子宮腺肌病患者CD147蛋白、MMP-9的表達(dá)

李靜瑜 (鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450002)

子宮腺肌病(AM)是一種良性病變，近年來發(fā)病率逐漸升高，并且其發(fā)病年齡越來越年輕化〔1〕。目前AM還沒有理想的治療方法，因為其發(fā)病機制還沒有完全闡明。近年來發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面黏附分子CD147蛋白是一個重要的MMPs誘導(dǎo)物，在惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中均具有非常重要的意義〔2〕。本文探討在AM患者中CD147蛋白及其MMP-9的表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年6月至2011年6月來我院進(jìn)行治療的AM患者51例，取其在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜，年齡37～55歲，平均(41.69±6.25)歲，其中35例為增生期的在位內(nèi)膜，16例屬于分泌期;選取30例同期來我院進(jìn)行治療的子宮肌瘤患者作為對照組 A，取其子宮內(nèi)膜，年齡 31～52歲，平均(42.06±7.13)歲，其中有16例為增生期的子宮內(nèi)膜，14例為分泌期;選取30例同期來我院進(jìn)行健康體檢的健康女性作為對照組B，年齡35～53歲，平均(43.97±7.50)歲。三組患者的一般資料差異不顯著(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集

1.2.1 組織標(biāo)本 全子宮切除術(shù)后無菌采集數(shù)塊在位、異位內(nèi)膜組織，采集均在術(shù)后5 min內(nèi)進(jìn)行，大小約為1.0×1.0×1.0 cm，鈣化區(qū)和出血點在采集時要盡量避開，采集后用生理鹽水進(jìn)行反復(fù)的漂洗，水分使用無菌紗布塊吸凈，組織使用多聚甲醛溶液固定，濃度4%，時間24 h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，染色方法使用HE染色，測定方法為免疫組織化學(xué)方法。

1.2.2 血清標(biāo)本 空腹抽取所有研究對象的靜脈血，約3 ml，抽取完后靜置0.5 h，3 000 r/min離心10 min，取上層血清，保存于－80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑 北京中杉金橋生物制品有限公司提供的CD147、MMP-9兔抗人多克隆抗體;北京博奧森公司提供的免疫組化試劑盒;武漢柏士德生物科技有限公司提供的DAB顯色試劑盒、CD147 ELISA試劑盒。

1.4 免疫組織化學(xué)染色及檢測方法 使用SP法對免疫組織進(jìn)行化學(xué)染色，檢測方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法，嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行處理，計量資料以±s表示，多組間計量資料行方差分析，兩組間計量資料行t檢驗，兩因素行Pearson直線相關(guān)t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 CD147蛋白的表達(dá)情況 與對照組A比較，CD147蛋白表達(dá)量在觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及間質(zhì)細(xì)胞中均有較高的表達(dá)(P＜0.05);與在位內(nèi)膜比較，異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中有明顯較高的表達(dá)(P＜0.05);異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的CD147蛋白表達(dá)差別較小(t=0.62，P＞0.05);與在位內(nèi)膜分泌期比較，增殖期具有較高的CD147蛋白表達(dá)量(t=3.58，P＜0.05);與對照組A的子宮內(nèi)膜分泌期比較，其增殖期的差異較小(t=0.75，P＞0.05)。見表1。

表1 CD147在觀察組與對照組A中的表達(dá)(±s)

表1 CD147在觀察組與對照組A中的表達(dá)(±s)

與對照組A比較:1)P＜0.05;與在位內(nèi)膜比較:2)P＜0.05;與間質(zhì)細(xì)胞比較:3)P＜0.05;與分泌期比較:4)P＜0.05;下表同

組別 n 腺上皮細(xì)胞 間質(zhì)細(xì)胞觀察組異位內(nèi)膜 51 0.206±0.0111)2)3) 0.106±0.0051)觀察組在位內(nèi)膜 51 0.172±0.0081)3) 0.103±0.0101)增殖期 35 0.180±0.0414) 0.106±0.007分泌期 16 0.153±0.039 0.092±0.013對照組A 30 0.092±0.005 0.048±0.014增殖期 16 0.093±0.004 0.049±0.012分泌期14 0.091±0.007 0.047±0.009

2.2 兩組MMP-9的表達(dá)情況 與對照組A比較，MMP-9在觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜的子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中有明顯較高的表達(dá)量(P＜0.05)，與在位內(nèi)膜比較，MMP-9在異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中具有明顯較高的表達(dá)(P＜0.05)。與觀察組在位內(nèi)膜的分泌期比較，MMP-9在增殖期的表達(dá)差別較小(t=1.14，P＞0.05);與對照組A的子宮內(nèi)膜分泌期比較，增殖期具有明顯較高的表達(dá)(t=3.25，P＜0.05)。見表2。

表2 MMP-9在觀察組與對照組A中的表達(dá)(±s)

表2 MMP-9在觀察組與對照組A中的表達(dá)(±s)

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2.3 相關(guān)性分析 CD147蛋白與MMP-9的表達(dá)在觀察組的異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、在位內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞中呈明顯正相關(guān)(r=0.895，0.817，P＜0.05);CD147蛋白在對照組A子宮內(nèi)膜中的表達(dá)與MMP-9無相關(guān)性(r=0.386，P＞0.05)。

2.4 血清sCD147水平 與對照組A比較，sCD147在觀察組中具有較高的水平，無顯著性差異(t=0.86，P＞0.05);與對照組B比較，sCD147在觀察組和對照組A中具有較高的表達(dá)水平(t=2.97，P ＜0.05)。

3 討論

CD147是一類單次跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，它在各種上皮細(xì)胞中均有正常的表達(dá)，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)多種惡性腫瘤中CD147均具有較高的表達(dá)，并且與腫瘤的類型有密切的關(guān)系，對疾病的預(yù)后有一定的影響〔3〕。MMP-9是一種蛋白水解酶，其在正常組織中和腫瘤細(xì)胞中有完全不同的表達(dá)情況，前者具有較少的表達(dá)，在后者中有相對較高的表達(dá)，Ⅳ型膠原與明膠是細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中的主要成分，MMP-9能夠?qū)σ陨系母鞣N成分起到降解的作用，在細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移中有非常重要的意義〔4〕。

研究結(jié)果與相關(guān)報道相一致，提示在AM患者的發(fā)病過程中CD147蛋白與MMP-9所發(fā)揮的作用非常重要;并且其子宮內(nèi)膜的蛋白表達(dá)或者是功能在在位內(nèi)膜發(fā)生異位前就已經(jīng)發(fā)生了變化，這也可能是AM發(fā)生的一個重要原因;結(jié)果提示與在位內(nèi)膜比較，異位內(nèi)膜的侵襲能力更強。研究結(jié)果提示MMP-9的合成和分泌可以由CD147蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生，其途徑可能為對子宮內(nèi)膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行刺激實現(xiàn)的，使子宮內(nèi)膜細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜發(fā)生降解，對子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)侵入子宮肌層起到促進(jìn)作用〔2～5〕;此外，還有報道表明 MMP-9還可以對毛細(xì)血管的增生等起到明顯的促進(jìn)作用，在AM的發(fā)生和發(fā)展過程中CD147蛋白和MMP-9均具有非常重要的作用。

試驗中對AM患者在位內(nèi)膜的不同時期進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與分泌期比較，增殖期具有較高的CD147蛋白表達(dá)量，而與分泌期比較，MMP-9在增殖期中的表達(dá)量相差較小，孕激素在月經(jīng)周期分泌期顯著地增高，在AM患者中能夠?qū)D147蛋白的表達(dá)和糖基化起到一定的抑制作用，而對MMP-9在子宮內(nèi)膜的表達(dá)沒有明顯的影響。研究結(jié)果提示，在對照組A患者的月經(jīng)周期中MMP-9的表達(dá)可能會受到分泌期增高的孕激素的抑制。另外AM發(fā)生和發(fā)展中sCD147發(fā)揮了重要的作用。有報道表明，sCD147對于MMPs的表達(dá)和分泌能夠起到促進(jìn)作用，主要由于膜型CD147位于腫瘤細(xì)胞膜表面，其結(jié)合sCD147將信號傳入細(xì)胞內(nèi)，從而實現(xiàn)以上的作用。另外，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，sCD147還可以對膜型CD147的表達(dá)起到正反饋調(diào)節(jié)作用，說明sCD147在腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中所起的作用非常的重要。可能是由于本次試驗所選取的樣本較小，也可能是因為sCD147在子宮肌瘤患者中的高表達(dá)較為輕微。

總之，CD147蛋白和MMP-9、血清sCD147蛋白在子宮腺肌病患者的異位與在位內(nèi)膜組織中具有較高的表達(dá)水平可能與子宮腺肌病有關(guān)，對MMP-9的合成與分泌起到促進(jìn)作用可能是CD147蛋白發(fā)揮作用的途徑。

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4 孫淑文，王玉亭，王道奎，等.MMP-2，MMP-9，TIMP-1和TIMP-2在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011;33(1):16-8.

5 宋 揚.子宮腺肌病98例臨床分析〔J〕，河北醫(yī)學(xué)，2012;18(2):209-11.