ±1.81)g，隨機(jī)分成3組，即對照組、蠅蛆粉組和L－肉堿組，每組設(shè)3個重復(fù)，分別飼養(yǎng)于設(shè)置在15畝池塘的9只網(wǎng)箱(規(guī)格為 3.0 m ×2.0 m ×1.5 m，水深 1.0 m)中，每只網(wǎng)箱放養(yǎng)30尾。

蠅蛆粉購自浙江德清綠態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司，含干物質(zhì)為93.27%、粗蛋白為53.46%，粗脂肪為22.4%;L－肉堿由北京桑普生物化學(xué)技術(shù)有限公司提供，有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%。

試驗(yàn)飼料組成及主要營養(yǎng)成分見表1，3種飼料等氮等能，以基礎(chǔ)日糧飼喂對照組，其余2組分別投喂添加蠅蛆粉25 g/kg、L－肉堿150 mg/kg(有效含量)的試驗(yàn)飼料。各種原料分別粉碎過60目篩，采取逐級擴(kuò)大法添加微量成分，使各組分充分混勻后，用小型飼料造粒機(jī)制成粒徑2 mm的沉性顆粒飼料，40℃烘干后于4℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)，%)

1.2 飼養(yǎng)管理

青魚魚種在池塘網(wǎng)箱中馴養(yǎng)7 d后投喂試驗(yàn)飼料。每天投喂2次(8∶30、16∶30)，日投飼量為魚體重2%～5%，并根據(jù)水溫、氣候變化及魚類攝食情況作適當(dāng)調(diào)整，以每次投飼后1 h無殘餌為宜。飼養(yǎng)期間水溫為26～29 ℃，pH 為6.8～7.6，溶解氧 ＞5 mg/L，氨氮＜0.05 mg/L。正式養(yǎng)殖60 d后結(jié)束，測定魚體長和體重。

1.3 攻毒試驗(yàn)

病原菌采用浙江省淡水水產(chǎn)研究所提供的嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophi1a)。按王文博等［8］所述方法，將兩次活化后的嗜水氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度為1×107cells/mL。飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，選擇體重基本一致的青魚進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，每只網(wǎng)箱取10尾魚，按每100 g魚重腹腔注射菌液0.5 mL;另外從對照組的每個網(wǎng)箱中再選取5尾青魚注射相同劑量生理鹽水作為攻毒對照。觀察1周，統(tǒng)計各組魚的死亡率和相對保護(hù)率。

1.4 采樣與處理

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，將各網(wǎng)箱魚稱重計數(shù)，每箱隨機(jī)選取4尾體重相近的青魚，用濃度為200 mg/L的MS－222作快速深度麻醉，經(jīng)稱重和量體長后用一次性醫(yī)用注射器從尾靜脈采血。血樣在4℃冰箱中靜置1～2 h后，以4℃ 3 000 r/min離心10 min制備血清，－20℃凍存?zhèn)溆谩ｔ~體采血后立即剖開腹腔，剝離出內(nèi)臟和肝胰臟并稱重，取適量肝臟用于常規(guī)分析，取部分背鰭下方側(cè)線以上的背部肌肉用于肌肉成分分析，均以－20℃保存。

1.5 測定指標(biāo)與方法

1.5.1 相關(guān)指標(biāo)的計算公式

分別按下式計算增重率、特定生長率、飼料系數(shù)、成活率、肝體比、內(nèi)臟比、肥滿度、死亡率和相對保護(hù)率。

增重率=(Wt－W0)/W0×100%

特定生長率=(lnWt－lnW0)/t×100%

飼料系數(shù)=FI/(W2+W3－W1)

成活率=Nt/N0×100%

肝體比=Wh/Wb×100%

內(nèi)臟比=Wv/Wb×100%

肥滿度=Wb/L3×100%

死亡率=Nd/Ni×100%

相對保護(hù)率=(Mc－Mt)/Mc×100%

式中:W0為魚初體均重/g;Wt為魚末體均重/g;t為飼喂天數(shù)/d;FI為每箱魚攝食飼料總量/d;W1為每箱魚初體總重/d;W2為每箱死魚的總重/d;W3為每箱魚末體總重/d;N0為初魚尾數(shù);Nt為末魚尾數(shù);Wh為每尾魚末肝臟重/d;Wv為每尾魚末內(nèi)臟重/d;Wb為每尾魚末體重/d;L為每尾魚末體長/cm;Nd為攻毒后死亡魚尾數(shù);Ni為受感染魚尾數(shù);Mc為對照組魚死亡率/%;Mt為試驗(yàn)組魚死亡率/%。

1.5.2 飼料和肌肉樣品成分分析

水分含量采用105℃烘箱干燥法(GB 6435—1986)測定;粗蛋白質(zhì)含量采用微量凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)測定;粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 6433—1994)測定;粗灰分含量采用550℃灼燒法(GB/T 6438—1992)測定;磷含量采用鉬黃分光光度法(GB/T 6437—2002)測定;總能利用氧彈測熱儀測定。

1.5.3 血液生化指標(biāo)的測定

總蛋白(TP)、溶菌酶(LSZ)、堿性磷酸酶(AKP)、補(bǔ)體C3和C4、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)、過氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)等在美國貝克曼Cx－4型全自動生化分析儀上測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5.4 肝臟抗氧化指標(biāo)的測定

肝臟樣品解凍后，用冷生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干后稱重，肝臟與勻漿介質(zhì)(pH 7.4)按1∶9(W∶V)的比例冰浴勻漿，制成10%勻漿液，然后4℃4 000 r/min離心10 min，取上清液用于分析。青魚肝臟SOD、GSH–Px、CAT和MDA的水平均用南京建成生物工程研究所的相應(yīng)試劑盒測定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包中的單因素方差分析(one－way ANOVA)和 D uncan氏多重比較，P﹤0.05表示差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚生長性能的影響

從表2可見，與對照組相比，蠅蛆粉和L－肉堿組青魚增重率和特定生長率均顯著提高(P＜0.05)，其中增重率分別提高了17.31%、13.98%，而特定生長率分別提高了10.59%、8.82%。蠅蛆粉和L－肉堿組的飼料系數(shù)較對照組分別顯著下降了11.29%、13.44%(P＜0.05)。飼料中添加蠅蛆粉和L－肉堿有提高青魚成活率的趨勢(P＞0.05)。在形體指標(biāo)上，蠅蛆粉和L－肉堿組魚體肝體比、內(nèi)臟比和肥滿度與對照組相比差異均不顯著(P＞0.05)，但有下降趨勢。由此可見，蠅蛆粉和L－肉堿均可促進(jìn)青魚的生長，降低飼料系數(shù)，但對魚體形體指標(biāo)無顯著影響。

表2 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚生長及形體指標(biāo)的影響

2.2 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚肌肉成分的影響

由表3可知，與對照組相比，蠅蛆粉和L－肉堿組青魚肌肉粗蛋白含量有升高的趨勢，而水分、粗脂肪和灰分的含量有下降趨勢(P＞0.05)。可見，蠅蛆粉和L－肉堿對青魚肌肉成分無顯著影響。

表3 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚肌肉成分的影響

2.3 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，與對照組相比，蠅蛆粉和L－肉堿組魚血清總蛋白、溶菌酶的水平均顯著提高(P＜0.05)，其中總蛋白含量分別提高了21.50%、18.70%，溶菌酶活性則分別提高了21.45%、14.52%。蠅蛆粉組魚血清堿性磷酸酶的活性也較對照組顯著提高了13.21%(P＜0.05)，而L－肉堿組與對照組的差異不顯著(P＞0.05)。蠅蛆粉和L－肉堿組魚血清補(bǔ)體 C3、C4的活性均顯著高于對照組，且蠅蛆粉組補(bǔ)體C4的活性還顯著高于L－肉堿組的水平(P＜0.05)。蠅蛆粉和L－肉堿組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均較對照組低，但差異均不顯著(P＞0.05)。由此可見，蠅蛆粉和L－肉堿均可不同程度地提高青魚血清總蛋白、溶菌酶、堿性磷酸酶以及補(bǔ)體C3、C4的水平，從而增強(qiáng)魚體的非特異性免疫力。

表4 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，在血清中，蠅蛆粉組SOD和CAT的活性顯著高于對照組(P＜0.05)，分別比對照組提高了19.77%、36.10%，而L－肉堿組SOD 和CAT的活性與對照組的差異均不顯著(P＞0.05);蠅蛆粉和L－肉堿組GSH－Px的活性分別比對照組顯著提高了20.94%、28.63%，而MDA的含量則分別比對照組顯著下降了 17.61%、22.09%(P ＜0.05)。在肝臟中，蠅蛆粉和L－肉堿組青魚SOD、GSH－Px和CAT的活性均顯著高于對照組，而MDA的含量則均顯著低于對照組(P＜0.05)。由此可見，蠅蛆粉和L－肉堿均可提高青魚血液和肝臟的抗氧化能力。

表5 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.5 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚感染嗜水氣單胞菌后的保護(hù)作用

由表6可知，青魚人工注射感染嗜水氣單胞菌1周后，對照組魚的死亡率為90.00%，而蠅蛆粉和L－肉堿組青魚的死亡率分別為63.33%、66.67%，相對保護(hù)率分別為29.63%、25.92%。對照組中注射生理鹽水的青魚沒有發(fā)生死亡現(xiàn)象，可排除試驗(yàn)操作導(dǎo)致的青魚死亡?？梢?，蠅蛆粉和L－肉堿可增強(qiáng)魚體的抗病原感染力，對青魚有一定的免疫保護(hù)作用。

表6 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚感染嗜水氣單胞菌后的保護(hù)作用

3 討論

3.1 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚生長性能的影響

蠅蛆粉在已有的研究報道中主要作為蛋白源的替代。馬建品等［9］用含25%蠅蛆粉的顆粒飼料飼喂草魚(Ctenopharyngodon idellus)，與含20%秘魯魚粉飼料的對照組相比，蠅蛆粉組魚體增重率提高了20.8%，蛋白質(zhì)效率提高了 16.4%。張洪玉等［4］研究表明，與配合飼料相比干蠅蛆可顯著提高中國對蝦的生長速度。本試驗(yàn)投喂的3種等氮等能飼料中，添加25 g/kg蠅蛆粉飼料組可顯著提高青魚的增重率和特定生長率、降低飼料系數(shù)，這可能與蠅蛆中含有未知的促生長因子有關(guān)。Ajani等［10］和 Ogunji等［11］將蠅蛆粉部分或全部替代羅非魚(Oreochromis niloticus)飼料中的魚粉，對魚體的增重率、特定生長率、飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率均無顯著影響;陳乃松等［3］和曹俊明等［12］在凡納濱對蝦(L.vannamei)的相應(yīng)研究中也得出了類似的結(jié)論。

對很多魚類而言，L－肉堿是一種促生長劑，參與機(jī)體的能量代謝，是脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行β－氧化的載體，可促進(jìn)脂肪的氧化供能，加快新陳代謝速度，提高飼料轉(zhuǎn)化率，節(jié)約蛋白質(zhì)的消耗［13－14］;另外，添加外源的L－肉堿彌補(bǔ)了魚體合成肉堿的不足，減少了魚體內(nèi)或飼料中賴氨酸和蛋氨酸的消耗，這被認(rèn)為是L－肉堿促進(jìn)生長的主要原因。研究表明，在飼料中添加適量L－肉堿可促進(jìn)草魚［14］、奧尼羅非魚(Oreochromis niloticus× Oreochromis aureus)［15］和斑點(diǎn)鱸(Morone saxatilis♂ × M.chrysops♀)［16］的生長，提高了飼料效率。本試驗(yàn)中，青魚攝食添加150 mg/kg L－肉堿的飼料后得到與上述報道一致的結(jié)果。但也有一些研究認(rèn)為飼料中添加肉堿對魚類生長和飼料系數(shù)并無影響，如大西洋鮭(Salmo salar)［17］、非洲鯰(Clarias gariepinus)［18］和虹鱒 (Oncorhynchus mykiss)［19］等。這些結(jié)果表明，蠅蛆粉和L－肉堿對魚類生長的作用效果可能受多種因素影響，如品種、生長發(fā)育階段、飼料組成與營養(yǎng)水平等，表現(xiàn)出一定的差異性。

3.2 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚免疫力和抗病力的影響

魚類血液成分的變化被廣泛地用來評價魚體的健康狀況、營養(yǎng)狀況以及對環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理、病理和毒理學(xué)指標(biāo)［20］。溶菌酶是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一，它產(chǎn)生于嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，并被分泌到血液及黏液中發(fā)揮溶菌效應(yīng)，研究表明機(jī)體溶菌酶活性提高，其免疫力也相應(yīng)提高［21－22］。堿性磷酸酶(AKP)是一種重要的代謝調(diào)控酶，可通過改變病原體的表面結(jié)構(gòu)而增強(qiáng)被侵襲機(jī)體對病原體的識別和吞噬能力［23］，有助于提高魚體的抗病力。補(bǔ)體是抵抗病原微生物感染的重要成分，在硬骨魚類中補(bǔ)體具有細(xì)胞溶解、細(xì)胞黏附、中和毒素、清除病原菌等重要的生物學(xué)效應(yīng)［24－25］。補(bǔ)體C4參與補(bǔ)體經(jīng)典途徑的激活過程，而補(bǔ)體C3在補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑和替代途徑中都起作用［25］。本試驗(yàn)中，蠅蛆粉可顯著提高青魚血清溶菌酶、AKP、補(bǔ)體 C3和 C4的活性(P ＜0.05)，從而增強(qiáng)魚體的非特異性免疫力。這與張洪玉等［4］和劉麗波等［26］有關(guān)蠅蛆可提高對蝦免疫力的報道相一致，可能與蠅蛆中含有抗菌肽、凝集素和溶菌酶等免疫活性物質(zhì)有關(guān)［1－4］。曹俊明等［12］研究認(rèn)為飼料中含適量蠅蛆粉可提高對蝦血清酚氧化酶活性，但對AKP的活性無影響，而陳乃松等［3］在飼料中以少量蠅蛆粉替代魚粉導(dǎo)致對蝦血清溶菌酶的活性下降。目前有關(guān)L－肉堿對魚類非特異性免疫力的影響還鮮見報道，本試驗(yàn)中L－肉堿可顯著提高青魚血清溶菌酶、補(bǔ)體 C3和 C4的活性(P ＜0.05)，但對 AKP活性無顯著影響。這可能與L－肉堿具有免疫調(diào)節(jié)及免疫治療的作用有關(guān)［5－7］。

嗜水氣單胞菌的攻毒試驗(yàn)也表明，蠅蛆粉和L－肉堿組青魚的死亡率均明顯低于對照組。由于大多數(shù)魚類特異性抗體的產(chǎn)生需要長期的適應(yīng)并通過產(chǎn)生記憶而形成［27］，因此本試驗(yàn)中青魚相對保護(hù)率的提高，可能與蠅蛆粉、L－肉堿提高了魚體溶菌酶、堿性磷酸酶、補(bǔ)體C3和C4以及SOD等非特異性免疫酶的活性有關(guān)［21－24，27］，從而增強(qiáng)了魚體的抗病力。

3.3 蠅蛆粉和L－肉堿對青魚抗氧化能力的影響

動物機(jī)體在新陳代謝的過程中，活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生和消除保持著動態(tài)平衡，過多的自由基會引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化物的主要成分，具有很強(qiáng)的生物毒性，會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能［28］。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)和過氧化氫酶(CAT)等組成的抗氧化酶系統(tǒng)可清除過多的自由基，減少脂質(zhì)的過氧化損傷［11，28－29］，其中SOD可特異性地催化超氧化物自由基歧化為過氧化氫和氧，過氧化氫在CAT和GSH－Px的作用下生成無毒性的水和氧;GSH－Px還可介導(dǎo)還原型谷胱甘肽催化脂質(zhì)過氧化物分解成相應(yīng)無毒性的醇。因此，檢測魚體血液和肝臟中SOD、GSH－Px、CAT和MDA的變化可較準(zhǔn)確地反映機(jī)體內(nèi)的抗氧化狀況。

本試驗(yàn)中，蠅蛆粉可顯著提高青魚血清和肝臟中SOD、GSH－Px和CAT的活性，降低MDA的含量(P＜0.05)，這表明飼料中添加適量蠅蛆粉可增強(qiáng)魚體的抗氧化能力，保護(hù)機(jī)體免遭過氧化物的損傷。但也有研究認(rèn)為蠅蛆粉對對蝦血清SOD［3，12］和羅非魚肝臟CAT［11］的活性無明顯影響。L－肉堿抗氧化功能主要表現(xiàn)在抑制ROS的產(chǎn)生、防止大分子氧化損傷和提高抗氧化酶類的活性及基因表達(dá)等［30－31］。目前，有關(guān)L－肉堿對魚類抗氧化能力的研究鮮見報道。本試驗(yàn)中L－肉堿可不同程度地提高青魚血清與肝臟中SOD、GSH－Px和CAT的活性，降低MDA的含量，從而增強(qiáng)魚體的抗氧化能力。

4 結(jié)論

在飼料中添加蠅蛆粉25 g/kg或L－肉堿150 mg/kg可促進(jìn)青魚的生長，提高魚體的非特異性免疫力和抗氧化能力，增強(qiáng)魚體抗病原菌的感染力，對防病抗病有一定的功效。

［1］王遠(yuǎn)程，左曉峰，孫東旭，等.家蠅幼蟲抗菌物質(zhì)組成及其理化性質(zhì)［J］.微生物學(xué)報，1997，37(2):148－153

［2］王娓，馮江，王振堂.對蝦暴發(fā)性流行病的群體感染及投飼蠅幼的抗病機(jī)制研究［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2002，13(6):728－730

［3］陳乃松，魏濤濤，廖奕招.蠅蛆粉和β－葡聚糖對凡納濱對蝦生長和免疫的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2007，31(6):771－777

［4］張洪玉，張?zhí)鞎r，孔杰，等.蚯蚓與蠅蛆對中國對蝦生長及抗白斑綜合癥病毒感染的研究［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2009，33(3):503－510

［5］Harpaz S.L － Carnitine and its attributed functions in fish culture and nutrition—a review ［J］.Aquaculture，2005，249(1－4):3－21

［6］Moretti S，F(xiàn)amularo G，Marcellini S，et al.L － carnitine reduces lymphocyte apoptosis and oxidant stress in HIV－1－infected subjects treated with zidovudine and didanosine［J］.Antioxidants ＆ Redox Signaling，2002，4(3):391 －403

［7］Dionyssopoulou E，Vassiliadis S，Evangeliou A，et al.Constitutive or induced elevated levels ofL－carnitine correlate with the cytokine and cellular profile of endometriosis［J］.Journal of Reproductive Immunology，2005，65(2):159 －170

［8］王文博，汪建國，李愛華，等.擁擠脅迫后鯽魚血液皮質(zhì)醇和溶菌酶水平的變化及對病原的敏感性［J］.中國水產(chǎn)科學(xué)，2004，11(5):408 －412

［9］馬建品，劉忠強(qiáng).用蠅蛆粉作魚類顆粒飼料蛋白源的試驗(yàn)［J］.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，1986(6):44 －45

［10］Ajani E K，Nwanna L C，Musa B O.Replacement of fishmeal with maggot meal in the diets of Nile tilapia，Oreochromis niloticus［J］.World Aquaculture，2004，35(1):52 －54

［11］Ogunji J O，Nimptsch J，Wiegand C，et al.Evaluation of the influence of housefly maggot meal(magmeal)diets on catalase，glutathione S － transferase and glycogen concentration in the liver ofOreochromis niloticus fingerling［J］.Comparative Biochemistry and PhysiologyA，2007，147(4):942 －947

［12］曹俊明，嚴(yán)晶，黃燕華，等.家蠅蛆粉替代魚粉對凡納濱對蝦生長、抗氧化和免疫指標(biāo)的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2012，36(4):529 －537

［13］Keshavanath P，Renuka P.Effect of dietaryL － carnitine supplements on growth and body composition of fingerling rohu，Labeo rohita(Hamilton)［J］.Aquaculture Nutrition，1998，4(2):83－87

［14］田娟，冷向軍，李小勤，等.肉堿對草魚生長性能、體成分和脂肪代謝酶活性的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2009，33(2):295－302

［15］Becker K，Schreiber S，Angoni C，et al.Growth performance and feed utilization response of Oreochromis niloticus×Oreochromis aureus hybrids to L－carnitine measured over a full fattening cycle under commercial conditions［J］.Aquaculture，1999，174(3 －4):313 －322

［16］Twibell R G，Brown P B.Effects of dietary carnitine on growth rates and body composition of hybrid striped bass(Morone saxatilis male×M.chrysops female)［J］.Aquaculture，2000，187(1 －2):153 －161

［17］Ji H，Bradley T M，Tremblay G C.Atlantic salmon(Salmo salar)fed L－carnitine exhibit altered intermediary metabolism and reduced tissue lipid，but no change in growth rate［J］.The Journal of nutrition，1996，126(8):1937 －1950

［18］Ozório R O A，Eekeren T H B，Huisman E A，et al.Effects of dietary carnitine and protein energy:nonprotein energy ratios on growth，ammonia excretion and respiratory quotient in African catfish，Clarias gariepinus(Burchell)juveniles［J］.Aquaculture Research，2001，32(1):406 －414

［19］Selcuk Z，Tiril S U，Alagii F，et al.Effects of dietaryL －carnitine and chromium picolinate supplementation on performance and some serum parameters in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)［J］.Aquaculture International，2010，18(2):213－221

［20］周玉，郭文場，楊振國，等.魚類血液指標(biāo)的研究進(jìn)展［J］.上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報，2001，10(2):163 －165

［21］M9ck A，Peters G.Lysozyme activity in rainbow trout，Oncorhynchus mykiss(Walbaum)，stressed by handling，transport and water pollution ［J］.Journal of Fish Biology，1990，37(6):873－885

［22］Haug T，Kjuul A K，Stensv.g K，et al.Antibacterial activity in four marine crustacean decapods［J］.Fish ＆ shellfish immunology，2002，12(5):371 －385

［23］Cheng T C.The role of lysosmal hydrolases in moluscan cellular response to immunologic challenge［J］.Comparative Pathology，1978，4:59 －71

［24］Tort L，Balasch J C，Mackenzie S.Fish health challenge after stress.indicators of immune competence ［J］.Contributions to Science，2004，2(4):443 －454

［25］王志平，張士璀，王光鋒.魚類補(bǔ)體系統(tǒng)成分及補(bǔ)體特異性和功能的研究進(jìn)展［J］.水生生物學(xué)報，2008，32(5):760－769

［26］劉麗波，李色東，陳鏡華，等.鮮活蠅蛆對凡納濱對蝦生長和免疫的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2010，29(12):721 －724

［27］Anderson D P.Immunostimulants，adjuvants and vaccine carrier in fish:application to aquaculture［J］.Annual Review of Fish Diseases，1992，2:281 －307

［28］Freeman B A，Crapo J D.Biology of disease:free radicals and tissue injury ［J］.Laboratory Investigation，1982，47(5):412－426

［29］Sies H.Oxidative stress:oxidants and antioxidants［J］.Experimental Physiology，1997，82(2):291 －295

［30］Ye J S，Li J，Yu Y，et al.L － carnitine attenuates oxidant injury in HK－2 cells via ROS－mitochondria pathway［J］.Regulatory Peptides，2010，161(1 －3):58 －66

［31］Miguel－ Carrasco J L，Monserrat M T，Mate A，et al.Comparative effects of captopril andL－carnitine on blood pressure and antioxidant enzyme gene expression in the heart of spontaneously hypertensive rats［J］.European Journal of Pharmacology，2010，632(1 －3):65 －72.