方斑東風(fēng)螺飼料中鋅需要量的研究

楊原志 吳業(yè)陽(yáng) 董曉慧 譚北平 楊奇慧 遲淑艷 劉泓宇

（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524025）

東風(fēng)螺（Babylonia sp.）屬軟體動(dòng)物門（Mollosca），腹 足 綱 （Gast ropoda），前 鰓 亞 綱 （Prosobranchia），新 腹 足 目 （Neogast ropoda），娥 螺 科（Buccinidae），東風(fēng)螺屬（Babylonia），在廣東俗稱“花螺”、“海豬螺”和“南風(fēng)螺”。我國(guó)東風(fēng)螺的主要種類有方斑東風(fēng)螺（Babylonia areolata）、泥東風(fēng)螺（Babylonia lutosa）和波部臺(tái)灣東風(fēng)螺（Babylonia form osae habei），分布于我國(guó)福建、廣東、廣西、浙江和臺(tái)灣等?。ㄗ灾螀^(qū)）沿岸的淺海海域及東南亞和日本等地［1］。方斑東風(fēng)螺具有生長(zhǎng)速度快、抗病力強(qiáng)、產(chǎn)量高、肉質(zhì)鮮美、養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益高等優(yōu)點(diǎn)［2］，深受養(yǎng)殖戶和消費(fèi)者喜愛(ài)。近幾年，在中國(guó)的海南、廣東和福建等省養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大。人工配合飼料已在魚、蝦育苗和養(yǎng)成期廣泛應(yīng)用，推動(dòng)了魚、蝦養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。目前，東風(fēng)螺養(yǎng)殖業(yè)正朝著產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；较虬l(fā)展，因此也必須研制專用的配合飼料才能促進(jìn)行業(yè)的發(fā)展。然而，東風(fēng)螺營(yíng)養(yǎng)研究基礎(chǔ)薄弱，已成為限制東風(fēng)螺養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化的瓶頸。鋅是水產(chǎn)動(dòng)物必需的微量元素之一，主要生理功能包括：1）是多種酶的組成部分；2）維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)和功能；3）對(duì)膜受體的機(jī)能起保護(hù)作用［3］。飼料中缺鋅會(huì)抑制水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和繁殖，出現(xiàn)骨骼變形、生長(zhǎng)性能下降、性成熟期晚、免疫力低、白內(nèi)障、皮膚糜爛等現(xiàn)象［4］。由于水體中的鋅不能滿足水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)需要，因此，飼料被認(rèn)為是水產(chǎn)動(dòng)物鋅的主要來(lái)源。為使水產(chǎn)動(dòng)物獲得最佳生長(zhǎng)、免疫力和抗病力等，飼料中添加鋅是十分必要的。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼料中添加不同水平的鋅對(duì)方斑東風(fēng)螺生長(zhǎng)性能、體成分及酶活力的影響，以確定方斑東風(fēng)螺飼料鋅的適宜添加量，為東風(fēng)螺配合飼料的研制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

以酪蛋白和明膠（4∶1）為蛋白質(zhì)源，魚油和卵磷脂為脂肪源，玉米淀粉為糖源制成基礎(chǔ)飼料，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。以七水硫酸鋅為鋅源，在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、5、10、20、30、50mg/kg的鋅配制6種試驗(yàn)飼料，用IRIS IntrepidⅡ等離子體發(fā)射光譜儀（TE，美國(guó)）測(cè)得飼料中鋅含量分別為7.1、10.1、15.3、23.4、33.0、54.4mg/kg。飼料原料粉碎過(guò)100目篩，并按配方準(zhǔn)確稱取，采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合，第1次混合15min后，過(guò)80目篩，然后加魚油和卵磷脂，再一次混合15min后，過(guò)80目篩，加入蒸餾水（30%，體積質(zhì)量比），混合均勻，制成直徑為1.5mm的顆粒料，風(fēng)干后封口袋編號(hào)分裝，放入－20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東省湛江市東海島廣東海洋大學(xué)海洋生物研究基地室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行，方斑東風(fēng)螺苗購(gòu)自廣西海洋研究所。根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將方斑東風(fēng)螺隨機(jī)分為6個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于120L的白色塑料桶，桶內(nèi)鋪3～4cm已消毒的沙子及80L海水。試驗(yàn)開(kāi)始前，投喂基礎(chǔ)飼料2周，使方斑東風(fēng)螺適應(yīng)飼料和養(yǎng)殖環(huán)境。停喂24h后，挑選出大小均勻［初始重（106.25±0.00）mg，初 始 螺 長(zhǎng) （8.20±0.13）mm，初始螺寬（5.33±0.10）mm］、活力強(qiáng)、殼色亮麗的螺，每桶放養(yǎng)80只。每天17：00投喂1次，投喂量為螺重的3%，投喂2h后用虹吸法吸出殘餌，收集烘干，稱重保存。試驗(yàn)采用凈水養(yǎng)殖，所用海水為基地供水系統(tǒng)從海區(qū)中抽取并沙濾后的海水。每3d換水、洗桶、換沙1次，每2周稱1次螺重，及時(shí)調(diào)整投喂量，養(yǎng)殖期內(nèi)不間斷充氧并遮陽(yáng)避光。每天10：00和16：00檢測(cè)水溫、溶氧、鹽度等，并檢查螺的死亡情況，死螺及時(shí)撈出，稱重、計(jì)數(shù)。試驗(yàn)期間水溫為25～31℃，鹽度為26～28，pH為7.5～8.3，溶氧大于5mg/L，氨氮小于0.03mg/L，養(yǎng)殖海水中鋅含量為5.74μg/L。試驗(yàn)期56d。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet（air－dry basis） %

1.3 樣品采集及測(cè)定方法

試驗(yàn)結(jié)束后，停喂24h后用干毛巾拭干螺殼表面水分后稱重、計(jì)數(shù)，裝入封口袋，放入－80℃冰箱冷凍2h后，從封口袋里隨機(jī)取5只螺，放在冰盤上剖取內(nèi)臟團(tuán)，稱重，按照1∶9（質(zhì)量體積比）加入預(yù)冷的生理鹽水，12 000r/min勻漿30s（T25 Digital ULTRA－TURRAX分散 機(jī)，德國(guó)），4 ℃ 離心20min（10 000×g），吸取上清液，再按照1∶9加入預(yù)冷的生理鹽水稀釋，即共稀釋100倍，此為待測(cè)酶液，將待測(cè)酶液分裝成5份，置于－80℃冰箱中，備測(cè)總蛋白質(zhì)含量以及堿性磷酸酶（AKP）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、總超氧化物歧化酶（T－SOD）和銅鋅超氧化物歧化酶（CuZn－SOD）活力。上述指標(biāo)均按照南京建成生物工程研究所試劑盒所附方法測(cè)定。取70～75只螺，將軟體部與螺殼分離，用濾紙拭干，分別稱重，計(jì)算肉殼比；將軟體部105℃烘干，稱重、粉碎后裝入封口袋，備測(cè)軟體部常規(guī)成分及鋅含量。飼料和軟體部粗蛋白質(zhì)含量用凱氏定氮法（Kjeltec－8400自動(dòng)凱氏定氮儀，瑞典）測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏提取法（乙醚為抽提液）測(cè)定，灰分含量采用灼燒法（550℃）測(cè)定，將所得到的灰分溶解在硝酸和高氯酸的混合酸（4∶1，體積比）中，過(guò)濾、定容后IRIS IntrepidⅡ等離子體發(fā)射光譜儀測(cè)定鋅含量。螺殼在馬弗爐中灰化12h（550℃）后，按軟體部灰分測(cè)定方法操作，測(cè)定鋅含量。

1.4 計(jì)算公式

增重率（weigh gain rate，WGR，%）＝100×（終末體重－初始體重＋死亡個(gè)體體重）/初始體重；

飼料系數(shù)（feed conservation rate，F(xiàn)CR）＝攝食量/（終末體重＋死亡個(gè)體體重－初始體重）；

蛋白質(zhì)效率（protein efficiency rate，PER，%）＝100×（終末體重－初始體重）/（攝食量×飼料蛋白質(zhì)含量）；

成活率（survival rate，SR，%）＝100×試驗(yàn)結(jié)束時(shí)螺個(gè)數(shù)/試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)螺個(gè)數(shù)；

肉殼比（soft body to shell ratio，SB/SR）＝軟體部重/殼重［5］。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 16.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，先對(duì)數(shù)據(jù)做單因素方差分析（one－way ANOVA），如有顯著差異（P＜0.05），再采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié) 果

2.1 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺FCR、PER、SR和SB/SR均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。方斑東風(fēng)螺WRG為先隨飼料鋅含量的升高而顯著增加（P＜0.05），當(dāng)飼料鋅含量達(dá)到15.3mg/kg及以上時(shí)，各組 WGR無(wú)顯著差異（P＞0.05）。以WGR為衡量指標(biāo)，通過(guò)折線模型分析得出方斑東風(fēng)螺對(duì)飼料鋅的最適需要量為15.3mg/kg（圖1）。

表2 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary Zn content on growth performance of spotted babylon

圖1 飼料鋅含量與方斑東風(fēng)螺增重率關(guān)系的折線模型分析Fig.1 Broken－line model analysis of relationship between dietary Zn content and WGR of spotted babylon

2.2 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺軟體部常規(guī)成分的影響

由表3可知，飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺軟體部水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分含量均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

2.3 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺軟體部和殼中鋅含量的影響

由表4可知，方斑東風(fēng)螺軟體部鋅含量隨飼料鋅含量的升高而顯著增加（P＜0.05），二者呈正相關(guān)關(guān)系（Y＝1.251 5 X＋49.074，R2＝0.975 0）。飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺殼中鋅含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表3 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺軟體部常規(guī)成分的影響Table 3 Effects of dietary Zn content on soft body composition of spotted babylon %

表4 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺軟體部和殼中鋅含量的影響Table 4 Effects of dietary Zn content on zinc content in soft body and shell of spotted babylon mg/kg

2.4 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中酶活力的影響

由表5可知，方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中AKP、T－SOD、CuZn－SOD和 CAT活力表現(xiàn)為相同的趨勢(shì)，即隨飼料鋅含量的升高先顯著升高（P＜0.05），當(dāng)飼料鋅含量在23.4～54.4mg/kg時(shí)，上述酶活力保持穩(wěn)定。以 AKP、T－SOD、CuZn－SOD和CAT活力為判據(jù)，通過(guò)折線模型分析得出方斑東風(fēng)螺對(duì)飼料鋅的最適需要量分別為24.3、24.1、22.9和24.3mg/kg（表6）。

3 討 論

3.1 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，不添加鋅的對(duì)照組方斑東風(fēng)螺生長(zhǎng)緩慢，隨飼料鋅含量的升高方斑東風(fēng)螺的生長(zhǎng)速度顯著加快，當(dāng)飼料鋅含量達(dá)到15.3mg/kg及以上時(shí)，生長(zhǎng)速度保持穩(wěn)定。通過(guò)WGR與飼料鋅含量的折線模型分析得出方斑東風(fēng)螺保持最大生長(zhǎng)速度時(shí)的飼料鋅需要量為15.3mg/kg。在虹鱒［6］、尼羅羅非魚［7］、斑點(diǎn)叉尾［8］、鮑魚［9］、斑節(jié)對(duì)蝦［10］的研究中也得到了相近的試驗(yàn)結(jié)果。動(dòng)物對(duì)飼料鋅的最適需要量受飼料原料的影響很大，植物蛋白質(zhì)飼料中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，如植酸、甾醇等，這些物質(zhì)能夠結(jié)合飼料中的鋅，使動(dòng)物鋅吸收量降低，所以以植物蛋白質(zhì)為飼料蛋白質(zhì)源時(shí)，需要添加更多的鋅才能滿足動(dòng)物的正常生長(zhǎng)和繁殖發(fā)育。Marcelo等［11］用硫酸鋅為鋅源，以植物蛋白質(zhì)為蛋白質(zhì)源配制飼料投喂尼羅羅非魚，以WGR和骨鋅含量為判據(jù)，結(jié)果表明尼羅羅非魚對(duì)飼料鋅的最適需要量分別為44.05和79.51mg/kg；而 Elhamind等［7］用精制飼料投喂尼羅羅非魚，其對(duì)飼料鋅的最適需要量為30mg/kg。本試驗(yàn)也采用精制飼料，抗?fàn)I養(yǎng)因子含量低，以 WGR為指標(biāo)，方斑東風(fēng)螺對(duì)飼料鋅的最適需要量為15.3mg/kg，與其他養(yǎng)殖動(dòng)物對(duì)飼料鋅的需要量相比，低于大黃魚（59.6mg/kg）［12］、奧尼羅非魚（20mg/kg）［13］、軍曹魚（42.86mg/kg）［14］、斑節(jié)對(duì)蝦（32 ～34mg/kg）［10］、鮑魚（32～35mg/kg）［9］和真鯛（20～25mg/kg）［15］，高于斑點(diǎn)叉尾（5～10mg/kg）［8］。這可能與養(yǎng)殖動(dòng)物種類、大小、養(yǎng)殖環(huán)境、飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成、飼料適口性、投喂次數(shù)和投喂量等試驗(yàn)因素有關(guān)。

表5 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)AKP、T－SOD、CuZn－SOD和CAT活力的影響Table 5 Effects of dietary Zn content on AKP，T－SOD，CuZn－SOD and CAT activities in visceral mass of spotted babylon

表6 飼料鋅含量與方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中AKP、T－SOD、CuZn－SOD、CAT活力關(guān)系的折線模型Table 6 Broken－line model of relationships between dietary Zn content and AKP，T－SOD，Cu－ZnSOD and CAT activities in visceral mass of spotted babylon

3.2 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺軟體部和殼中鋅含量的影響

飼料中鋅含量對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物體鋅含量有顯著的影響，養(yǎng)殖動(dòng)物可以消化吸收飼料中的部分鋅，貯藏在體內(nèi)。當(dāng)動(dòng)物攝食低鋅飼料時(shí)，機(jī)體鋅含量低，反之則高。Ogino等［16］對(duì)鯉魚的研究表明，當(dāng)飼料中鋅缺乏時(shí)，鯉魚骨骼鋅和血清鋅含量降低。Elhamind等［7］用缺鋅的精制飼料投喂尼羅羅非魚時(shí)也出現(xiàn)相同的現(xiàn)象。張佳明等［12］以骨鋅含量為指標(biāo)，采用折線模型分析得出大黃魚對(duì)飼料鋅的最適需要量為84.6mg/kg。軍曹魚（42.86mg/kg）［14］、尼羅羅非魚（79.1mg/kg）［11］飼料鋅的需要量同樣也是以骨鋅含量為判據(jù)。本試驗(yàn)中軟體部鋅含量隨著飼料鋅含量的增加而線性增加。這可能與方斑東風(fēng)螺的攝食方式有關(guān)，方斑東風(fēng)螺消化道結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，靠吸管分泌消化酶對(duì)飼料進(jìn)行分解吸食，所以對(duì)飼料中鋅的吸收、沉積效果好，導(dǎo)致軟體部鋅含量持續(xù)性增加。Tan等［9］對(duì)鮑魚的研究表明，飼料鋅含量對(duì)鮑魚殼中鋅含量無(wú)顯著影響，與本試驗(yàn)也得出相同的結(jié)論，即飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺殼中鋅含量無(wú)顯著影響。

3.3 飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中酶活力的影響

AKP是一種含鋅的對(duì)底物專一性較低的磷酸單脂水解酶，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，在水生動(dòng)物的骨骼礦化過(guò)程中也起著重要作用，能夠較真實(shí)地反映養(yǎng)殖動(dòng)物鋅的營(yíng)養(yǎng)狀況［14］。飼喂添加5.6～84.6mg/kg鋅的飼料后，鮑魚軟體部AKP活力隨著飼料鋅含量的升高而升高，通過(guò)折線模型分析得出其對(duì)飼料鋅的最適需要量為31.91mg/kg［9］；軍曹魚幼魚血清 AKP活力隨著飼料鋅含量的升高而升高，飼料中添加40～50mg/kg 鋅 時(shí) AKP 活 力 較 強(qiáng)［14］。Ogino等［16］對(duì)鯉的研究也證實(shí)血清AKP活力在不同的飼料組之間表現(xiàn)出很大差異，飼料鋅含量高，魚體血清AKP活力就高。本試驗(yàn)中，方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中AKP活力的變化趨勢(shì)與Tan等［9］、徐志雄等［14］報(bào)道一致，通過(guò)折線模型分析得出其對(duì)飼料鋅的最適需要量為24.3mg/kg。

超氧化物歧化酶（SOD）是一種金屬酶，鋅是其重要組成部分，該酶主要有2種形式：CuZn－SOD和錳超氧化物歧化酶（Mn－SOD）。SOD具有抗氧化功能，是機(jī)體天然存在的超氧自由基清除因子，它通過(guò)反應(yīng)可以把有害的超氧自由基轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫，降低氧自由基對(duì)細(xì)胞的損害，并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞；產(chǎn)生的過(guò)氧化氫可以由體內(nèi)的CAT和過(guò)氧化物酶（POD）清除，這3種酶組成一個(gè)完整的抗氧化鏈條。本試驗(yàn)結(jié)果表明，方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中 T－SOD、CuZn－SOD和 CAT活力隨著飼料鋅含量的升高表現(xiàn)為先顯著升高，后趨于穩(wěn)定，通過(guò)折線模型分析得出其對(duì)飼料鋅的最適需要量為22.9～24.3mg/kg。Hidalgo等［17］研究表明，當(dāng)飼料中鋅不足時(shí)，虹鱒氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，添加鋅組CAT活力增強(qiáng)，鋅不足組CAT活力較低，與本試驗(yàn)結(jié)果類似。

3.4 飼料鋅需要量評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇

在養(yǎng)殖動(dòng)物對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)素需要量的研究中，常因選取的評(píng)價(jià)指標(biāo)不同而出現(xiàn)需要量的差異。Lin等［18］報(bào)道，滿足點(diǎn)帶石斑魚最佳生長(zhǎng)的飼料維生素C添加水平為45mg/kg，而如果想獲得最佳免疫力和抗病力，則飼料中維生素C的添加水平是288mg/kg，為最佳生長(zhǎng)所需的6倍左右；Ai等［19］、周 立 斌 等［20］、宋 學(xué) 宏 等［21］的 試 驗(yàn) 均 表明，保持最佳免疫力比維持最大生長(zhǎng)需要更多的營(yíng)養(yǎng)素。使魚類獲得最大生長(zhǎng)的飼料未必能使魚類獲得最佳抗病力［22］，且生長(zhǎng)是營(yíng)養(yǎng)素生理作用的綜合結(jié)果，而免疫相關(guān)酶活力、免疫因子的生成或免疫過(guò)程卻和某些營(yíng)養(yǎng)素有著非常密切的關(guān)系，營(yíng)養(yǎng)素的變化可能對(duì)生長(zhǎng)沒(méi)有影響，但卻顯著地影響了養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫指標(biāo)［23］。為滿足團(tuán)頭魴的生長(zhǎng)，商品飼料中堿式氯化銅的添加量為3～6mg/kg，但如果要提高團(tuán)頭魴血漿AKP、酸性磷酸酶活力和改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，則堿式氯化銅的添加量要達(dá)到100mg/kg［24］。在本試驗(yàn)中，滿足方斑東風(fēng)螺最佳生長(zhǎng)時(shí)的飼料鋅含量為15.3mg/kg，而獲得最佳免疫力時(shí)的飼料鋅含量為22.9～24.3mg/kg。因此，在生產(chǎn)中應(yīng)綜合考慮最大生長(zhǎng)和最佳免疫力，在疾病多發(fā)季節(jié)應(yīng)適當(dāng)提高飼料中營(yíng)養(yǎng)素的添加量，以減少病害損失，獲得最大的經(jīng)濟(jì)效益。

4 結(jié) 論

①飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺生長(zhǎng)有顯著影響，以WGR為指標(biāo)，方斑東風(fēng)螺對(duì)飼料鋅的最適需要量為15.3mg/kg。

② 方斑東風(fēng)螺軟體部鋅含量隨飼料鋅含量的增加而顯著增加，而殼中鋅含量無(wú)顯著差異。

③飼料鋅含量對(duì)方斑東風(fēng)螺內(nèi)臟團(tuán)中AKP、T－SOD、CuZn－SOD、CAT活力有顯著影響，通過(guò)對(duì)上述酶活力進(jìn)行折線模型分析得出方斑東風(fēng)螺對(duì)飼料鋅的最適需要量為22.9～24.3mg/kg。

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