氯磷酸二鈉緩釋微丸質(zhì)量考察及藥效動(dòng)力學(xué)研究

張?zhí)煊?朱艷麗,胡 洋,谷繼偉,李晶紅

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

我們采用擠出滾圓法制作氯磷酸二鈉緩釋微丸,其工藝為:高檔速度下滾制 6min,干燥溫度為60℃。微丸的最佳配方為:20mg氯膦酸二鈉,不加微晶纖維素,乙基纖維素和硬脂酸比例為1:2,24μL的10% Eudragit L30D-55。為了評(píng)價(jià)該工藝制備的微丸的質(zhì)量以及藥效動(dòng)力學(xué),本文分析了微丸工藝重現(xiàn)性和穩(wěn)定性,并用氯磷酸二鈉對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠肺泡巨噬細(xì)胞凋亡的影響模型評(píng)價(jià)藥效動(dòng)力學(xué),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 氯磷酸二鈉緩釋微丸制備

取適量的氯膦酸二鈉和輔料的混合物與黏合劑充分混合,然后用擠出機(jī)擠出直徑恒定的圓筒條,再切斷圓筒條成小段,并將小段高速滾制成圓球,繼續(xù)滾制使圓球滾成更勻稱的圓球。最后在干燥箱干燥制備好的圓球。其工藝為:高檔速度下滾制6min,干燥溫度為60℃。微丸的最佳配方為:20mg氯膦酸二鈉,不加微晶纖維素 ,乙基纖維素和硬脂酸比例為 1:2,24 μL的 10% Eudragit L30D-55。

1.2 微丸釋放量的檢測

[1]方法進(jìn)行檢測,用陰離子交換色譜柱 (IonPac AS11-HC);以45mmol/L氫氧化鉀溶液為流動(dòng)相,流速為每分鐘1.2mL;檢測器為電導(dǎo)檢測器,檢測方式為抑制電導(dǎo)檢測;柱溫30℃;理論板數(shù)按氯膦酸二鈉峰計(jì)算不低于2000。測定法 精密量取本品2mL,置100mL量瓶中 ,用水稀釋至刻度,搖勻,精密量取5mL,置 50mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻 ,精密量取 25 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。另取氯膦酸二鈉對(duì)照品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含無水氯膦酸二鈉 120 μg的溶液,同法測定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,即得。分別檢測微丸釋放量,并計(jì)算釋放比。

1.3 工藝重現(xiàn)性分析方法

隨機(jī)取四批制備的微丸,采用陰離子交換色譜檢測0～12h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)微丸釋放氯膦酸二鈉的總量,并按照釋放率=釋放量/總含量 計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的釋放率。繪制釋放率對(duì)時(shí)間的釋放曲線,并比較四批微丸的釋放曲線的差異。

1.4 加速試驗(yàn)穩(wěn)定性

隨機(jī)取四批制備的微丸,置于40℃,相對(duì)濕度 75%的密閉容器中,恒溫放置 3個(gè)月,分別于1、2、3個(gè)月取樣,觀察微丸外觀和測定藥物含量。

1.5 藥效動(dòng)力學(xué)分析

培養(yǎng)重癥急性胰腺炎大鼠肺泡巨噬細(xì)胞,分別加入生理鹽水或微丸。采用叮陡橙熒光染色檢測細(xì)胞凋亡,熒光顯微鏡下觀察結(jié)果并計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,并計(jì)算出肺巨噬細(xì)胞凋亡率?？梢姴煌募?xì)胞形態(tài):未凋亡細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。細(xì)胞凋亡率由以下公式計(jì)算:凋亡率=凋亡細(xì)胞 /總細(xì)胞數(shù)×100%。檢測48h內(nèi)細(xì)胞的凋亡率,并繪制凋亡率與時(shí)間的藥效動(dòng)力學(xué)曲線。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有計(jì)量資料均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差 (± s)。單因素組兩組之間的比較采用 t檢驗(yàn),多組之間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 工藝重現(xiàn)性分析結(jié)果

表 1(a和 b)結(jié)果表明,四批次的微丸在12h檢測期內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的釋放率之間無顯著差異 (P均＞ 0.05)。表2結(jié)果表明,經(jīng)加速試驗(yàn)處理后,四批次微丸的外觀均為乳白色且顯微黃,含量無顯著性差異 (P均 ＞ 0.05)。

表1 四批次微丸不同時(shí)間點(diǎn)釋放率比較結(jié)果 (±s)

表1 四批次微丸不同時(shí)間點(diǎn)釋放率比較結(jié)果 (±s)

0h 0.5h 1h 1.5h 2h 4h 6h 8h 10h 12h 1批 0 8.4± 0.9 23.7± 1.1 29.9± 0.8 46.3± 0.7 50.9± 1.5 69.9± 1.2 78.3± 1.9 88.9± 1.7 88.9± 2.5 2批 0 11.4± 1.1 21.7± 0.7 30.9± 1.1 45.3± 1.6 52.1± 1.8 68.9± 2.3 78.3± 2.4 86.9± 2.6 89.9± 2.4 3批 0 9.4± 0.3 25.7± 0.4 31.9± 0.9 43.3± 0.7 51.9± 1.3 67.9± 1.8 78.3± 1.7 84.9± 1.6 90.9± 1.9 4批 0 13.4± 1.2 19.7± 0.8 30.9± 0.7 47.3± 1.3 53.2± 1.5 66.9± 2.1 78.3± 2.4 86.9± 2.6 86.9± 2.7 P 0.135 0.214 0.172 0.365 0.338 0.177 0.179 0.203 0.215

表2 四批次微丸外觀和藥物含量比較 (±s)

表2 四批次微丸外觀和藥物含量比較 (±s)

外觀 含量(%)1批 乳白色 /微黃 98.25±0.78 2批 乳白色 /微黃 99.22±0.35 3批 乳白色 /微黃 98.71±0.26 4批 乳白色 /微黃 99.31±0.29 P 0.216

2.2 藥效動(dòng)力學(xué)分析結(jié)果

表3結(jié)果為四批次微丸對(duì)大鼠巨噬細(xì)胞凋亡的影響,在48h的作用時(shí)間內(nèi),與生理鹽水相比,微丸可顯著誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡 (P＜0.05),四批次微丸在不同時(shí)間的凋亡率無顯著差異 (P＞ 0.05)。

表3 四批次微丸對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞凋亡的影響 (±s)

表3 四批次微丸對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞凋亡的影響 (±s)

0h 1h 6h 12h 24h 48h生理鹽水 0 0.12± 0.04 0.41± 0.07 2.13± 0.17 2.57± 0.25 2.92± 0.37 1批 0 2.68± 0.67 35.67± 1.97 68.3± 3.12 74.3± 2.96 81.2± 4.11 2批 0 3.14± 0.82 38.19± 2.02 67.4± 3.45 75.3± 3.24 80.9± 4.18 3批 0 2.03± 0.72 37.12± 1.67 63.6± 4.02 74.9± 3.17 79.4± 4.92 4批 0 3.46± 0.76 36.9± 1.96 65.1± 3.92 73.7± 3.25 82.3± 3.93 P 0.115 0.107 0.314 0.549 0.273

3 討論

氯磷酸二鈉緩釋微丸的制備一直是我們研究的課題,氯膦酸二鈉一直以來是作為種骨代謝調(diào)節(jié)劑,常用于各種類型的骨質(zhì)疏松、腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的高鈣血癥、變形性骨炎等[2]。緩釋微丸可以有效提高藥物進(jìn)入人體后的半衰期,增加藥物的作用時(shí)間以提高藥效?？诜徔蒯尮腆w劑型的研究和實(shí)踐已有多年的歷史,是目前國內(nèi)外藥劑學(xué)發(fā)展的重要方向。緩控釋制劑的類型較多,包括:骨架型制劑、膜控型制劑、給藥樹脂、滲透泵等,其中骨架型制劑最為常見,在眾多類型的緩控釋制劑中,微丸制劑因其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)成為目前口服緩控釋制劑主要的發(fā)展方向[3]。由于其粒徑較小,表面積大,它具有生物利用度高,個(gè)體間差異小,釋藥規(guī)律的重現(xiàn)性和一致性較好,安全性高等顯著優(yōu)點(diǎn)[4]。因此氯磷酸二鈉緩釋微丸的應(yīng)用會(huì)增加氯磷酸二鈉在人體內(nèi)的作用效果。

但不是所有的藥物均可制備成緩釋微丸,研究表明微丸骨架型結(jié)構(gòu)會(huì)影響藥物自由移動(dòng),聚合物和藥物擴(kuò)散是影響藥物釋放率的限速步驟[5]。過高的釋放率起不到緩釋效果,過低的釋放率會(huì)影響藥物到達(dá)病灶位置的時(shí)間。因此,良好的緩釋微丸還需要評(píng)價(jià)制備的微丸的釋放率、制備工藝的穩(wěn)定性、制備的微丸的質(zhì)量以及微丸的藥效等[6]。

我們之前已經(jīng)建立了擠出圓滾法制備氯磷酸二鈉緩釋微丸,該工藝操作簡便且可成功制備出緩釋微丸,研究也表明制備的微丸在12h時(shí)還具有緩釋效果。為了評(píng)價(jià)工藝的重現(xiàn)性和制備微丸的藥效,本文從微丸釋放率、加速試驗(yàn)外觀和含量變化情況來評(píng)價(jià)經(jīng)擠出圓滾法制備的氯磷酸二鈉緩釋微丸質(zhì)量,結(jié)果得出:4批次制備的微丸在12h內(nèi)釋放率均無顯著差異 ,經(jīng)3個(gè)月內(nèi)的加速試驗(yàn)處理后,微丸的外觀和含量均無差異,說明通過我們確定的擠出圓滾法制備的微丸工藝重現(xiàn)性較好。另外,通過評(píng)價(jià)氯磷酸二鈉對(duì)大鼠巨噬細(xì)胞的凋亡的影響模型來評(píng)價(jià)微丸的藥效動(dòng)力學(xué),結(jié)果表明制備的微丸可顯著促進(jìn)細(xì)胞凋亡,而四批次的微丸的效果無顯著差異,因此說明制備的微丸藥效較好,且不同批次的微丸藥效也較穩(wěn)定。

參考文獻(xiàn):

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