HPLC法測定吡拉西坦的含量

賈淑梅，關(guān)翠林

（山西大同大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，山西 大同 037009）

HPLC法測定吡拉西坦的含量

賈淑梅，關(guān)翠林

（山西大同大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，山西 大同 037009）

采用kromasil C18柱，流動相為甲醇-水（體積比為10∶90），檢測波長為210 nm，流速為0.8mL/min，柱溫為40℃，建立了高效液相色譜法測定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦含量的方法。結(jié)果表明：吡拉西坦在25～250μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)r為0.999 2，RSD為1.04％（n=6），吡拉西坦的平均回收率為100.2％。利用此法測定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦的含量，具有方法簡便、快捷、準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點(diǎn)。

高效液相色譜法；吡拉西坦；藥物含量

吡拉西坦氯化鈉注射液主要成份為吡拉西坦，能增強(qiáng)神經(jīng)興奮的傳導(dǎo)，對因缺氧所致的逆行性健忘有改進(jìn)作用。適用于急、慢性腦血管、各種中毒性腦病等多種原因所致的記憶減退及輕、中度腦功能障礙?？梢栽鰪?qiáng)記憶，提高學(xué)習(xí)能力[1-3]。

目前對吡拉西坦測定的方法有紫外分光光度法[4-5]、氣相色譜法[6]、熒光光譜法、高效液相色譜法[7-9]等。紫外分光光度法簡便可靠，但靈敏度較低，檢測速度也較慢，不能很好地滿足當(dāng)今快速微量測定的現(xiàn)實(shí)要求；氣相色譜法分離效果好，靈敏度高，分析速度快，操作方便，但是受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜分析，使它的發(fā)展受到了束縛；熒光法靈敏度高、檢出限低、但能產(chǎn)生強(qiáng)熒光的化合物相對較少。本文采用kromasil C18柱為色譜柱，以甲醇-水（10∶90）為流動相，檢測波長為210 nm的條件下，建立了反相高效液相色譜法測定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦含量的方法。該方法不僅干擾因素少，而且簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為吡拉西坦氯化鈉注射液制劑質(zhì)量鑒定的指標(biāo)之一。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

日本島津（SHINADZU）LC-10A高效液相色譜儀；SPD-M10A二極管陣列檢測器，CLASS-VP色譜工作站；HANGPING FA2004電子天平（上海天平儀器廠）；25μL微量進(jìn)樣器（日本島津公司）

甲醇（色譜純）；吡拉西坦對照品（中國藥品生物制品檢定所）；吡拉西坦氯化鈉注射液（東北制藥總產(chǎn)，產(chǎn)品批號：200905002）；配制用水均為Milli-Q純水器處理的二次蒸餾水。

1.2 色譜條件

色譜柱：kromasilC18柱（5μm，150nm×4.6nm），流動相為甲醇-水（10∶90），流速為0.8mL/min，檢測波長210 nm，進(jìn)樣量20μL，柱溫40℃。

1.3 溶液配制

1.3.1 對照品溶液的配制

稱取吡拉西坦對照品0.250 0 g于500mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度線，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的吡拉西坦對照品溶液，測定時取上述對照品溶液配制成適宜質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2 樣品溶液的稀釋

量取0.50mL吡拉西坦氯化鈉注射液于100mL的容量瓶中用流動相稀釋至刻度線，搖勻待用。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

取20μL進(jìn)樣液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行分析，記錄色譜圖，對其積分獲得峰面積，繪制吡拉西坦的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜圖對照

量取吡拉西坦對照品適量，用流動相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為160μg/mL的吡拉西坦對照品溶液。取1.3.2項(xiàng)下的樣品溶液。在1.2項(xiàng)的色譜條件下分別進(jìn)樣測定，得對照品及樣品的色譜圖，對比可知，氯化鈉對測定無干擾。

2.2 流動相的選擇

依據(jù)吡拉西坦既易溶于水又易溶于甲醇的性質(zhì)，以甲醇和水作為流動相。在流速為0.8mL/min時，分別以甲醇與水的體積比為10∶90，20∶80為流動相測定。結(jié)果顯示當(dāng)甲醇與水的體積比為10∶90時，吡拉西坦的保留時間約為3.5min，且峰形尖銳（圖2）；當(dāng)甲醇與水體積比為20∶80時的保留時間大約為2min，而溶劑峰在1.5min左右，為防止溶劑對吡啦西坦造成干擾，所以選擇甲醇與水的體積比為10∶90。

2.3 測定波長的選擇

觀察在線光譜圖，吡啦西坦在195 nm左右有最大吸收。但是在此波長下，氯化鈉也有吸收，對分析結(jié)果準(zhǔn)確度有影響，所以該實(shí)驗(yàn)選擇210 nm為測定波長。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和檢出限

分別量取2.3.1項(xiàng)下的吡拉西坦對照品溶液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL于6支10 mL的比色管中，用流動相稀釋至10mL刻度，搖勻，即配制成質(zhì)量濃度分別為25，50，100，150，200，250μg/mL的吡拉西坦對照品溶液。分別在2.2項(xiàng)的色譜條件下測定，以峰面積A對吡拉西坦的質(zhì)量質(zhì)量濃度ρ進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為A=2238 6ρ＋34 907，相關(guān)系數(shù)r=0.999 2，吡拉西坦在質(zhì)量濃度25～250μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

用流動相配制不同質(zhì)量濃度的吡拉西坦對照品溶液，在2.2項(xiàng)的方法下測定，記錄色譜圖。以3倍信噪比得該方法的檢出限為1.4μg/mL。

2.5 穩(wěn)定性和精密度試驗(yàn)

量取吡拉西坦氯化鈉注射液0.50mL于100mL得容量瓶中，用流動相稀釋至刻度線，搖勻，分別放置0，2，4，6，8，10 h，再于2.2項(xiàng)的色譜條件下測定，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.11％，表明樣品溶液的穩(wěn)定性較好。

取2.3.2項(xiàng)下的樣品溶液，在2.2項(xiàng)的色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定結(jié)果平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.04％，表明本方法的精密度良好。

2.6 加標(biāo)回收和樣品測定

量取2.3.2項(xiàng)下的樣品溶液4.00 mL分別于4支10 mL比色管中，然后標(biāo)號為1～4號，分別往2，3，4號中加入1.50，2.50，3.50 mL 2.3.1項(xiàng)下的樣品溶液，用流動相稀釋至10 mL刻度，在2.2項(xiàng)的色譜條件下測定。計算回收率，結(jié)果列于表1。

取2.3.2項(xiàng)下的樣品溶液，在2.2項(xiàng)的色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣3次，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，測得結(jié)果列于表2。

表1 吡拉西坦加標(biāo)回收率試驗(yàn)

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 結(jié)束語

高效液相色譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥與化工方面，它具有靈敏度高、選擇性好、分析時間短、重現(xiàn)性好、樣品用量少和易于實(shí)現(xiàn)自動化等優(yōu)點(diǎn)，適合于比拉西坦含量測定和質(zhì)量控制。

[1]陸潤基，郭平章.HPLC法測定健腦合劑中吡拉西坦的含量[J].廣東藥學(xué)，1999（03）：89-90.

[2]汝秋明，姜茁松，李春實(shí).高效液相色譜法測定吡拉西坦注射液的含量[J].中國藥師，2002（03）：58-59.

[3]于文潔，嚴(yán)云，莫宗琪.高效液相色譜法測定吡拉西坦氯化鈉注射液中的有關(guān)物質(zhì)[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2005（07）：115-116.

[4]溫堅，夏敬民.紫外分光光度法測定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦的含量[J].中成藥，2001（08）：39-40.

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[6]吳小韓，李崇英，何建明.氣相色譜法測定吡拉西坦注射液中吡拉西坦的含量[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜質(zhì)，1998（09）：10-12.

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[8]蔡鵬，季紅英.高效液相色譜法測定吡拉西坦片中吡拉西坦的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2006，21（01）：100.

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〔責(zé)任編輯 楊德兵〕

Determ ining the Content of Piracetam in Piracetam and Sodium Chloride Injection by HPLC

JIA Shu-mei，GUAN Cui-lin
（College of Chemistry and Chemical Engineering，ShanxiDatong Univercity，Datong Shanxi，037009）

A method for determining the content of piracetam in piracetam and sodium chloride injection by high performance liquid chromatography was setup.Kromasil C18 column was used.Themobile phase wasmethanol-water

（10：90），and its flow rate was 0.8m l／min.The detection wavelength was 210nm.The temperature of column was 40℃.To establish a HPLCmethod for the determination of piracetam in piracetam and sodium chloride injection.The results show that the linear range of piracetam is 25～250μg／mL，the linear regression equation is A=22386 c＋34907（r=0.99920）.The RSD is 1.04％（n=6）and the average recovery is 100.2％.Themethod was found to be simple，rapid，sensitive and reproducible and is suitable to test the assay of piracetam in piracetam and sodium chloride injection.

HPLC；piracetam；determination

R927.2

A

2012-10-20

山西大同大學(xué)科學(xué)研究基金項(xiàng)目[2008K6]

賈淑梅（1964-），女，山西應(yīng)縣人，高級實(shí)驗(yàn)師，研究方向：無機(jī)化學(xué)。

1674-0874（2013）01-0050-05