204株淋球菌對5種抗生素敏感性的監(jiān)測

陳文鋒，謝文光 (廣東省陽江市婦幼保健院，廣東 陽江 529500)

了解陽江地區(qū)2012年度淋球菌對抗生素的敏感率情況，分析耐藥菌株的流行特征，為淋病的防治提供參考依據(jù)。筆者測定菌株對5種抗生素的最小抑菌濃度(MIC)，按世界衛(wèi)生組織(WHO)西太區(qū)淋球菌耐藥性監(jiān)測統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)判斷敏感性，現(xiàn)將具體情況報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株:204株淋球菌由門診患者的泌尿生殖道分泌物中分離得到，男性標(biāo)本自尿道內(nèi)用專用拭子于2 cm處轉(zhuǎn)動取分泌物，女性用無菌棉拭子插入宮頸口內(nèi)2 cm處轉(zhuǎn)動并停留約10 s取材，其中男性菌株68例，女性菌株136例。接種于選擇性培養(yǎng)基Thayer-Martin(TM)，所有菌株經(jīng)CO2培養(yǎng)、染色、鏡檢，實(shí)驗(yàn)室檢查過氧化氫酶、糖發(fā)酵、氧化酶等確證備用。

1.1.2 抗生素:5種抗生素分別是大觀霉素、青霉素、頭孢曲松、四環(huán)素和環(huán)丙沙星。

1.1.3 培養(yǎng)基:GC巧克力培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基Thayer-Martin(TM)。

1.1.4 標(biāo)準(zhǔn)菌株:6 株淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株A、B、C、D、E、J，其中E株為產(chǎn) β-內(nèi)酰胺酶(PPNG)陽性菌株，A、B、C、D、J株為產(chǎn) β-內(nèi)酰胺酶陰性菌株。

1.2 方法

1.2.1 菌株對抗生素敏感性測定:使用淋球菌耐藥監(jiān)測規(guī)劃協(xié)作組推薦的瓊脂稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC)，判斷藥物敏感性和耐藥性，統(tǒng)計MIC50和MIC90。先將各抗生素用適當(dāng)?shù)木彌_液溶解，配成溶液后倍比稀釋，各抗生素在培養(yǎng)基平皿上的最終濃度分別為:大觀霉素0.5～128 μg/ml，頭孢曲松0.001 ～1 μg/ml，青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星均為 0.03 ～32 μg/ml。試驗(yàn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)菌株先在GC培養(yǎng)基上傳代2次，用17～18 h的新鮮培養(yǎng)物調(diào)整為107～108 cfu/ml的菌懸液，接種器蘸取菌液接種于各抗生素瓊脂平皿，經(jīng)35.0℃培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。每批次試驗(yàn)均由標(biāo)準(zhǔn)菌株作質(zhì)控，以能抑制淋球菌生長的最小藥物濃度為該藥的最小抑菌濃度(MIC)并統(tǒng)計出 MIC50及MIC90。

1.2.2 產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶淋球菌(PPNG)測定:采用紙片酸度法。以標(biāo)準(zhǔn)菌株E株作為陽性對照，標(biāo)準(zhǔn)菌株B株為陰性對照。

1.2.3 質(zhì)粒介導(dǎo)的四環(huán)素高度耐藥淋球菌(TRNG)測定:用的瓊脂稀釋法，當(dāng)四環(huán)素MIC≥16 μg/ml，判為質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG株)。

2 結(jié)果

2.1 PPNG和TRNG測定結(jié)果:204株淋球菌共檢出64株產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶淋球菌PPNG(31.4%)，72株質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌TRNG(35.3%)。

2.2 MIC測定結(jié)果:青霉素耐藥株165株(80.9%)，中敏株39株(19.1%);四環(huán)素耐藥株 153株(75.0%)，中敏株51株(25.0%);環(huán)丙沙星耐藥株為183株(89.7%)，中敏株21株(10.3%);頭孢曲松敏感株 132 株(64.7%)，中敏株 72 株(35.3%);大觀霉素敏感株204株(100%).暫未發(fā)現(xiàn)對頭孢曲松、大觀霉素耐藥株。詳見表1。

表1 204株淋球菌對5種抗生素的敏感性、MIC50、MIC90和PPNG、TRNG菌株結(jié)果［株(%)］

3 討論

本組資料結(jié)果表明，5種抗菌藥物中，結(jié)果顯示淋球菌對環(huán)丙沙星、青霉素的耐藥率較高，其中環(huán)丙沙星耐藥率達(dá)到89.7%，與李燕娃等的報道96.9%相近［1］，顯示過去一年陽江地區(qū)淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥情況非常令人擔(dān)憂。環(huán)丙沙星是較新的喹諾酮類藥物，其問世時對淋球菌等感染有很好的治療效果，因其價格低廉且購買方便，相關(guān)部門對抗生素使用存在監(jiān)管缺失，甚至因?yàn)橛^念上的問題導(dǎo)致性病患者到私營診所醫(yī)治或私自購買藥品錯用和濫用，使性病患者得不到規(guī)范治療和早治療，特別是多次、反復(fù)小劑量等錯誤使用，更容易導(dǎo)致淋球菌對環(huán)丙沙星耐藥性增加。國內(nèi)各地淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率均在90%［2］。調(diào)查結(jié)果顯示，淋球菌對頭孢曲松和大觀霉素的敏感性分別為64.7%和100.0%，敏感性最高，沒有出現(xiàn)耐藥株，與連續(xù)監(jiān)測的結(jié)果類似，充分證明，頭孢曲松和大觀霉素這兩種藥物治療淋病能取得較為滿意的效果。但本次監(jiān)測中頭孢曲松中敏的有72株(35.7%)，治療時應(yīng)注意加大劑量和動態(tài)觀察療效，防止頭孢曲松耐藥菌株的發(fā)生。并囑患者與性伴侶到有資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)接受正規(guī)治療防止交叉感染發(fā)生。

數(shù)據(jù)表明陽江地區(qū)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶淋球菌(PPNG)流行率從2006年的15.8%增加到2010年的19.3%，到本次監(jiān)測的31.4%。與2010年的19.3%相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。但明顯低于柯丹等報道重慶地區(qū)的 56.99%［3］，與裴俊明等報道汕頭地區(qū)的33.7%和張麗君等報道深圳地區(qū)的35.7%接近［4-5］。研究表明本地區(qū)產(chǎn) β-內(nèi)酰胺酶淋球菌(PPNG)對青霉素的耐藥率升高是由染色體介導(dǎo)的耐藥流行株增多引起，2012年的監(jiān)測數(shù)據(jù)說明本地區(qū)近年進(jìn)入產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶淋球菌(PPNG)高流行區(qū)，而且是處在快速增長期，這點(diǎn)應(yīng)高度重視。質(zhì)粒介導(dǎo)的四環(huán)素高度耐藥株(TRNG)是美國在1985年首次鑒定的，耐藥原理是由25.2Md質(zhì)粒編碼，該質(zhì)?？赡苁?4.5Md結(jié)合質(zhì)粒與首先發(fā)現(xiàn)于鏈球菌的tetM決定因子重組而成，通過轉(zhuǎn)化或結(jié)合于敏感菌株，導(dǎo)致質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)的流行［1］。筆者的連續(xù)監(jiān)測資料顯示，本地區(qū)2009～2012年質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)的流行率從20.0%上升到35.3%，遠(yuǎn)低于李燕娃等報道佛山地區(qū)的63.4%［1］。有研究表明，淋球菌對四環(huán)素的耐藥增加主要由質(zhì)粒介導(dǎo)導(dǎo)致，本年度質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)檢出率為35.3%，提示本地區(qū)本年度質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)流行程度越來越嚴(yán)重，呈進(jìn)行性加劇，結(jié)合此地區(qū)具體的流行趨勢，采用四環(huán)素治療淋病有可能會造成質(zhì)粒介導(dǎo)高度耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)的流行。本次調(diào)查顯示，大觀霉素敏感率達(dá)100%，頭孢曲松敏感率64.7%，說明抗菌作用仍較強(qiáng)，作為陽江地區(qū)淋球菌治療的首選藥物為大觀霉素和頭孢曲松。

［1］李燕娃，潘洪亮，吳興中.佛山地區(qū)淋球菌流行株對抗生素敏感性測定［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2009，9(7):796.

［2］劉小鳳，伍昆山，吳光中，等.珠海地區(qū)淋球菌對抗生素的耐藥性分析［J］.皮膚性病診療學(xué)雜志，2011，18(3):163.

［3］柯 丹，慶 春，代祥良，等.淋球菌對抗菌藥物敏感性的監(jiān)測分析［J］.中國皮膚性病學(xué)雜志2008，22(9)，549.

［4］裴俊明，章淑燕，黃進(jìn)波，等.廣東省汕頭市92株淋球菌藥物敏感性檢測［J］.皮膚性病診療學(xué)雜志，2010，17(4):268.

［5］張麗君，何 亮，王 峰，等.深圳地區(qū)淋球菌株耐藥性流行趨勢［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2010，10(5):561.