小白鼠死亡后腋靜脈采血方法的建立

蘆玲巧 曾翔俊 馬思明 豐 平 郝 剛*

動物實驗是醫(yī)學研究與實驗教學中的重要方法之一，小白鼠是實驗模型中的常規(guī)動物，經(jīng)常需要對其血液成分進行分析檢測，而合適的采血方法是實驗順利完成的保障[1]。目前小白鼠采血方法有尾尖采血、眼眶靜脈叢采血、摘眼球采血、腹主動脈采血、心臟采血和頸動以及靜脈采血等[2]。但上述方法均在小鼠存活狀態(tài)下實施采血，而如何在小白鼠死亡后采血尚無文獻報道[3-4]。

為了提高醫(yī)學基礎實驗教學中定量分析的科學性，須在實驗中采集足量的血液，滿足學生操作的需求，建立一種操作簡便、快捷，易學及實用的方法極其必要。本研究探索小白鼠死亡后通過腋靜脈采血的方法，使血液獲取簡便易學，同時也能滿足實驗對血液相關成分的分析。

1 設備與材料

1.1 常用儀器

小鼠密閉瓶、血氧分析儀(PHOX-COOX美國)、一氧化碳中毒裝置。

1.2 實驗動物

昆明小白鼠由首都醫(yī)科大學動物科學部提供(合格證號：11400700004206)。

2 方法

2.1 缺氧模型的復制

本實驗為教學實驗，缺氧與病因學觀察[5]。取小白鼠24只，隨機分為4組(每組6只)：分別為正常組、低張缺氧組、一氧化碳中毒組和亞硝酸鹽中毒組。

(1)正常組。將小白鼠稱重、標記后放入盛有鈉石灰的廣口瓶內(nèi)，敞開瓶塞，觀察小白鼠的活動狀態(tài)，30 min后，處死小鼠，采血測血紅蛋白指標。

(2)低張性缺氧。將小白鼠稱重、標記后放入盛有鈉石灰的廣口瓶內(nèi)，蓋緊橡皮塞，計時觀察并記錄存活時間。死亡后立即用測氧儀側得瓶內(nèi)的剩余氧濃度，取出小鼠采血測血紅蛋白指標[6]。

(3)血液性缺氧(一氧化碳中毒)。將小白鼠稱重，標記后放入一氧化碳中毒瓶，觀察小白鼠的活動狀態(tài)，記錄存活時間。小白鼠死亡后立即采血測血紅蛋白指標。

表1 不同模型血氧指標平均值

(4)血液性缺氧(亞硝酸鹽中毒)。將小白鼠稱重，標記后腹腔注入25%亞硝酸鈉0.3 ml/10 g放入500 ml的塑料燒餅內(nèi)觀察小鼠活動狀態(tài)。記錄存活時間。小白鼠死亡后，立即采血測血紅蛋白指標。

2.2 采血方法的建立

(1)儀器。血氧分析儀(PHOX-COOX美國)

(2)采血部位。小白鼠解剖顯示，其腋靜脈為鎖骨下靜脈向外的延續(xù)，在鎖骨內(nèi)側稱為鎖骨下靜脈，出鎖骨的稱為腋靜脈，腋靜脈全程均在鎖骨下方的胸廓外經(jīng)過，通常在大圓肌的下緣處，由肱靜脈內(nèi)側支延續(xù)而成經(jīng)腋腔至第一肋外側緣處移行于鎖骨下靜脈[7]。

2.3 操作方法

將上述復制的缺氧模型(已死亡)的小白鼠仰位固定于小鼠手術臺，剪開小白鼠左側靠近上肢的皮膚。根據(jù)腋靜脈的走行，在鎖骨下方的胸廓外，肱骨頭上方，看見腋靜脈后，剪斷腋靜脈，略擠壓，血液流出到胸廓與上肢形成的三角窩內(nèi)[8]。取1 ml注射器1支，加入裝有100 μ/ml肝素生理鹽水0.1 ml，抽取三角窩內(nèi)的血液后迅速封閉。用血紅蛋白儀測出血紅蛋白的部分指標。

3 結果與討論

檢驗結果見表1。在既往實驗中，由于小白鼠死亡后，無較好的采血方法。因此，在學生實驗中放棄了上述指標的測量，使實驗定量的科學性不足。通過小白鼠死亡后腋靜脈采血方法的建立,可有效彌補其不足。

(1)實驗中小白鼠的體重在19～21 g，每只死亡小白鼠能采到0.3～0.4 ml的血液，足夠用來測出血紅蛋白指標。從剪斷腋靜脈到采血的過程約為30 s即可完成，在死亡后到采集血液的整個過程需要1～2 min，此方法也可以對麻醉狀態(tài)的存活小白鼠采血。體重19～21 g的小白鼠最大采血量可達0.5～0.8 ml。

(2)小白鼠腋靜脈采血與頸靜脈采血相比，操作簡單、易學，學生能在課堂上迅速掌握。由于胸廓與上肢形成三角窩，采血時減少了周圍組織的吸附干擾，容易抽到血液，方便而實用。此種采血方法成功率高，有助于學生在實驗操作中采集到足量的血液，完成相應實驗指標的測定[9-10]。

4 結論

通過腋靜脈采血方法的建立，可有效彌補醫(yī)學基礎實驗教學中定量分析的科學性。與頸靜脈采血相比，操作簡單、易學，學生能在課堂上迅速掌握。此種采血方法成功率高，提高了實驗教學的水平，值得推廣應用。

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