血管內(nèi)皮生長因子受體3在慢性鼻－鼻竇炎病變組織中的表達及其意義

米淑娜

(天津市北辰醫(yī)院耳鼻喉科 天津 300400)

慢性鼻－鼻竇炎(chronic rhinosinusitis with and without nasal polyp，CRS or CRS/NP，以下簡稱CRS)是耳鼻咽喉科的常見病、多發(fā)病，常因疾病的遷延不愈、反復(fù)發(fā)作而影響患者的生活質(zhì)量。本文通過觀察血這內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR－3)在CRS及CRS/NP疾病中的表達強度和表達位置的差異，進一步探討該受體在疾病中對黏膜肥厚、血管和腺體增生、息肉形成過程的不同作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照慢性鼻竇炎診療評定標準(?？跇藴?[1]分為兩組，即觀察組和對照組。觀察組1型(單純性慢性鼻竇炎)為A組，即慢性鼻竇炎組，共15例;2型(慢性鼻竇炎伴鼻息肉)和3型(全組鼻竇炎伴多發(fā)性鼻息肉和/或篩竇骨質(zhì)增生)為B組，即鼻息肉組，共15例。選擇同期因鼻中隔偏曲住院患者作為C組，即對照組，經(jīng)鼻竇CT檢查除外其他疾病表現(xiàn)，共11例。經(jīng)方差分析和卡方檢驗，觀察組和對照組的年齡與性別的差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 研究方法 A組患者于鼻內(nèi)窺鏡下取竇口鼻道復(fù)合體處肥厚黏膜，取下組織立即以福爾馬林固定，石蠟包埋。鼻息肉組(B組)患者于鼻內(nèi)窺鏡下取竇口鼻道復(fù)合體來源的息肉組織，同法固定包埋。對照組(C組)患者在行鼻中隔矯正術(shù)過程中于鼻內(nèi)窺鏡下取下鼻甲黏膜，同法固定包埋。常規(guī)HE染色后，以SP法行免疫組化染色，兔抗人表皮生長因子受體(EGFR)多克隆抗體和兔抗人血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR－3)多克隆抗體為一抗，鼠抗兔IgG為二抗。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照。

1.3 試劑 兔抗人血管內(nèi)皮生長因子受體3(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 3)多克隆抗體工作液、鼠抗兔IgG二抗、DAB顯色劑等。

2 結(jié)果

雙盲法統(tǒng)計染色結(jié)果，根據(jù)細胞著色強度和著色細胞所占面積，兩者積分之和來判斷。著色強度定性積分為:不著色為0，輕度著色為1(淡黃色)，中度著色為2(黃色)，強著色為3(棕黃色)，著色面積定量積分:無著色0，小于25%為1，25% ～50%為2，大于50%為3。兩項積分相加即為該片子的得分，依照0為陰性(－)，1～2為(+)，3～4為()，5～6為()，進行半定量判斷[2，3]。

2.1 光鏡下組織特點及兩指標的表達位置

2.1.1 慢性鼻竇炎組。A組患者病變黏膜呈慢性炎癥表現(xiàn)，在光鏡下可見黏膜肥厚，杯狀細胞增多，黏膜下疏松結(jié)締組織增生，有炎癥細胞浸潤，以中性粒細胞和漿細胞為主VEGFR－3主要表達在腺管上皮細胞的胞核和胞質(zhì)，胞核強度重于胞質(zhì);上皮細胞胞核胞質(zhì)亦有輕度著色;在少數(shù)血管內(nèi)皮細胞的胞質(zhì)和胞核內(nèi)有輕微黃染(圖1、2)。

圖1 VEGFR－3在A組腺體的表達(×20)。腺體增生，且腺管細胞胞核著色深;胞漿亦有中度著色

圖2 VEGFR－3在A組上皮、血管的表達(×20)。假復(fù)層纖毛柱狀上皮，無明顯著色;上皮下有小血管，無明顯著色

圖3 VEGFR－3在B組血管的表達(×20)。血管內(nèi)皮有較強著色

圖4 VEGFR－3在B組腺體的表達(×10)。顯間質(zhì)水腫，腺管細胞著色不明

2.1.2 鼻息肉組。B組患者的病變組織中，可見局部上皮增生鱗化、間質(zhì)中重度水腫、同時伴有炎性細胞浸潤等特征，另見間質(zhì)微血管分布不均，多分布于黏膜下邊緣。VEGFR－3主要表達在上皮細胞，多數(shù)病例細胞核著色較細胞質(zhì)著色重;血管內(nèi)皮的細胞核和胞質(zhì)均有表達，多數(shù)病例著色均較重;腺管上皮細胞的胞核和胞質(zhì)亦有部分表達，但表達強度較弱(圖3～5)。

圖5 VEGFR－3在B組上皮的表達(×20)。上皮細胞增生、鱗化，且胞核著色深

2.1.3 對照組。C組標本中可見黏膜表皮為假復(fù)層纖毛柱狀上皮，杯狀細胞較多，間質(zhì)富含腺體及微血管，多均勻分布。VEGFR－3在個別病例中的上皮細胞中僅有小范圍輕度著色，絕大多數(shù)病例均為陰性;在部分腺管上皮細胞中VEGFR－3有一定程度的表達，但其程度較觀察組為輕(圖6、7)。

圖6 C組VEGFR－3染色(×20)

圖7 C組VEGFR－3染色(×20)

2.2 VEGFR－3在不同位置上的表達差異結(jié)果

2.2.1 上皮部位的表達。觀察組與對照組之間表達強度不同，其中鼻息肉組與對照組之間的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，統(tǒng)計結(jié)果見表 1。

表1 VEGFR－3在3組標本中上皮部位的表達

2.2.2 VEGFR－3在腺體部位的表達。觀察組與對照組之間表達強度不同，其中慢性鼻竇炎組與對照組之間的表達差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)，統(tǒng)計結(jié)果見表2。

表2 VEGFR－3在3組標本中腺體部位的表達

2.2.3 VEGFR－3在血管部位的表達。觀察組與對照組之間表達強度不同，其中鼻息肉組與對照組之間的表達差異有統(tǒng)計學意義，P ＜0.05，統(tǒng)計結(jié)果見表3。

表3 VEGFR－3在3組標本中血管部位的表達

3 討論

目前，人們經(jīng)過大量的研究，針對鼻息肉的形成過程和機制提出了一些假設(shè):Bernstein等[4]的研究提出鼻腔外側(cè)壁的空氣動力學變化，細菌、病毒以及變應(yīng)性疾病等多種因素均可作用于鼻腔外側(cè)壁黏膜，引起黏膜的急性炎癥反應(yīng)，開始上皮破裂、黏膜疝出、再上皮化、新腺體形成、鼻息肉形成。其中，血管性因素在息肉形成過程中的作用非常重要，Norlander等[5]在NP形成的動物模型中發(fā)現(xiàn)發(fā)育的NP有大量血管在基質(zhì)中存在;正常情況下，毛細血管和小靜脈的內(nèi)皮細胞是連續(xù)的，應(yīng)用VEGF后內(nèi)皮細胞間形成窗孔，導(dǎo)致血漿蛋白滲出[6]。在人體，VEGF以旁分泌的方式特異地作用于血管內(nèi)皮細胞，通過增加內(nèi)皮細胞內(nèi)囊泡器的功能發(fā)揮對毛細血管和小靜脈的特異性通透作用。這種作用極利于大分子物質(zhì)外滲，沉積在血管外基質(zhì)中，為血管形成過程中多種細胞遷移提供了一個纖維網(wǎng)絡(luò)[7]。大量的微血管極有利于大分子物質(zhì)如纖維蛋白原的通過，隨后發(fā)生的血漿外液增生，胞外基質(zhì)蓄積使得組織水腫。局部張力增加積壓上皮，局部缺氧更易使上皮破裂，逐漸形成息肉[8]。同時新生血管芽頂部的內(nèi)皮細胞亦可產(chǎn)生多種細胞因子并分泌膠原酶、尿激酶、血漿凝血酶原激活物等，通過蛋白酶降解作用，使其通透性進一步提高[9]。因此，密集的血管形成對鼻息肉的發(fā)展可能具有雙重意義，一是作為水腫間質(zhì)的水分來源，二是作為浸潤的炎性細胞的輸送通道。

本研究在慢性鼻竇炎病變黏膜及伴發(fā)息肉組織中檢測到了VEGFR－3的表達，其中在CRS/NP組標本中，增生鱗化的上皮細胞核和胞漿、間質(zhì)小血管內(nèi)皮胞核和胞質(zhì)中均存在中度到重度著色;在CRS組標本中，VEGFR－3也在腺管上皮的胞漿和胞核有較強表達。并且發(fā)現(xiàn)，與對照組相比有統(tǒng)計學意義的表達部位上，多數(shù)細胞的表達規(guī)律為胞核著色重于胞質(zhì)，因此推測VEGFR－3可能對細胞核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)具有更重要的作用。

根據(jù)本組檢測結(jié)果，可以提出一種新的假設(shè):在慢性鼻竇炎發(fā)展過程中，當局部黏膜上皮和血管內(nèi)皮內(nèi)的VEGFR－3表達程度升高時，可以增加與VEGF的結(jié)合率，產(chǎn)生一系列的受體磷酸化反應(yīng)，在炎癥黏膜上皮細胞和間質(zhì)血管內(nèi)皮細胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)生存信號，阻止細胞凋亡，并通過自分泌和(或)旁分泌機制影響自身細胞和鄰近細胞，導(dǎo)致粘膜上皮局部增生、間質(zhì)小血管增生的病理學改變，繼而形成息肉。

那么鼻息肉組織中是否能夠表達VEGF?針對這一問題已有學者進行了研究。Wittekindt等[10]發(fā)現(xiàn)VEGF在正常鼻甲黏膜中僅觀察到小血管內(nèi)皮和腺上皮細胞零星染色，而在NP組織，VEGF在血管內(nèi)皮和血管周圍浸潤的炎性細胞中表達很強;國內(nèi)學者肖伯奎等[11]在研究激素對鼻息肉組織腫瘤壞死因子α、血管內(nèi)皮生長因子表達的影響時觀察發(fā)現(xiàn)，VEGF在鼻息肉黏膜上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、腺上皮細胞、基質(zhì)及黏膜下浸潤炎性細胞有陽性表達，認為在黏膜上皮的表達陽性可能與黏膜受炎癥刺激使得上皮細胞能分泌合成VEGF。并且鼻息肉中細胞因子TGF－β1的高表達和中鼻道血流較少的微環(huán)境可能造成的缺氧都能上調(diào)這種分泌。由上述報道可見，鼻息肉組織中存在VEGF的高表達，并且對息肉的形成有著重要作用。雖然本課題中未將VEGFR－3的配體列入檢測范圍，但是結(jié)合上述研究可以推測:在鼻息肉形成過程中，VEGFR－3作為與VEGF結(jié)合的特異性受體存在其可能性;VEGFR－3對于CRS/NP的形成可能發(fā)揮增加血管通透性、促進新生血管形成、提供間質(zhì)物質(zhì)來源的重要作用。

此外，還有學者提出，VEGF對鼻息肉組織腺體細胞的增殖也有促進作用，并從多方面促進鼻息肉形成[12]。在本研究中，鼻息肉組標本腺體部位VEGFR－3雖有輕度著色，但與對照組相比并無統(tǒng)計學意義。故尚不能推測VEGFR－3對于鼻息肉形成過程中腺體的增殖是否存在影響。

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