一測多評法研究進展＊

沈小鐘 ，劉 瑤 ，楊燕軍 ，楊 帆

(1.廣東省中藥研究所，廣東 廣州 510520;2.暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510632;3.重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121)

隨著中藥現(xiàn)代化步伐的進一步加快，無論是消費者、藥品生產(chǎn)企業(yè)、科研工作者還是藥品監(jiān)管機構(gòu)，都對中藥質(zhì)量提出了更高要求。現(xiàn)有中藥標(biāo)準(zhǔn)多以單一成分含量反映中藥產(chǎn)品質(zhì)量，但中藥成分復(fù)雜，僅以一種成分含量無法全面反映中藥質(zhì)量，通過多指標(biāo)同步質(zhì)量控制反映中藥質(zhì)量已成為眾多專家學(xué)者的共識[1]。傳統(tǒng)多指標(biāo)同步質(zhì)量控制必然要求眾多中藥對照品，為實現(xiàn)在中藥對照品緊缺、成本高昂的條件下的多指標(biāo)同步質(zhì)量控制，王智民等[2]于2006年首次提出了一測多評法(quantitative analysis of multi-components by single-maker，QAMS)來解決此問題。該法通過采用一種內(nèi)參物檢測多種組分，節(jié)約、準(zhǔn)確，已得到廣泛認(rèn)可和應(yīng)用，并收載于2010年版《中國藥典(一部)》[3]?，F(xiàn)對近年“一測多評”理論與應(yīng)用的研究進展進行初步探討，為中藥質(zhì)量控制提供參考。

1 概念與原理

一測多評法是通過測定中藥中一種代表性成分的含量，依據(jù)相對校正因子推算該中藥中多種待測成分含量，并控制計算值與實測值符合定量方法學(xué)要求的一種多指標(biāo)同步質(zhì)量控制方法。部分學(xué)者提出了其他名稱，如系統(tǒng)內(nèi)標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)多控法、替代對照品法等[4-16]，原理基本相同。

該方法的原理是[1]，在一定的線性范圍內(nèi)，成分的量(質(zhì)量或濃度)與檢測器響應(yīng)成正比。在多指標(biāo)(s，a，b，…，i，…)質(zhì)量評價時，以藥材(或成藥)中某一典型有效成分作內(nèi)參物(s)，建立內(nèi)參物與其他待測成分(a，b，…，i，…)間的相對校正因子(RCF，fsa，fsb，fsc，…)，fsi=fs/fi=(As/Cs)/(Ai/Ci)(公式一)式中 As為內(nèi)參物對照品s峰面積，Cs為內(nèi)參物對照品s濃度，Ai為某待測成分對照品i峰面積，Ci為某待測成分對照品i濃度。

在方法學(xué)建立時，主要是求出內(nèi)參物與各待測成分間的RCF，并把它作為一個常數(shù)用于含量測定中[3]。在測定含量時，內(nèi)參物(s)的濃度可按常規(guī)方法(藥典附錄ⅥD)進行測定(Cs)，應(yīng)用 RCF(fsa，fsb，fsc，…)，結(jié)合內(nèi)參物(s)實測值 Cs，計算待測成分(a，b，…，i，…)的濃度 Ci。Ci=fsi× Cs× (Ai/As)(公式二)式中 Ai為供試品中待測成分i的峰面積，Ci為供試品中待測成分i的濃度，As為供試品中內(nèi)參物s的峰面積，Cs為供試品中內(nèi)參物s的濃度，fsi為內(nèi)參物s對待測成分i的校正因子。

一測多評法由王智民等[2]首次提出，并應(yīng)用于木通的質(zhì)量評價研究。到目前為止，該方法已在多種中藥質(zhì)量評價研究中得到應(yīng)用，涉及皂苷、黃酮、生物堿、蒽醌等多類成分。高慧敏等[16]認(rèn)為，一測多評法將會成為未來中藥質(zhì)量評價的重要發(fā)展方向。

2 應(yīng)用

2.1 皂苷類內(nèi)參物

王智民等[2]以木通藥材為研究對象，實現(xiàn)了通過皂苷PJ1與白木通皂苷B和白木通皂苷C之間相對保留時間差進行色譜峰定位，利用皂苷PJ1和校正因子計算含量，結(jié)果與外標(biāo)法測定值無顯著性差異。朱晶晶等[17]同步測定人參和三七藥材中8種人參皂苷的含量，利用人參皂苷Rb1和校正因子同步測定人參二醇型皂苷 Rg1，Re，Rf，Rh1和原人參三醇型皂苷 Rc，Rb2，Rb3，Rd 含量，并將結(jié)果與外標(biāo)法所測結(jié)果進行比較，進一步驗證了一測多評法的可靠性和可行性。黃帥等[18]對一測多評法用于柴胡藥材3種皂苷含量測定技術(shù)適用性和應(yīng)用可行性進行了探討，實現(xiàn)了以柴胡皂苷a與柴胡皂苷c和柴胡皂苷d之間的相對保留時間差進行色譜峰定位，利用柴胡皂苷a和相對校正因子計算含量，結(jié)果與外標(biāo)法測定值無顯著性差異。曹恒濤等[19]建立了替代藥品對照法測定重樓藥材中重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅱ、重樓皂苷Ⅵ、重樓皂苷Ⅶ的含量測定方法，采用柴胡皂苷d為對照品，以柴胡皂苷d與4種重樓皂苷相對保留時間比進行色譜峰定位，利用柴胡皂苷和相對校正因子計算4種重樓皂苷含量。馬超一[20]則利用重樓皂苷Ⅰ為對照，采用一測多評法同時測定5種甾體皂苷含量。宋永貴等[21]建立了同時測定木通果實預(yù)知子中多種三萜皂苷成分的一測多評質(zhì)量控制方法，以皂苷PD和相對校正因子計算皂苷X、皂苷B、皂苷A含量。詳見表1。

表1 皂苷類內(nèi)參物QAMS研究

2.2 黃酮類內(nèi)參物

朱晶晶等[22]建立了黃芩藥材中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素4種成分一測多評法含量測定方法，通過黃芩苷和相對校正因子計算各成分的含量，與外標(biāo)法測定結(jié)果無顯著性差異。該試驗還考察了相對保留時間差和保留時間比作為色譜峰定位指標(biāo)的準(zhǔn)確性，得出相對保留時間差作為黃芩中目標(biāo)色譜峰定位方法比較合理。彭維等[23]建立了以槲皮苷為內(nèi)參物的一測多評法，驗證了其測定田基黃中4個黃酮成分含量與外標(biāo)測定法測得結(jié)果無顯著性差異。蔡海霞等[24]建立了黃芪中4個主要異黃酮類化合物的一測多評含量測定方法，以芒柄花素和相對校正因子計算毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷和毛蕊異黃酮的含量，實現(xiàn)一測多評，并對34批黃芪藥材及飲片計算結(jié)果與外標(biāo)法測定結(jié)果進行比較，結(jié)果均顯示計算值與實測值間無顯著性差異。于霄等[25]以淫羊藿藥材為研究對象，藥材中4個主要有效成分為指標(biāo)成分，分別建立淫羊藿苷與朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相對校正因子，計算含量，實現(xiàn)一測多評，并通過相對保留時間比對色譜峰進行定位，同時采用外標(biāo)法驗證，得出一測多評法計算結(jié)果與外標(biāo)法測定結(jié)果無顯著差異。李愛紅等[26]以槲皮素為內(nèi)參物，實現(xiàn)通過槲皮素與山柰素、異鼠李素之間相對保留時間比進行色譜峰定位，采用槲皮素和相對校正因子計算含量;同時分別采用外標(biāo)法和一測多評法測定銀杏葉膠囊中3種黃酮醇苷類成分的含量，結(jié)果顯示一測多評法計算值與外標(biāo)法的實測值之間沒有顯著性差異?？拙ЬУ萚27]采用一測多評法同步測定連翹中4個主要成分的含量，重點探討不同類型化合物之間開展一測多評研究的準(zhǔn)確性和可行性。詳見表2。

表2 黃酮類內(nèi)參物QAMS研究

2.3 生物堿類內(nèi)參物

宋亞芳等[28]以吳茱萸為研究對象，重點探討了一測多評法在不同類成分之間應(yīng)用的可行性與適應(yīng)性，建立吳茱萸次堿與吳茱萸內(nèi)酯、吳茱萸堿的相對校正因子，并用該校正因子進行含量計算，實現(xiàn)一測多評;同時采用外標(biāo)法測定藥材中含量，并比較計算值與實測值并無顯著性差異。研究發(fā)現(xiàn)，在選擇內(nèi)參物時，以吳茱萸次堿為內(nèi)參物，采用相對校正因子計算樣品中其他兩種成分的含量與實測結(jié)果誤差最小，而以吳茱萸內(nèi)酯或吳茱萸堿為內(nèi)參物計算其他兩種成分含量與實測結(jié)果誤差偏大。該方法對目標(biāo)色譜峰選擇相對保留比值方法進行定位。匡艷輝等[29]以黃連藥材為研究對象，以藥材中5個典型生物堿為指標(biāo)，建立小檗堿與巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿的相對校正因子，并用該校正因子進行含量計算，實現(xiàn)一測多評;同時采用外標(biāo)法測定藥材中該5種生物堿的含量，并比較得出計算值與實測值無顯著性差異。劉暉暉等[30]在藥典標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，建立黃連配方顆粒的一測多評標(biāo)準(zhǔn)。汪坤等[31]應(yīng)用一測多評法優(yōu)選黃連最佳提取工藝，可以有效提取黃連中小檗堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀多種生物堿，為中藥工藝合理性評價提供了新的思路。李文亮等[32]以博落回果實為研究對象，建立以原阿片堿和相對校正因子，計算別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿的含量，實現(xiàn)一測多評;同時采用外標(biāo)法測定藥材中4種生物堿的含量，驗證一測多評法的準(zhǔn)確性和可行性。尹萌等[33]建立了同時測定關(guān)黃柏中小檗堿、巴馬汀和藥根堿3種生物堿的一測多評方法，可用于控制關(guān)黃柏藥材及飲片的質(zhì)量。李岑等[34]以藏藥當(dāng)佐為研究對象，建立胡椒堿和校正因子計算沒食子酸、羥基紅花黃色素-A、桂皮醛的含量的一測多評法。劉永利等[35]建立咳喘寧片中5種生物堿類成分的一測多評含量測定方法，以嗎啡為對照，建立嗎啡和校正因子計算磷酸可待因、鹽酸罌粟堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量的一測多評方法，在進行色譜峰定位時研究發(fā)現(xiàn)兩種定位方法均不可靠。見表3。

表3 生物堿類內(nèi)參物QAMS研究

2.4 其他類內(nèi)參物

李文龍等[36]分別以綠原酸和咖啡酸為內(nèi)參物建立了金銀花中6種有機酸的一測多評方法。楊菲等[37]以中藥丹參為研究對象，以丹參素鈉為內(nèi)參物建立了原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B一測多評法。黃山君等[38]以芍藥苷為內(nèi)標(biāo)物，建立其與芍藥內(nèi)酯苷的相對校正因子，并進行含量測定，實現(xiàn)一測多評。楊芳等[39]首次將一測多評法應(yīng)用于川白芷藥材的質(zhì)量評價中，該法所得3種香豆素類成分含量與傳統(tǒng)外標(biāo)法所得含量之間沒有顯著性差異。楊桂秀等[40]將一測多評法應(yīng)用于黨參研究，以黨參炔苷為內(nèi)標(biāo)，實現(xiàn)黨參炔苷、黨參苷Ⅳ和蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的一測多評。王鈺瑩等[41]建立三黃片中以大黃素為內(nèi)參物，大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚的一測多評法。王瑞等[42]建立了赤芍中兩種不同類型共6個化學(xué)成分的一測多評法。馮偉紅等[43]以中藥秦皮為研究對象，以秦皮甲素為參照物，建立了秦皮乙素、秦皮苷和秦皮素一測多評法。賀鳳成等[44]建立五味子中4個木脂素類化合物一測多評法。林芳等[45]建立了杜仲中不同類成分的一測多評法，同時測定綠原酸、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量。孟江等[46]建立干姜藥材中4種姜酚類成分含量同時測定的一測多評法。見表4。

表4 其他類內(nèi)參物QAMS研究

3 結(jié)語

一測多評法因其獨特優(yōu)勢，具有廣泛的應(yīng)用前景。從已有的研究結(jié)果來看，合理建立的中藥一測多評法計算結(jié)果與外標(biāo)法測定結(jié)果無顯著性差異。由于該理論提出時間尚短，加上部分同原理卻不同名稱的方法出現(xiàn)，使得在應(yīng)用該法時，關(guān)鍵參數(shù)計算方法和取值標(biāo)準(zhǔn)選擇尤為重要，如相對校正因子RCFs取值:王智民教授等最初提出該理論時給出的 f值定義為 fi=Ci/Ai[2];而幾年后他對定義作了修正，在2011年其發(fā)表的一測多評法建立的技術(shù)指南中由公式一[1]推出f值定義已經(jīng)修正為 fi=Ai/Ci。因此，部分研究者試驗得出的RCFs值實際是1/f，但是未作說明容易產(chǎn)生混亂;此外，如作為一種標(biāo)準(zhǔn)建議統(tǒng)一取值方法，試驗結(jié)論需要對影響因素限定的應(yīng)該依據(jù)試驗結(jié)論加以限定并且進行驗證，個人認(rèn)為f值應(yīng)取驗證值為佳。

另一重要問題是多成分同步測定時指標(biāo)峰的定位。部分研究者可能忽略了該法是為克服對照品缺乏情況下，以一種對照品的檢測實現(xiàn)多指標(biāo)同步測定和質(zhì)量評價，部分文獻沒有給出校正時間，影響了研究在生產(chǎn)檢驗中的實際應(yīng)用價值;部分研究者在深入研究后發(fā)現(xiàn)建立的一測多評方法無法在缺少對照品前提下進行指標(biāo)峰定位，如劉永利等經(jīng)過深入研究后發(fā)現(xiàn)以嗎啡為內(nèi)參物建立咳喘寧片的含量測定方法一測多評法可以用于含量測定但是無法進行色譜峰定位，說明該方法用于該制劑質(zhì)量控制時還需要進一步深入研究。

筆者首次從應(yīng)用角度對現(xiàn)有一測多評研究現(xiàn)狀進行初步探討，并淺議了實際使用該法測定過程中可能碰到的一些問題。一測多評法是在對照品缺乏的情況下欲實現(xiàn)多指標(biāo)同步評價，由王智民教授提出，并且得到許多學(xué)者的推廣。作為一種多指標(biāo)質(zhì)量控制評價新模式和新方法，雖然提出之初是作為含量測定方法的一種補充，但是隨著藥品標(biāo)準(zhǔn)的提高，對照品需求量將會越來越龐大，制備大量對照品必然消耗過多的藥材資源并衍生出其他一些問題，而現(xiàn)代社會越來越提倡節(jié)約、低碳和環(huán)保理念，今后這種矛盾將會更加突出。如應(yīng)用該方法建立QAMS全國共享數(shù)據(jù)庫，不僅可拓寬該法的應(yīng)用范圍，也可為緩解日益突出的資源矛盾作出貢獻。

致謝:本文得到了廣東省食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評認(rèn)證中心周衛(wèi)軍老師的指導(dǎo)，在此致謝。

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