E2F-1及相關(guān)蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究*

周海霞 李燕輝 時(shí)志民* 王 蕾 司軍英 吳彩花 范 建

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，約占女性惡性腫瘤的7%，近年來(lái)在我國(guó)其發(fā)病率逐年上升，已占到女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素、多步驟和多基因參與的過(guò)程，在這一過(guò)程中凋亡抑制、細(xì)胞過(guò)度增殖、癌基因激活等起到了重要作用。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2009年1月至2012年3月在本院婦科行子宮內(nèi)膜癌切除術(shù)的子宮標(biāo)本60例，年齡35～68歲，平均年齡為52.22歲，所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前均未行放、化療及激素治療；取因子宮肌瘤或子宮脫垂而行子宮切除術(shù)的正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本32例，年齡在32～61歲，平均年齡為48.25歲。按照2000年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床病理分期和組織分級(jí)：Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1級(jí)36例，G2級(jí)13例，G3級(jí)11例。病灶局限于黏膜層及浸潤(rùn)≤1/2肌層44例，浸潤(rùn)＞1/2肌層16例。

1.2 試劑與方法

常規(guī)免疫組化試劑盒S-P、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及兔抗人E2F轉(zhuǎn)錄因子1(E2F-1)多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz生物技術(shù)有限；鼠抗人Ki-67單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化(streptavidin-peroxidase，SP)法操作，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，取已知切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

E2F-1和Ki-67陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，以各種抗體在細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)。參照Parenti等的標(biāo)準(zhǔn)，每張切片均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為(－)，5%～25%為(＋)，＞25%～50%為(＋＋)，＞50%為(＋＋＋)。以＋～＋＋＋均視為陽(yáng)性表達(dá)，－視為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。相互關(guān)系用等級(jí)相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E2F-1和Ki-67在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

在32例正常的子宮內(nèi)膜中E2F-1無(wú)表達(dá)，Ki-67有4例；60例子宮內(nèi)膜癌中E2F-1的表達(dá)31例，表達(dá)率為58.33%(35/60)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝27.71，P＜0.05)；60例子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)51例，表達(dá)率為85.00%(51/60)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝42.63，P＜0.05)(見(jiàn)表1)。

2.2 E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床病理分期以及淋巴道轉(zhuǎn)移有關(guān)(x2＝20.64，x2＝5.23，x2＝11.77，x2＝4.04，x2＝5.79，x2＝8.28；P＜0.05)；而與組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)(x2＝3.51，x2＝0.941；P＞0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 E2F-1和Ki-67在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.3 E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的相關(guān)性分析

E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(r＝0.166，P＞0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

細(xì)胞周期不同時(shí)相間存在關(guān)鍵的檢查點(diǎn)，人體細(xì)胞的正常生長(zhǎng)依賴(lài)于各種調(diào)節(jié)因子對(duì)其檢查點(diǎn)的平衡調(diào)控，任何一種紊亂的發(fā)生將導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，從而誘發(fā)腫瘤[1]。E2F-1蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，調(diào)控因子是E2F家族中第一個(gè)被克隆出來(lái)的蛋白，對(duì)細(xì)胞周期限制點(diǎn)起直接調(diào)控作用，是細(xì)胞周期中G1期向S期過(guò)渡的重要調(diào)控因子，調(diào)控作用機(jī)制可能是通過(guò)p16INK4a-cyclinD1/CDK-pRb通路[2]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，作為G1/S期檢查點(diǎn)的重要調(diào)控因子E2F-1在許多腫瘤中均有表達(dá)，且與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，在胃癌和涎腺腫瘤中均可見(jiàn)到E2F-1的過(guò)度表達(dá)[3]。在食管鱗狀細(xì)胞癌、乳房癌及表面移行細(xì)胞癌中E2F-1的表達(dá)與腫瘤進(jìn)展關(guān)系密切[4-6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E2F-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞核內(nèi)，在子宮內(nèi)膜癌組織中呈過(guò)度表達(dá)，在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝27.71，P＜0.05)，由此推斷在子宮內(nèi)膜癌中，E2F-1過(guò)表達(dá)起到了促進(jìn)作用；E2F-1與FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)深度有關(guān)，表明E2F-1的過(guò)表達(dá)在一定程度上可以反映子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)特性，其表達(dá)水平越高腫瘤的侵襲力越強(qiáng)，惡性度則越高。

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的大分子蛋白，屬于IgG家族，是目前臨床上廣泛應(yīng)用的檢測(cè)細(xì)胞增殖的標(biāo)志。Ki-67的檢測(cè)對(duì)于判斷腫瘤的惡性程度、進(jìn)展及其生物學(xué)行為具有重要的意義。Ki-67在除了G0期之外的所有細(xì)胞周期中都有表達(dá)，定位在細(xì)胞核，與細(xì)胞的合成代謝有關(guān)，其表達(dá)的高低反映了細(xì)胞增殖的程度。另外有報(bào)道，Ki-67的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)相關(guān)[6]，是目前研究細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)，已被應(yīng)用于許多腫瘤生物學(xué)行為的研究。Ki-67抗原表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)[7-8]。近年來(lái)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67的表達(dá)能較好地體現(xiàn)腫瘤細(xì)胞分化低、增殖快的特點(diǎn)，可作為腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期事件[9-10]。本研究結(jié)果表明，在子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈過(guò)度表達(dá)，而與正常組織中表達(dá)差異有顯著性(x2＝42.63，P＜0.05)；Ki-67與FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(x2＝4.04，x2＝5.23，x2＝8.28；P＜0.05)。因此，子宮內(nèi)膜癌中Ki-67的高表達(dá)可提示腫瘤細(xì)胞增殖活躍，侵襲性強(qiáng)，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。Ki-67能客觀反映子宮內(nèi)膜癌的增殖活性，可以成為評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的重要指標(biāo)。

本研究對(duì)E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中無(wú)相關(guān)性，但是兩者都定位在細(xì)胞核，在細(xì)胞周期中E2F-1起到了使細(xì)胞由GI期順利進(jìn)入S期，而Ki-67在S期后逐漸顯示作用，表明在子宮內(nèi)膜癌的早期E2F-1表達(dá)升高，促使GI期進(jìn)入S期，之后Ki-67可能發(fā)揮作用，促使細(xì)胞異常增殖。E2F-1與Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中可能存在某種聯(lián)系，有待于進(jìn)一步深入研究。通過(guò)對(duì)E2F-1和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌的研究證實(shí)，兩者均可促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和發(fā)展。

總之，子宮內(nèi)膜癌組織中E2F-1和Ki-67處于過(guò)表達(dá)狀態(tài)，均促使細(xì)胞異常增殖，在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到了一定作用，檢測(cè)兩者可以對(duì)臨床診斷和治療提供一定的幫助。

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