高效液相色譜法測(cè)定偏癱復(fù)原膠囊中阿魏酸含量

張 杰 ，趙文法 ，王 振

（1.山東省聊城市藥品檢驗(yàn)所，山東 聊城 252000； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

偏癱復(fù)原膠囊處方來(lái)源于聊城市中醫(yī)院名老中醫(yī)的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由川芎、當(dāng)歸等6味藥組方，有補(bǔ)氣活血、祛風(fēng)化痰的功效，用于氣虛血瘀、風(fēng)痰阻絡(luò)引起的中風(fēng)癱瘓、半身不遂、口眼歪斜、痰盛氣虧、言語(yǔ)不清、足膝浮腫、行步艱難、筋骨疼痛、手足拘攣。此方已在臨床使用多年，實(shí)踐證明其組方合理，療效確切。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》收載的川芎、當(dāng)歸都采用了高效液相色譜（HPLC）法控制其中阿魏酸的含量[1]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道多采用反相高效液相色譜法測(cè)定含有當(dāng)歸和川芎的復(fù)方制劑中的阿魏酸的含量[2－6]，亦有少數(shù)采用分光光度法、波層掃描法等來(lái)檢測(cè)阿魏酸的含量[7－10]。本試驗(yàn)在參考大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，采用HPLC法對(duì)偏癱復(fù)原膠囊中主要成分阿魏酸進(jìn)行了含量測(cè)定，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜系統(tǒng)（美國(guó)安捷倫公司）；BT125D型電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；KQ100型超聲波藥品處理機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。阿魏酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110773－200611）；偏癱復(fù)原膠囊（聊城市中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)分別為 201202001，201202002，201202003）；甲醇（色譜純，天津賽孚瑞科技有限公司），其他化學(xué)試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：70% 甲醇 －0.1% 磷酸水溶液（30 ∶70）；波長(zhǎng)：320 nm；流速：1.0 m L ／min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

避光操作，精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h的阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加70%甲醇稀釋成10μg／mL的溶液，即得對(duì)照品溶液。避光操作，取本品內(nèi)容物約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，水浴加熱回流30 min，放冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取按處方不加川芎和當(dāng)歸的樣品適量，依照供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下條件測(cè)定。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液中在與阿魏酸對(duì)照品溶液保留時(shí)間相應(yīng)的位置無(wú)色譜峰，說(shuō)明處方中其他組分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取阿魏酸對(duì)照品，精密稱定，制成 0.1，1，5，10，20，50，100 μg／m L 的溶液，在 2.1 項(xiàng)色譜條件下，分別注入液相色譜儀測(cè)定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為 Y＝57.682X＋5.370 6，相關(guān)系數(shù) r＝1.000。結(jié)果表明，阿魏酸質(zhì)量濃度在 0.1～100μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算。結(jié)果阿魏酸的 RSD為0.90%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：依法制備供試品溶液，分別在 0，2，6，12，20，24 h時(shí)進(jìn)樣 10μL，以峰面積計(jì)算，結(jié)果阿魏酸的 RSD為1.44%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品，依法制備供試品溶液，平行制備5份，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果阿魏酸的 RSD為2.20%，表明方法重現(xiàn)性符合要求。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的供試品（批號(hào)為201202001，含量為 0.10 mg ／粒，標(biāo)示裝量為 0.4 g）精密加入一定量的阿魏酸對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下操作，同時(shí)制備6份，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

2.4 樣品含量測(cè)定

對(duì)3批樣品進(jìn)行測(cè)定，分別按2.2項(xiàng)下方法制備樣品，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為201202001，201202002，2012003的樣品含量分別為 0.104，0.105，0.107mg ／粒。

3 討論

預(yù)試驗(yàn)時(shí)比較了加熱回流30min、超聲30min和超聲60min等不同的方法，結(jié)果加熱回流30 min有利于供試品溶液的制備，測(cè)定的阿魏酸含量較高。

阿魏酸溶液在堿環(huán)境中易分解，選用酸性的0.1%磷酸水溶液作為流動(dòng)相，而且阿魏酸對(duì)光不穩(wěn)定，試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)避光操作。試驗(yàn)表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

本研究參考國(guó)內(nèi)外大量有關(guān)阿魏酸含量測(cè)定方法的文獻(xiàn)資料并多次試驗(yàn)，結(jié)果顯示，本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，結(jié)果穩(wěn)定，可用于控制偏癱復(fù)原膠囊的質(zhì)量及本品中阿魏酸含量的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:38，124 －125.

[2]朱友林，邰順章.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定克洛己新干混懸劑中頭孢克洛和鹽酸溴己新的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9(3):114－116.

[3]李全斌，何開(kāi)勇，吳建萍.阿魏酸含量測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，17(3):117－118.

[4]張秀麗.HPLC法測(cè)定川芎中阿魏酸的含量[J].中國(guó)藥事，2009，23(5):469－471.

[5]呂光華，程世瓊.HPLC測(cè)定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35(2):194－197.

[6]周永其，胡道德.靈杞黃斑顆粒中阿魏酸含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31(2):224 － 226.

[7]李曉毛，張桂榮，李 馨.抗衰Ⅳ號(hào)沖劑阿魏酸含量測(cè)定[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2001，29(3):69 －70.

[8]龔明貴，董娟娥，李進(jìn)瞳，等.紙色譜分離－紫外分光光度法測(cè)定當(dāng)歸中阿魏酸含量[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，33(5):49－53.

[9]馮藝戎.TLC法測(cè)定安中養(yǎng)血合劑中阿魏酸的含量[J].安徽醫(yī)藥，2010，14(6):654 － 656.

[10]劉義梅，夏青松.薄層色譜法測(cè)定復(fù)方銀杏口服液中阿魏酸的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(4):276－277.