諾氟沙星膠囊的實(shí)時(shí)溶出度監(jiān)測

徐軼飛，苗愛東，楊 靜

諾氟沙星膠囊為第三代喹諾酮類藥物，具有抗菌譜廣、作用強(qiáng)的特點(diǎn)，口服后迅速吸收，組織分布良好，臨床應(yīng)用廣泛［1］。《中華人民共和國藥典》2010年版將2005年版諾氟沙星膠囊溶出度的溶出介質(zhì)由鹽酸溶液(9→1000)1000 ml改為pH 4.0醋酸緩沖液1000 ml，時(shí)間由45 min改為30 min測定溶出度，規(guī)定溶出度應(yīng)不得低于75%。pH 4.0醋酸緩沖液作為介質(zhì)與人體胃液環(huán)境相近，溶出速率是循序漸進(jìn)的，能正確評(píng)價(jià)藥品的內(nèi)在質(zhì)量［2］。FODT-601型光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀的連續(xù)自動(dòng)化檢測和分析，與現(xiàn)有的溶出度測定儀相比，不需取樣分析，不需過濾，真正實(shí)現(xiàn)了原位實(shí)時(shí)的溶出監(jiān)測，反映藥物的真實(shí)溶出過程［3］。近年利用光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀測定藥物溶出度的研究很多［4-8］，為探索光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀對(duì)諾氟沙星膠囊溶出度檢查方法的可行性，本實(shí)驗(yàn)用FODT-601光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀通過改變測定的光程和波長對(duì)4個(gè)廠家生產(chǎn)的諾氟沙星膠囊的體外溶出度進(jìn)行了考察，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

FODT-601光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀(上海富科思分析儀器有限責(zé)任公司);UV-2450紫外可見分光光度計(jì)(日本島津制作所);METTLER TOLEDO AG 285 電子天平 (d=0.01 mg)、METTLER TOLEDO DELTA 320精密pH計(jì)(上海梅特勒－托利多儀器有限公司);諾氟沙星對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):130450-200705，純度99.6%);諾氟沙星膠囊(規(guī)格均為0.1 g/粒，A廠，批號(hào):112002;B廠，批號(hào):120309;C廠，批號(hào):056110903;D廠，批號(hào)120302);冰醋酸(分析純);氫氧化鈉(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 諾氟沙星對(duì)照品溶液制備 取諾氟沙星對(duì)照品適量，精確稱取100.35 mg，置500 ml量瓶中，加醋酸緩沖液溶解稀釋至刻度，濃度為199.9 μg/ml，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取諾氟沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液10、20、30、40、50、60 ml用醋酸緩沖液稀釋至100 ml，得20、40、60、80、100、120 μg/ml的諾氟沙星對(duì)照品系列溶液，相當(dāng)于諾氟沙星膠囊溶出百分率的 20% 、40% 、60% 、80% 、100% 、120% 。

2.2 檢測波長的確定 在UV-2450紫外可見分光光度計(jì)上掃描測定上述對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜，發(fā)現(xiàn)諾氟沙星的最大吸收波長 277 nm，在550 nm處無吸收。用FODT-601在線掃描測定相當(dāng)于諾氟沙星膠囊溶出百分率100%濃度溶液的紫外吸收光譜，諾氟沙星溶液的最大吸收波長為277 nm，吸光度值＞1.0;根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版(二部)規(guī)定供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3 ～0.7 為宜［9］。通過比較不同的測定光程和測定波長，最終確定檢測波長為290 nm，參比波長為550 nm，參比波長可消除溶液中不溶顆粒的干擾，選擇0.5 mm探頭，使樣品100%溶出時(shí)，溶液的吸光度在0.3～0.7的范圍內(nèi)(圖1)。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 選擇0.5 mm的探頭，將其分別放入2.1項(xiàng)下的系列諾氟沙星對(duì)照品溶液中，在6個(gè)通道上同時(shí)測定檢測波長為290 nm時(shí)，諾氟沙星對(duì)照品溶液在20～120 μg/ml濃度范圍內(nèi)的吸收度值與濃度間的線性關(guān)系良好，線性方程:Y=bX+a，式中Y:溶出百分率，X:吸收度，見表1。

表1 6個(gè)通道的諾氟沙星溶出度與吸收度線性方程及相關(guān)系數(shù)

2.4 精密度 取100 μg/ml的諾氟沙星對(duì)照品溶液，分別考察日內(nèi)和日間精密度，計(jì)算所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為 0.3%和 1.4%，表明精密度良好。

2.5 回收率試驗(yàn) 取D廠(批號(hào):120302)的溶出液40 ml為本底置于100 ml量瓶，分別加入濃度為200 μg/ml諾氟沙星對(duì)照品溶液 10、20、30 ml，以上用醋酸緩沖液定容至刻度，按2.3項(xiàng)下方法測定，計(jì)算回收率，見表2。

表2 諾氟沙星膠囊溶出度回收率結(jié)果

2.6 溶出度檢查 采用FODT-601光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀，選擇0.5 mm的探頭，槳法，以醋酸緩沖液(冰醋酸2.86 ml+50%氫氧化鈉1 ml加水900 ml，振蕩，用冰醋酸或50%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.0，加水至1000 ml)1000 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為 50 r/min，設(shè)定溫度 37℃［9］，檢測波長為290 nm，參比波長為550 nm，采樣間隔60 s，實(shí)時(shí)記錄諾氟沙星膠囊的溶出情況。同時(shí)按《中華人民共和國藥典》2010年版(二部)規(guī)定方法在諾氟沙星膠囊溶出30 min時(shí)取溶液濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，照紫外－可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》附錄ⅣA)，在277 nm處測定吸光度［9］。按照《中華人民共和國藥典》2010年版(二部)方法與光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀測定的溶出度結(jié)果基本一致，見表3。

2.7 不同廠家諾氟沙星膠囊溶出曲線 實(shí)時(shí)監(jiān)測了4個(gè)廠家諾氟沙星膠囊的溶出過程，各廠家諾氟沙星膠囊的溶出曲線存在一定差異，A廠樣品溶出度結(jié)果不符合《中華人民共和國藥典》2010年版(二部)的規(guī)定，B、C廠樣品溶出度結(jié)果雖符合規(guī)定，但溶出率不高，在限度的邊緣，D廠樣品溶出度結(jié)果符合規(guī)定，而且溶出曲線一致性好，膠囊間差異小，見圖2。

表3 4個(gè)廠家諾氟沙星膠囊兩種方法的溶出度比較(±s)

表3 4個(gè)廠家諾氟沙星膠囊兩種方法的溶出度比較(±s)

方法 A廠 B廠 C廠 D廠光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測定儀 69.63 ±7.37 80.40 ±6.89 77.87 ±6.87 94.32 ±4.21《中華人民共和國藥典》2010 年版(二部) 71.57 ±7.84 81.85 ±6.52 79.17 ±7.97 93.48 ±3.69

圖2 4個(gè)廠家諾氟沙星膠囊實(shí)時(shí)溶出曲線

3 討論

通過對(duì)4個(gè)生產(chǎn)廠家的諾氟沙星膠囊的溶出曲線進(jìn)行考察，1個(gè)廠家不符合《中華人民共和國藥典》2010年版(二部)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，其余廠家雖符合規(guī)定但溶出率在限度的邊緣。《中華人民共和國藥典》2010年版將諾氟沙星溶出膠囊溶出度的溶出介質(zhì)由鹽酸溶液(9→1000)1000 ml改為pH 4.0醋酸緩沖液1000 ml。鹽酸溶液(9→1000)中pH值接近1，膠囊一放入即破殼溶解，所以在介質(zhì)鹽酸溶液(9→1000)中溶出不太科學(xué)，pH 4.0醋酸緩沖液作為介質(zhì)與人體胃液環(huán)境相近，能正確評(píng)價(jià)藥品的內(nèi)在質(zhì)量［2］?！吨腥A人民共和國藥典》2010版(二部)已將諾氟沙星膠囊溶出度考察條件更改，但有的廠家并沒有及時(shí)調(diào)整生產(chǎn)工藝，而出現(xiàn)藥物溶出率低的現(xiàn)象。建議相關(guān)生產(chǎn)、管理部門應(yīng)加強(qiáng)對(duì)藥物溶出度的監(jiān)測，以控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。

本實(shí)驗(yàn)通過調(diào)整探頭間距選擇合適的光纖探頭(即改變光程)，結(jié)合改變諾氟沙星膠囊的測定波長(290 nm)實(shí)現(xiàn)了對(duì)諾氟沙星膠囊溶出過程的原位、實(shí)時(shí)監(jiān)測，與《中華人民共和國藥典》2010版(二部)該制劑規(guī)定的方法比較，2種方法的檢查結(jié)果基本一致。光纖溶出度實(shí)時(shí)在線系統(tǒng)監(jiān)測4個(gè)廠家諾氟沙星膠囊，各廠家產(chǎn)品溶出過程不相似，這種差異與藥物的生物利用度和臨床療效密切相關(guān)，溶出度檢測能比較客觀地反映固體制劑的質(zhì)量。而按照現(xiàn)有的藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，只檢測終點(diǎn)溶出值，無法發(fā)現(xiàn)其間的差別［10］。建議改進(jìn)諾氟沙星膠囊的溶出度評(píng)價(jià)方法，全面分析和比較藥物的溶出曲線，以便能更有效地控制該制劑的質(zhì)量。

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