高滲鹽水對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制

趙 晶 畢旭東 穆長(zhǎng)征 王曉梅

(遼寧醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室，遼寧 錦州 121001)

肝臟缺血再灌注損傷(HIRI)是臨床肝臟外科常見(jiàn)的病理過(guò)程，它可使肝代謝解毒能力降低、微循環(huán)阻力升高，嚴(yán)重者可導(dǎo)致肝功能衰竭，直接影響到疾病的預(yù)后、手術(shù)成功率和病人存活率。因此，采取適宜的干預(yù)措施從而減少HIRI是肝臟手術(shù)成功的關(guān)鍵所在。導(dǎo)致HIRI的原因很多，確切的發(fā)生機(jī)制至今仍不十分清楚。為了減輕HIRI，國(guó)內(nèi)外學(xué)者做了大量的研究，目前預(yù)防HIRI的措施有藥物預(yù)處理、缺血預(yù)處理、局部熱應(yīng)激預(yù)處理、熱休克預(yù)處理、亞低溫預(yù)處理、臭氧氧化預(yù)處理、缺氧預(yù)處理、缺血后處理等，在眾多處理措施中又以藥物預(yù)處理的應(yīng)用前景最為廣闊。近年來(lái)，高滲鹽水的臨床作用也受到人們的關(guān)注。但是高滲鹽水用于治療HIRI的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道不是很多?？聭c宏等〔1〕研究發(fā)現(xiàn)，高滲鹽水預(yù)處理明顯增強(qiáng)缺血/再灌注后肝臟血紅素加氧酶-1(HO-1)mRNA及蛋白表達(dá)，明顯改善肝臟微循環(huán)，對(duì)HIRI具有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠HIRI模型，應(yīng)用高滲鹽水來(lái)保護(hù)大鼠HIRI，并探討其可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔健康雄性SD大鼠60只，清潔級(jí)，體重220～260 g，由遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試劑 一氧化氮(NO)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所，內(nèi)皮素-1(ET-1)、白介素-10(IL-10)、血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所。Bax/Bcl-2購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。細(xì)胞凋亡試劑盒(POD)購(gòu)于羅氏公司。

1.3 動(dòng)物分組及方法 健康SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組15只大鼠，術(shù)前禁食12 h，自由飲水。Ⅰ組:假手術(shù)組(Sham組)，單純麻醉(10%水合氯醛腹腔注射麻醉，300 mg/kg)和開(kāi)腹，分離出肝十二指腸韌帶，不阻斷肝門(mén)。Ⅱ組:缺血再灌注組(IR組)，麻醉后用無(wú)損傷動(dòng)脈夾夾閉左肝葉、中肝葉肝蒂，40 min后移走動(dòng)脈夾恢復(fù)灌流。開(kāi)腹前10 min至陰莖背靜脈緩慢注射生理鹽水(10 ml/kg體重)。Ⅲ組:缺血預(yù)處理組(Ⅲ組，IP組)，缺血5 min，再灌注 5 min，重復(fù)2次后，缺血40 min。Ⅳ組:高滲鹽水預(yù)處理組(HTS組)，開(kāi)腹前10 min至陰莖背靜脈緩慢注射7.5%氯化鈉注射液(10 ml/kg體重)。

1.4 取材 各組分別于再灌注1、6、24 h后至腹主動(dòng)脈取血4 ml室溫靜置30 min，3 000 r/min離心30 min，提取血清標(biāo)本－20℃保存待測(cè) NO、ET-1、TNF-α 和 IL-10。取 1.0×1.0×0.5 cm3大小左肝固定部位的組織，置于10%中性甲醛溶液中固定，待做光鏡并觀察肝組織病理學(xué)改變。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 血清ALT、AST的測(cè)定 采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。

1.5.2 NO和ET-1的測(cè)定 分別采用硝酸還原酶法和放射免疫法測(cè)定，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.3 TNF-α和IL-10的測(cè)定 放免法測(cè)定，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.4 肝臟組織病理學(xué)觀察 肝組織置于10%中性甲醛溶液中固定，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察組織學(xué)變化。

1.5.5 免疫組化Bax/Bcl-2蛋白含量測(cè)定 采用免疫組化SP法檢測(cè)Bax及Bcl-2蛋白的表達(dá)。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為Bax、Bcl-2細(xì)胞質(zhì)染色均呈棕黃色。顯微鏡下觀察，每張片子隨機(jī)選取5個(gè)視野，利用MIAS-2000圖像分析陽(yáng)性區(qū)域平均吸光度值(A)，以A值的大小表示陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)的多少。

1.5.6 凋亡指數(shù)(AI)檢測(cè) 采用TUNEL法檢測(cè)AI。鏡下觀察凋亡細(xì)胞，細(xì)胞核中有紫黑色為陽(yáng)性細(xì)胞。每張片子在200倍高倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算出平均每100個(gè)細(xì)胞中的凋亡細(xì)胞數(shù)，并以百分?jǐn)?shù)表示作為AI。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用方差分析和q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血清生化酶學(xué)的改變 見(jiàn)表1，表2。肝臟缺血40 min再灌注1、6、24 h后Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組血清ALT、AST水平明顯高于Ⅰ組(P＜0.01);Ⅲ、Ⅳ組明顯低于Ⅱ組(P＜0.01);Ⅲ和Ⅳ組之間差異無(wú)顯著性(P＞0.05);ALT、AST的含量水平在1、6、24 h之間的變化以6 h最為顯著。

2.2 血清NO和ET-1水平 見(jiàn)表3、表4。肝臟缺血40 min再灌注1、6、24 h后血清NO水平Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組明顯低于Ⅰ組(P＜0.01)，而ET-1明顯高于Ⅰ組(P＜0.01);Ⅲ和Ⅳ組明顯高于Ⅱ組(P＜0.01)，而ET-1明顯低于Ⅱ組(P＜0.01);Ⅲ和Ⅳ組水平之間差異無(wú)顯著性(P＞0.05);NO和ET-1的含量水平在1、6、24 h之間的變化以6 h最為顯著。

表1 不同組血清AST的比較(x ±s，U/L，n=15)

表2 不同組血清ALT的水平(x ±s，U/L，n=15)

表3 各組血清NO的水平(x ± s，μmol/L，n=15)

表4 不同組血清ET-1水平(x ± s，ng/L，n=15)

2.3 血清 TNF-α和 IL-10水平 見(jiàn)表5、表6。肝臟缺血40 min再灌注1、6、24 h 后血清 TNF-α、IL-10 水平Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組明顯高于Ⅰ組(P＜0.01);IL-10水平Ⅲ和Ⅳ組明顯高于Ⅱ組(P＜0.01)，而TNF-α明顯低于Ⅱ組(P＜0.01);Ⅲ和Ⅳ組水平之間差異無(wú)顯著性(P＞0.05);TNF-α和IL-10的含量水平在1、6、24 h之間的變化以6 h最為顯著。

2.4 肝臟組織病理學(xué) 見(jiàn)圖1。光鏡下Ⅰ組肝索及肝竇排列規(guī)則。Ⅱ組肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，大量炎性細(xì)胞聚集、浸潤(rùn)，肝小葉中央靜脈和肝血竇淤血明顯，肝竇狹窄，肝索竇排列不規(guī)則，肝細(xì)胞不同程度的腫脹及空泡樣變性，偶有點(diǎn)狀壞死;Ⅲ組肝小葉結(jié)構(gòu)尚可，部分肝細(xì)胞腫脹，變性，較Ⅱ組輕;Ⅳ組的肝小葉和肝血竇淤血程度較Ⅲ組輕，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞變性不明顯，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少，未見(jiàn)明顯肝細(xì)胞壞死。

2.5 免疫組化法檢測(cè)肝組織Bax及Bcl-2的表達(dá) 見(jiàn)圖2，圖3，和表7，表8。Ⅰ組中Bax和Bcl-2表達(dá)較多，Ⅱ組Bax和Bcl-2的表達(dá)與Ⅰ組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);Ⅲ組較Ⅱ組Bcl-2的表達(dá)水平高，但低于Ⅳ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Ⅳ組及Ⅲ組較Ⅱ組Bax的表達(dá)水平低，Ⅲ組較Ⅱ組Bax的表達(dá)水平低，但高于Ⅳ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表5 不同組血清的TNF-α水平比較(x ± s，pg/ml，n=15)

表6 不同組血清的IL-10水平比較(x ± s，pg/ml，n=15)

表7 各組肝組織Bax蛋白的A值的變化(x ± s，n=15)

表8 各組肝組織Bcl-2蛋白的A值的變化(x ± s，n=15)

2.6 各組肝細(xì)胞凋亡情況 Ⅰ組肝組織僅見(jiàn)少量凋亡細(xì)胞，而Ⅱ、Ⅲ組及Ⅳ組凋亡細(xì)胞表達(dá)明顯增多(P＜0.01)，且AI隨再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì)，Ⅳ組AI值較Ⅲ及Ⅱ組低，Ⅲ組AI值較Ⅱ組低，但高于Ⅳ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)圖4，表9。

圖1 各組再灌注6 h肝臟組織病理學(xué)表現(xiàn)(HE，×200)

圖2 各組再灌注6 h肝臟組織 Bax的表達(dá)(DAB，×200)

圖3 各組肝臟組織再灌注6 h Bcl-2的表達(dá)(DAB，×200)

圖4 各組肝臟組織凋亡情況(TUNEL，×200)

表9 各組再灌注不同時(shí)點(diǎn)肝細(xì)胞的AI的變化(x ± s，n=15)

3 討論

HIRI是一個(gè)有多種細(xì)胞參與、多種介質(zhì)共同作用、鈣離子超載、氧自由基形成、微循環(huán)紊亂和能量耗竭等多因素形成的復(fù)雜病理生理過(guò)程，臨床實(shí)踐中，如原位肝移植，復(fù)雜肝切除手術(shù)，休克復(fù)蘇會(huì)不可避免地導(dǎo)致肝臟缺血再灌注損傷。有研究表明HIRI后3～6 h，各種炎癥因子顯著升高，出現(xiàn)明顯的肝功能損害〔2，3〕。本實(shí)驗(yàn)中以再灌注后 1、6、24 h 作為觀察時(shí)間點(diǎn)，可確切反映大鼠HIRI后的肝功能變化狀況。

小劑量高滲鹽水不僅能快速改善各種休克的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)〔4〕，提高心肌收縮力和心排出量，增強(qiáng)微血管的反應(yīng)性，改善微循環(huán)，而且還能抑制創(chuàng)傷應(yīng)激狀態(tài)下的過(guò)度炎癥反應(yīng)。高滲鹽水可抑制粒細(xì)胞過(guò)度激活，抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及黏附分子的合成、分泌或表達(dá)〔4〕，同時(shí)，增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的釋放與表達(dá)〔5〕，而發(fā)揮抗炎作用。高滲鹽水調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的毒性反應(yīng)與調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的細(xì)胞骨架有關(guān)，它能減弱中性粒細(xì)胞胞外信息的傳遞〔6〕。高滲鹽水預(yù)處理還明顯增強(qiáng)缺血/再灌注后肝臟血紅素加氧酶-1(HO-1)mRNA及蛋白表達(dá)〔1〕，在HIRI前進(jìn)行高滲鹽水預(yù)處理，具有明顯抑制再灌注后外周血中性粒細(xì)胞Mac-1表達(dá)和肝內(nèi)ICAM-1的表達(dá)的作用，明顯減輕再灌注后肝臟中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);同時(shí)肝細(xì)胞及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞濁腫、變性程度減輕，肝臟微循環(huán)得到明顯改善。

本研究說(shuō)明高滲鹽水預(yù)處理對(duì)HIRI具有明顯的保護(hù)作用。IR時(shí)，肝細(xì)胞受到嚴(yán)重的損害，產(chǎn)生大量的ET-1受ETA受體介導(dǎo)，引起肝血管強(qiáng)烈收縮，使肝臟血流循環(huán)阻力增加，加重肝臟瘀血，肝臟缺血缺氧狀況更為嚴(yán)重，氧自由基、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載及各種炎性因子等大量釋放，引起再灌注損傷。ET-1還可激活中性粒細(xì)胞，增加內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附等。ET縮血管作用所激發(fā)的自由基、興奮性氨基酸毒性、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載以及細(xì)胞致使平衡失調(diào)因子為再灌注損傷的重要原因。

NO是一種具有多種生物活性的小分子物質(zhì)，是一氧化氮合酶(NOS)的終產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、半衰期短、化學(xué)性質(zhì)活潑，廣泛存在于生物體內(nèi)各組織器官，參與機(jī)體內(nèi)多種生理及病理過(guò)程，如血管張力的調(diào)節(jié)，神經(jīng)傳遞，抗微生物及免疫調(diào)節(jié)。肝臟是具有多種復(fù)雜功能的機(jī)體重要器官，所有肝臟細(xì)胞均可生成NO〔7〕。NO能與肝細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素酶系統(tǒng)結(jié)合改變活性來(lái)影響肝臟的藥物代謝和生物轉(zhuǎn)化。Nishida等〔8〕認(rèn)為，當(dāng)內(nèi)毒素引起肝臟微循環(huán)變化時(shí)，NO具有穩(wěn)定微循環(huán)、增強(qiáng)肝臟抗缺血和抗氧化的能力。在內(nèi)毒素水平較低的情況下，肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生大量NO對(duì)維持肝臟微循環(huán)起重要作用。因此，NO在肝內(nèi)的作用和影響相當(dāng)復(fù)雜。

NO和ET是體內(nèi)最強(qiáng)的血管舒張和收縮因子，在生理情況下，兩者之間可通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)保持動(dòng)態(tài)平衡，ET與血管內(nèi)皮ETB受體結(jié)合，可以促進(jìn)NO釋放，而NO又可以抑制ET釋放，相互作用，相互依賴(lài)，維持著動(dòng)態(tài)平衡，共同精確調(diào)節(jié)血管活性〔9〕，但在許多應(yīng)激狀態(tài)下，它們的平衡失調(diào)可影響疾病的發(fā)生和發(fā)展。

本實(shí)驗(yàn)研究了大鼠肝臟缺血再灌注NO與ET之間平衡關(guān)系的改變及其與HIRI的關(guān)系。在肝臟缺血再灌注時(shí)期，ET濃度明顯增高，而NO濃度明顯降低。ET濃度增高一方面是因?yàn)槿毖跫鞍|(zhì)內(nèi)Ca2+濃度升高促使內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生ET，另一方面在再灌注時(shí)期內(nèi)由門(mén)靜脈進(jìn)入肝臟內(nèi)的腸源性?xún)?nèi)毒素也可刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生ET。ET濃度增高將導(dǎo)致微血管收縮，肝臟血流減少而引起肝微循環(huán)功能障礙，繼而導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。再灌注之后，NO生成是減少的。主要原因可能是缺血期肝臟損傷而釋放出大量的精氨酸酶，再灌注后精氨酸酶進(jìn)人體循環(huán)，使體內(nèi)L-精氨酸(NO的供體)大量消耗，NO生成原料不足。NO濃度降低可反饋性促進(jìn)ET產(chǎn)生而加重其收縮血管效應(yīng)，同時(shí)使NO抑制黏附分子的表達(dá)及抑制血小板聚集的功能減弱而導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。

TNF-α主要由激活的巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及B細(xì)胞分泌，是具有多功能的多肽，它在炎癥反應(yīng)過(guò)程中起著較為重要的作用。肝臟是體內(nèi)最大的巨噬細(xì)胞池，是產(chǎn)生TNF-α的主要器官〔10〕。肝臟富含TNF-α受體，是 TNF-α作用的主要靶器官。TNF-α通過(guò)多種機(jī)制誘導(dǎo)肝臟損傷。TNF-α可誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子的產(chǎn)生及活化中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。灌注細(xì)胞因子如TNF-α可由于中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用引起肝臟細(xì)胞、分子和微循環(huán)障礙。大量的研究資料表明，肝臟缺血再灌注后可以通過(guò)壞死和凋亡兩條途徑引起細(xì)胞死亡，TNF-α在此過(guò)程中起著十分重要的作用〔11〕。缺血時(shí)肝細(xì)胞受損，引起細(xì)胞內(nèi)Ca超載，再灌注時(shí)Ca超載加重。Kupffer細(xì)胞因Ca超載而活化，分泌釋放大量的TNF-α。TNF-α的過(guò)量表達(dá)引起大量肝細(xì)胞損害，直接導(dǎo)致肝竇內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，肝臟微循環(huán)功能障礙。TNF-α對(duì)肝臟損傷的作用機(jī)制表現(xiàn)為:直接對(duì)肝細(xì)胞損傷;對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，導(dǎo)致肝血竇微循環(huán)障礙;活化中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞，并誘導(dǎo)IL-1、IL-6等基因表達(dá)，活化磷脂酶A2(PLA2)，使花生四烯酸分解，產(chǎn)生血小板活化因子(PAF)、白三烯(LT)、血栓素A2(TXA2)等炎癥介質(zhì)，加劇炎癥反應(yīng);介導(dǎo)脂類(lèi)介質(zhì)及其他多肽介質(zhì)的產(chǎn)生;TNF-α能激活補(bǔ)體系統(tǒng)，通過(guò)其細(xì)胞毒性作用加劇組織損傷;此外，肝臟是自由基產(chǎn)生的主要部位，TNF-α可以誘導(dǎo)氧自由基的產(chǎn)生;促進(jìn)中性粒細(xì)胞“氧化爆發(fā)”，產(chǎn)生氧自由基等活性氧介質(zhì)并導(dǎo)致肝臟損傷。

IL-10作為體內(nèi)炎癥反應(yīng)過(guò)程中的內(nèi)生性抗炎細(xì)胞因子，可以抑制多種細(xì)胞合成炎癥介質(zhì)，具有強(qiáng)有力的抗炎作用，但其具體的抗炎機(jī)理尚不清楚。近年來(lái)的研究證實(shí)IL-10是一個(gè)多效性的細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)作用〔12，13〕。它是抑制單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞功能的細(xì)胞素，能抑制許多前炎癥相關(guān)因子的產(chǎn)生，包括 TNF-α、IL-1、IL-6、MIP-1 和 IL-8;抑制 Th1 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-g和IL-2。Ke等〔14〕認(rèn)為IL-10抑制IL-6的產(chǎn)生對(duì)HIRI產(chǎn)生保護(hù)作用。IL-10還可以增強(qiáng)血紅素加氧酶-1(HO-1)的表達(dá)，而發(fā)揮強(qiáng)大的抗炎作用。IL-10通過(guò)抑制核因子-κB(NF-κB)的活化，導(dǎo)致各種促炎細(xì)胞因子(IL-1、IL-6和TNF等)的產(chǎn)生減少。

本研究驗(yàn)證了高滲鹽水預(yù)處理能夠減輕肝細(xì)胞的損傷，減輕肝臟的瘀血程度，改善微循環(huán)功能障礙，對(duì)肝臟缺血再灌注具有保護(hù)作用。其保護(hù)機(jī)制可能是抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α、增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的釋放與表達(dá)，減少中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)所致組織的損傷。

Bcl-2是重要的抗凋亡基因，在缺血再灌注中表現(xiàn)尤為突出〔15，16〕。研究發(fā)現(xiàn)〔17〕肝細(xì)胞 Bcl-2 基因表達(dá)明顯抑制了肝臟缺血再灌注時(shí)的肝細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族包括 Bcl-2亞家族、Bax亞家族和BH3亞家族等。在體內(nèi)，多以二聚體形式發(fā)揮作用，并呈現(xiàn)兩種不同的作用:Bax二聚體形成時(shí)誘導(dǎo)并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，隨著B(niǎo)cl-2的表達(dá)上升，促進(jìn) Bax/Bax分離，形成更穩(wěn)定的Bax/Bcl-2從而抑制凋亡;當(dāng)Bcl-x存在時(shí)，可先與Bcl-2形成異二聚體，使游離Bax形成二聚體而促進(jìn)凋亡。Bcl-2與Bax表達(dá)水平的平衡決定了凋亡信號(hào)刺激后細(xì)胞的存活或凋亡。炎癥反應(yīng)是肝臟缺血再灌注損傷的重要組成部分，主要由炎癥細(xì)胞介導(dǎo)，特別是Kupffer細(xì)胞。Kupffer細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞能在肝臟遭遇缺血再灌注損傷時(shí)，釋放大量炎性介質(zhì)及炎性因子。而這些介質(zhì)及因子均為肝臟缺血再灌注損傷的始動(dòng)因素，在眾多炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子中，TNF-α起著十分重要的作用。缺血時(shí)肝細(xì)胞受損，引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載，再灌注時(shí)鈣超載加重。Kupffer細(xì)胞因鈣超載而活化，釋放大量的TNF-α，從而引起大量肝細(xì)胞損害〔18〕。本研究發(fā)現(xiàn)高滲鹽水可以抑制肝細(xì)胞的凋亡，其機(jī)制可能在于抑制Bax的表達(dá)，增加Bcl-2的表達(dá)。

缺血預(yù)處理是HIRI的保護(hù)措施之一〔19〕，肝組織經(jīng)短暫的重復(fù)缺血能增加對(duì)缺血的耐受性，減輕隨后較長(zhǎng)時(shí)間的缺血造成的損傷，IP涉及的機(jī)制尚不完全清楚，有待更進(jìn)一步研究。

總之，高滲鹽水及缺血預(yù)處理均對(duì)HIRI有保護(hù)作用。且前者的保護(hù)作用優(yōu)于后者。高滲鹽水能夠減少Bax的表達(dá)促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，同時(shí)又能抑制TNF-α的產(chǎn)生、增強(qiáng)IL-10的表達(dá)水平來(lái)增強(qiáng)抗炎作用，抑制HIRI時(shí)肝細(xì)胞的凋亡。高滲鹽水預(yù)處理操作方便，適用范圍廣，為臨床肝臟外科減輕HIRI提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景和價(jià)值。

1 柯慶宏，鄭樹(shù)森，梁廷波，等.高滲鹽水預(yù)處理可減輕中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的肝臟缺血再灌注損傷〔J〕.中國(guó)病理生理雜志，2007;23(7):1326-30.

2 Scrracion-lnglott F，Habib NA，Mathie RT.Hepatic ischemia-reperfusion injuey〔J〕.Am J Surg，2001;181(1):160-1.

3 Fondevila C，Busuttil RW，Kupiec-Weglinski JW.Hepatic ischemia/reperfusion injury:a fresh look〔J〕.Exp Mol Pathol，2003;74(1):86-93.

4 Ke QH，Zheng SS，Liang TB，et al.Pretreatment of hypertonic saline can increase endogenous interleukin 10 release to attenuate hepatic ischemia reperfusion injury〔J〕.Dig Dis Sc，2006;51(12):2257-63.

5 Oreopoulos GD，Wu H，Szaszi K，et al.Hypertonic preconditioning prevents hepatocellular injury following ischemia/reperfusion in mice:a role for interleukin-10〔J〕.Hepatology，2004;40(1):211-20.

6 Ke QH，Zheng SS，Liang TB，et al.Effects of hypertonic saline on expression of heme oxygenase enzyme-1 in hepatic ischemia/reperfusion injury rats〔J〕.Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue，2006;18(1):5-8.

7 袁晟光，董家鴻.一氧化氮在肝臟病變中的作用〔J〕.消化外科，2003;2(3):209-13.

8 Nishida J，Mecuskey RS，Medomaell D.Protective role of nitric oxide in hepatic microcirculatory dysfunction during endotoxemia〔J〕.Am JPhysiol，1994;267:G1135-41.

9 Hanada T，Yoshimura A.Regulation of cytokine signaling and inflammation〔J〕.Cytokine Growth Factor Rev，2002;13(4):413-5.

10 Cutrn JC，Perrelli MC，Cavalieri B，et al.Microvascular dysfunction induced by reperfusion injury and protective effect of ischemic preconditioning〔J〕.Free Radic Biol Med，2002;33(9):1200-8.

11 Colletti LM，Green M.Lung and liver injury following hepatic ischemia/reperfusion in the rat is increased by exogenous lipopolysa-ccharide which also increases hepatic TNF production in vivo and in vitro〔J〕.Shock，2001;16(4):312-9.

12 Buer BJ，Lanoue A，Gercia C，et al.Interleukin-10 secretion and impaired effector function of major histocompatibility complex classⅡ-restricted T cells anergized in vivo〔J〕.Exp Med，1998;187:177-83.

13 許昌泰，李陜區(qū).白細(xì)胞介素研究新進(jìn)展〔J〕.武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007;16(2):191-4.

14 Ke B，Shen XD，Tsuchihashi S，et al.Viral interleukin-10 gene transfer prevents liver ischemia-reperfusion injury:toll-like receptor-4 and heme oxygenase-1 signaling in innate and adaptive immunity〔J〕.Hum Gene Ther，2007;18(4):355-66.

15 Bilbao G，Douglas JL，Bckhoff DF，et al.Reduction of ischemia reperfusion injury of the liver by in vivo adenovirus mediated gene transfer of the antiapoptotic Bcl-2 gene〔J〕.Ann Surg，1999;203(2):185.

16 Tsuchihashi S，Ke B，Kaldas F，et al.Vascular endothelial growth factor antagonist modulates leukocyte trafficking and protects mouse livers against ischemia/reperfusion injury〔J〕.Am JPathol，2006;168(2):695-705.

17 Buras JA，Reenstra WR.Endothelial-neutrophil interactions during ischemia and reperfusion injury:basic mechanisms of hyperbaric oxygen〔J〕.Neurol Res，2007;29(2):127-31.

18 Bayir A，Kafali ME，Ak A，et al.Effects of hypertonic saline，HAES and dimethylsulphoxide on free oxygen radicals in haemorrhagic shock oxygen radicals in haemorrhagic shock〔J〕.Ulus Travma Acil Cerrahi Derg，2003;9(3):154-9.

19 Gong NQ，Ye QF，Ang HY，et al.Protection of grafts by medicine preconditioning and ischemia preconditioning in liver transplantation〔J〕.Chin J Hepa Surg，2000;6:282-4.