復(fù)方中藥組分抗糖尿病大鼠糖過(guò)氧化作用

劉文艷 劉曉舒 韓 健 曲志成 高 普 宋光熠

(遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所藥理研究室，遼寧 沈陽(yáng) 110101)

糖尿病是一組由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用障礙所致的以高血糖為特征的代謝性疾病。持續(xù)的高血糖和長(zhǎng)期代謝紊亂等可導(dǎo)致全身組織器官，主要是眼、腎、心血管及神經(jīng)系統(tǒng)的損害及其功能障礙和衰竭。嚴(yán)重者可出現(xiàn)水，電解質(zhì)紊亂和酸堿平衡失調(diào)等急性并發(fā)癥，如酮癥酸中毒和高滲昏迷等。本實(shí)驗(yàn)研究旨在證實(shí)復(fù)方中藥組分防治糖尿病的有效性以及探討抗過(guò)氧化作用的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 8周齡(190～210 g體重)SPF級(jí)SD種系大鼠、繁育鼠全價(jià)固體顆粒飼料，由遼寧省長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供〔實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證為遼寧省科學(xué)技術(shù)廳簽發(fā)，許可證號(hào):SCXK(遼)2009-0010〕。一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、考馬斯亮蘭蛋白等測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。三諾SXT-1快速血糖測(cè)試儀及快速血糖測(cè)試條由長(zhǎng)沙三諾生物傳感技術(shù)有限公司生產(chǎn);UV-1801紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)由北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))公司生產(chǎn)。三七總皂苷由北京同仁堂制藥有限公司提供;麥門(mén)冬多糖、黃連生物堿由北京阜康仁生物制藥科技有限公司提供;二甲雙胍為山東博山制藥有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法應(yīng)用0.01 mol/L檸檬酸緩沖液(pH5.0)配制濃度為12.2 mg/ml的鏈尿菌素，鏈脲菌素的注射量為0.055 mg/g體重。鏈尿菌素注射1 w后檢查其空腹血糖〔1〕，血糖水平超過(guò)8.1 mmol/L的大鼠被隨機(jī)分為3組，每組10只，雌雄各半，分別為:①?gòu)?fù)方中藥組分組;②二甲雙胍組;③糖尿病模型對(duì)照組。中藥組分組大鼠每天灌胃復(fù)方中藥組分0.45 g/kg體重;二甲雙胍組每天灌胃二甲雙胍0.05 mg/kg體重;糖尿病模型對(duì)照組大鼠每天同樣體積生理鹽水灌胃，灌胃體積各組均為10 ml/kg體重。另取10只大鼠、雌雄各半作為正常(空白)對(duì)照組，應(yīng)用與注射鏈尿菌素同樣體積的0.01 mol/L檸檬酸緩沖液(pH5.0)腹腔注射，并每天以同樣體積生理鹽水灌胃。各組連續(xù)給藥4 w后應(yīng)用斷頭法采血;取其胰腺、腎臟，10%組織勻漿后，3 000 r/min離心15 min取上清液。指標(biāo)檢測(cè)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組血糖比較 鏈脲菌素腹腔注射1 w后，大鼠的血糖水平均顯著高于空白對(duì)照組，血糖含量均超過(guò)8.1 mmol/L。連續(xù)給藥4 w后模型對(duì)照組血糖明顯高于空白對(duì)照組，復(fù)方中藥組分組和二甲雙胍組明顯低于糖尿病模型對(duì)照組。

2.2 各組血漿中MDA和NO含量、SOD、GSH-Px及NOS活性的測(cè)定 模型對(duì)照組大鼠血漿MDA含量、GSH-Px活性、NOS活性和NO含量顯著高于空白對(duì)照組，而SOD活性則顯著低于空白對(duì)照組。中藥組分組的血漿MDA含量、NO含量以及高劑量組的NOS活性顯著低于模型對(duì)照組;而其SOD活性顯著高于模型對(duì)照組。見(jiàn)表1。模型對(duì)照組胰腺和腎臟的MDA含量均顯著高于空白對(duì)照組，SOD和GSH-Px活性顯著低于空白對(duì)照組。中藥組分組胰腺和腎臟的MDA含量均顯著低于模型對(duì)照組，SOD和GSH-Px活性顯著高于模型對(duì)照組。見(jiàn)表2。

表1 各組血漿 MDA、SOD、GSH-Px、NO、NOS的影響(n=10±s)

表1 各組血漿 MDA、SOD、GSH-Px、NO、NOS的影響(n=10±s)

與模型對(duì)照組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05

組別 MDA(nmol/ml) SOD(U/ml) GSH-Px(μmol/L) NO(μmol/L) NOS(U/ml)模型對(duì)照組 12.39±3.18 165.7±26.7 302.9±47.6 8.45±2.2331.64±2.36空白對(duì)照組 6.02±1.382) 280.0±18.92) 192.6±29.22) 4.70±0.752) 27.75±1.942)中藥組分組 7.99±2.412) 205.0±19.42) 291.3±46.2 6.15±1.551) 27.59±1.662)二甲雙胍組 8.64±2.362) 245.6±18.92) 281.6±50.2 6.40±1.772) 28.28±2.272)

表2 各組胰腺、腎臟MDA、SOD、GSH-Px的影響(n=10±s)

表2 各組胰腺、腎臟MDA、SOD、GSH-Px的影響(n=10±s)

與模型對(duì)照組比較:1)P＜0.01

組別 MDA(nmol/ml)胰腺 腎臟SOD(U/ml)胰腺 腎臟GSH-Px(μmol/L)胰腺 腎臟模型對(duì)照組 1.61±0.21 1.89±0.24 9.5±0.7 11.9±1.7 17.5±1.3 26.6±4.9空白對(duì)照組 0.62±0.101) 1.25±0.151) 18.9±1.21) 22.4±2.31) 28.7±2.81) 42.8±3.71)中藥組分組 1.17±0.111) 1.44±0.181) 14.7±2.01) 17.6±1.81) 23.5±1.31) 33.6±2.41)二甲雙胍組 1.45±0.16 1.81±0.21 11.9±1.71) 15.4±1.31) 19.5±1.41)27.2±2.8

3 討論

引起機(jī)體自由基生成增多的原因與糖尿病的誘因存在著交叉性。當(dāng)自由基在體內(nèi)的產(chǎn)生增加時(shí)，由于其特殊的細(xì)胞毒性作用，可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一系列的損害作用，其中對(duì)胰島β細(xì)胞的損傷是引發(fā)糖尿病的一個(gè)重要因素〔2，3〕。糖尿病可誘導(dǎo)活性氧簇(ROS)蓄積并導(dǎo)致氧化應(yīng)激，ROS在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用?？寡趸委熆蓽p少ROS，故可能成為防治糖尿病并發(fā)癥的有效方法之一。Brownlee〔4，5〕提出糖尿病并發(fā)癥的共同病理生理學(xué)機(jī)制——高糖誘導(dǎo)線粒體ROS生成過(guò)多的理論，標(biāo)志著對(duì)糖尿病并發(fā)癥發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)有了突破性的進(jìn)展，并為防治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物研究指出了方向〔4，5〕。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)由三七總皂苷、麥門(mén)冬多糖、黃連生物堿組成的復(fù)方中藥組分可不同程度地提高糖尿病大鼠血漿SOD和胰腺、腎臟的SOD和GSH-Px的活性，抑制NOS活性，具有改善糖尿病大鼠的過(guò)氧化狀態(tài)，抑制其氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用。

1 劉文艷，劉曉舒，韓 健，等.復(fù)方中藥組分對(duì)糖尿病大鼠非酶糖基化的影響〔J〕.吉林醫(yī)學(xué)，2013;34(16):2082-3.

2 葉于薇，仲偉鑒，董妙珠，等.氧化應(yīng)激在糖代謝紊亂中的作用〔J〕.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2000;12(1):8-10.

3 黃 森.氧自由基與糖尿病發(fā)病機(jī)制〔J〕.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2006;7(4):146-7.

4 Brownlee M.Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications〔J〕.Nature，2001;414(6865):813.

5 Brownlee M.The pathobiology of diabetic complications:a unifying mechanism〔J〕.Diabetes，2005;54:1615-25.