人體脂肪的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射分析

王 磊，史曉凡，許英健，張 芳

（1.南京市公安局 雨花臺(tái)公安分局，江蘇 南京 210041；2.中國刑事警察學(xué)院，遼寧 沈陽 110035）

微量油脂是各種刑事案件和交通事故案件現(xiàn)場中一種常見的微量物證，特別是在兇殺、焚尸、碎尸、分尸等惡性案件中，準(zhǔn)確地鑒定現(xiàn)場遺留的油脂殘?jiān)欠袷侨梭w油脂，對(duì)于案件性質(zhì)的確定、原始現(xiàn)場的判斷、作案工具的認(rèn)定至關(guān)重要。因此，建立一種科學(xué)、有效的人體油脂鑒定方法是十分必要的。

關(guān)于動(dòng)物油脂的分析方法，國內(nèi)外的食品科學(xué)、油脂學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生等領(lǐng)域的學(xué)者們進(jìn)行了很多相關(guān)性的研究，建立了一些分析方法，刑事科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域中也有一些文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)[1-2]。主要有氣相色譜法[3-5]，氣-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)[5-7]，紅外光譜法[8-9]等。

人體脂肪的主要組分是高級(jí)脂肪酸甘油酯，其分子結(jié)構(gòu)中只含有三個(gè)酯基，無其它發(fā)色團(tuán)或助色團(tuán)存在，缺乏適當(dāng)?shù)倪m用于紫外檢測器進(jìn)行檢測的發(fā)色團(tuán)和助色團(tuán)，難以采用高效液相色譜－紫外檢測法對(duì)其組成成分進(jìn)行分離分析。蒸發(fā)光散射檢測器是一種通用型的檢測器，它不同于紫外檢測器和熒光檢測器，其響應(yīng)不依賴于樣品化學(xué)性質(zhì)，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品在蒸發(fā)光散射檢測器上都可以產(chǎn)生響應(yīng)，不受其官能團(tuán)的影響。對(duì)于人體油脂中的各種高級(jí)脂肪酸甘油酯組分均有響應(yīng)。因此，本文采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD）對(duì)人體脂肪進(jìn)行種屬的分析研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品

人體油脂、豬脂、牛脂、羊脂、鴨脂樣品。

1.2 試劑與甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品

乙腈（色譜純）、丙酮、二氯甲烷、冰乙酸（均為分析純）、蒸餾水；1-棕櫚酸-2-油酸-3-硬件脂酸甘油酯（POSt）、1，2-肉豆寇酸-3-棕櫚酸甘油酯（MMP）、1，3-硬脂酸-2-棕櫚酸甘油酯（StPSt）、1，3-油酸-2-棕櫚酸甘油酯（OPO）（均為色譜純）。

1.3 儀器及條件

安捷倫1100液相色譜儀，蒸發(fā)光散射檢測器（SOFTA-300S）；

色譜柱：C18柱4μm（3.9mm×150 mm）；柱溫：35℃。

1.4 樣品制備

分別取約2mg上述人體脂肪及動(dòng)物油脂樣品，丙酮溶解，油脂溶液進(jìn)行HPLC-ELSD分析；將人體脂肪分別進(jìn)行日曬至腐敗、焚燒、水煮、烘烤等處理，處理后的人體脂肪樣品如上所述用丙酮溶解提取，進(jìn)行HPLC-ELSD分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 人體油脂HPLC-ELSD分析條件的選擇

以不同配比的二氯甲烷-乙腈、冰乙酸的濃度、漂移管溫度為三個(gè)實(shí)驗(yàn)因素，用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法進(jìn)行分析條件的選擇。每個(gè)因素取三個(gè)水平、三因素三水平，應(yīng)用正交設(shè)計(jì)表，組成9種HPLC-ELSD分析條件進(jìn)行正交試驗(yàn)（見表1）。

表1 三因素三水平實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表

正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，改變二氯甲烷與乙腈的配比，對(duì)油脂中各組分的分離度沒有太大的影響，也沒有分離出新的組分，只是隨著乙腈比例的增大，色譜峰的保留時(shí)間延長，峰形變寬；加入冰乙酸，抑制油脂中游離脂肪酸的解離，增強(qiáng)其在固定相上的保留；而漂移管溫度在60℃和70℃時(shí)，油脂的響應(yīng)值較高。因此確定人體脂肪HPLC-ELSD分析條件是，流動(dòng)相：二氯甲烷－乙腈－冰乙酸（30∶70∶0.2 v/v/v），漂移管溫度：70℃。

2.2 人體油脂種屬的HPLC-ELSD分析

在確定的HPLC-ELSD分析體系下，人體油脂和常見的動(dòng)物油脂均得到了有效的分離分析。并且人體油脂與其他常見動(dòng)物油脂的色譜特征顯著不同，在肉豆蔻酸-肉豆蔻酸-棕櫚酸甘油酯（MMP）前有二個(gè)相對(duì)保留值為0.77、0.83較強(qiáng)的特征色譜峰，動(dòng)物油脂此色譜峰較弱；人體油脂的棕櫚酸-油酸-硬脂酸甘油酯（POSt）色譜峰較弱，動(dòng)物油脂則較強(qiáng)；動(dòng)物油脂中均含有硬脂酸-棕櫚酸-硬脂酸甘油酯（StPSt）組分，而人體油脂中無此組分；人體油脂中MMP的相對(duì)含量較高，動(dòng)物油脂則較低（見圖1）。

圖1 人體油脂及四種動(dòng)物油脂的HPLC-EL

58個(gè)不同個(gè)體人體脂肪樣品HPLC-ELSD分析結(jié)果表明，不同個(gè)體人體脂肪的色譜特征相同，色譜圖中主要色譜峰的峰數(shù)相同，色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間相近，但色譜峰的相對(duì)峰面積比有所不同（見圖2）。

圖2 不同個(gè)體人體油脂HPLC-ELSD圖

2.3 不同條件處理后人體脂肪的HPLC-ELSD分析

研究中分別對(duì)腐敗、焚燒、烘烤、水煮處理后的人體油脂、豬脂進(jìn)行了HPLC-ELSD分析。結(jié)果表明，經(jīng)過各種人為處理和自然環(huán)境條件下保存至腐敗后，油脂會(huì)發(fā)生一些酸敗、分解等反應(yīng)，但其主要組分-高組脂肪酸甘油酯不會(huì)全部分解，仍會(huì)有脂肪酸甘油酯存在，所得液相色譜圖中仍可反映人體脂肪的色譜特征（見圖3）。

2.4 案例應(yīng)用

2011年4月5日，哈爾濱市某區(qū)王某（女）被殺害后，尸體被焚燒。提取焚尸現(xiàn)場的玉米稈兒，被害人焚燒后的衣服殘片。經(jīng)檢驗(yàn)，從玉米稈兒、焚燒后紡織品殘片上檢出人體油脂（見圖4）。

3 結(jié)論

在本論文所建立的動(dòng)物油脂高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測體系下，人體油脂中各種脂肪酸甘油組分得到了有效的分離分析，人體油脂與動(dòng)物油脂色譜特征差異顯著，根據(jù)所得色譜數(shù)據(jù)能夠準(zhǔn)確地對(duì)人體油脂的種屬進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定，且檢驗(yàn)結(jié)果不受檢材存在環(huán)境的干擾。

圖3 不同條件處理后人體油脂的HPLC-ELSD圖

圖4 麥桿提取物中人體油脂的HPLC-ELSD圖

[1]丁軍凱，范垂昌.瞬時(shí)裂解甲基化技術(shù)——一種快速鑒別人體脂肪及動(dòng)植物油脂的色譜分析方法[J].刑事技術(shù)，1996，（3）：5-9.

[2]張炳謙，王季中，孫桂進(jìn).人體脂肪及動(dòng)植物油脂的GCMS/MS法分析[J].中國人民公安大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，（4）：10-12.

[3]韓菊，董建芳，李芳.油脂中脂肪的分析測定[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，28（3）：209-211.

[4]Y.C.Mitei，J.C.Ngila，S.O.Yeboah，et al.NMR,GC–MS and ESI-FTICR-MS Profiling of Fatty Acids and Triacylglycerols in Some Botswana Seed Oils[J].JAm Oil Chem Soc 2008，（85）：1021-1032.

[5]Paul Angers，Joseph Arul.A Simple Method for Regiospeci?c Analysis of Triacylglycerols by Gas Chromatography[J].J8945 in JAOCS 76,1999，（4）：481-484.

[6]劉書成，章超樺，洪鵬志，等.超臨界流體色譜和質(zhì)譜聯(lián)用在油脂分析中的應(yīng)用[J].中國油脂，2006，31（9）：48-52.

[7]鄒建凱.奶油甘油三酯的毛細(xì)管氣相色譜－EI質(zhì)譜分析[J].分析測試學(xué)報(bào)，2002，21（5）：79-81.

[8]倪昕路，韓麗，王傳現(xiàn)，等.傅立葉變換紅外光譜法分析食品及油脂中反式脂肪酸[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18（2）：248-249.

[9]于修燭，杜雙奎，岳田利，等.衰減全反射傅里葉變換紅外光譜（ATR－FTIR）技術(shù)測定油脂中反式脂肪酸[J].中國糧油學(xué)報(bào)，2008，23（2）：189-193.