AEG-1的表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床病理因素相關(guān)性研究

林 浩 吳碧蓮 鄭清水

1.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建福州 350101；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，福建福州 350005

腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma，RCC）為一種成人泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，近年來發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢，具有不同的病理類型，起源于腎臟的腎小管或集合管的上皮細(xì)胞。其發(fā)病原因還不十分明確，且早期癥狀不明顯。目前腎細(xì)胞癌的治療仍以手術(shù)為主，但最近的基因?qū)W研究發(fā)現(xiàn)，腎細(xì)胞癌的發(fā)病可能與患者體內(nèi)某些基因有關(guān)。尋找與腎細(xì)胞癌發(fā)病相關(guān)的腫瘤相關(guān)因子，發(fā)展相關(guān)分子機(jī)制，可有利于了解腎細(xì)胞癌的病因和發(fā)病機(jī)制，提高腎細(xì)胞癌的治療效果，提供有效的防治方法。星形細(xì)胞上調(diào)基因-1（astrocyte elevated gene-1，AEG-1）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新基因，具有類似癌基因的作用。研究發(fā)現(xiàn)，它在一系列腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中的表達(dá)和腫瘤進(jìn)展存在相關(guān)性。本研究收集83例RCC患者的臨床資料，檢測并比較其腎癌組織與正常腎組織中AEG-1的表達(dá)情況，旨在探討它與RCC臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2000～2009年來我院進(jìn)行治療的RCC患者83例的臨床資料，作為腎細(xì)胞癌組，術(shù)前未接受放化療及生物治療，均行根治性切除術(shù)。另選取20例正常腎組織作為對照組。83例RCC中男51例，女32例，年齡23～72歲，平均（56.8±3.7）歲。對照組中，男12例，女8例。年齡28～69歲，平均（51.7±4.5）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

83例RCC患者按照Robson’s分期可分為：Ⅰ期23例，Ⅱ期27例，Ⅲ期15例，Ⅳ期18例。根據(jù)2004年WHO制定的最新有關(guān)腎實(shí)質(zhì)上皮性腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)分為：腎透明細(xì)胞癌58例，嫌色細(xì)胞癌6例，乳頭狀癌8例，未分類型11例。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本制備 83例RCC標(biāo)本和20例對照標(biāo)本均用10%甲醛固定，再進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋。之后進(jìn)行連續(xù)切片，長度為4μm。

1.2.2 染色 將標(biāo)本制備完畢后，行蘇木精-伊紅染色（HE染色）和免疫組化染色法（SP法），染色完畢后，在光鏡下觀察標(biāo)本。其中用0.01mol/L PBS（pH=7.4）代替一抗作陰性對照。實(shí)驗(yàn)材料：兔抗人AEG-1多克隆抗體購自英國Abcam公司，DAB顯色劑、SP試劑盒由福州邁新生物技術(shù)公司提供，操作方法嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

1.2.3 切片觀察 每張切片隨機(jī)選取5個（×400）在高倍視野下進(jìn)行觀察，每視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞。要求采用雙盲法由兩位檢驗(yàn)者對切片進(jìn)行觀察記錄。

1.3 評定標(biāo)準(zhǔn)

按著染細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)計(jì)分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞76%為4分；按著色強(qiáng)度計(jì)分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐黃色為3分。將兩者相乘所得的總分作為AEG-1表達(dá)的判定標(biāo)準(zhǔn)：9～12分為強(qiáng)陽性（+++），5～8分為陽性（++），2～4分為弱陽性（+），0～1分為陰性（－）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)染色

AEG-1陽性反應(yīng)物分布于細(xì)胞核周圍的胞質(zhì)，呈淡黃至褐黃色細(xì)小顆粒。AEG-1在正常腎組織中主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，腎細(xì)小動脈平滑肌層也有高表達(dá)，但腎小球內(nèi)各種固有細(xì)胞均不表達(dá)（圖1）；AEG-1在RCC中的表達(dá)主要為癌細(xì)胞細(xì)胞核周圍的胞質(zhì)，呈淡黃至褐黃色細(xì)小顆粒（圖 2）。

圖1 正常對照組AEG-1表達(dá)（×200）

圖2 腎透明細(xì)胞癌AEG-1表達(dá)（×200）

2.2 AEG-1在不同腎組織中的表達(dá)

AEG-1在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率為72.29%，顯著高于在正常腎組織中的表達(dá)率（20.00%），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

2.3 AEG-1的表達(dá)與RCC的臨床病理參數(shù)的關(guān)系

AEG-1的表達(dá)與RCC患者的年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與腎細(xì)胞癌腫瘤大小、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分型及臨床分期有關(guān)。AEG-1在腫瘤分期為Ⅲ期和Ⅳ期的組織中的陽性表達(dá)率高于在Ⅰ期和Ⅱ期中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。RCC腫瘤直徑≥7cm的其AEG-1的表達(dá)顯著高于直徑小于7cm的（P＜0.05）；組織學(xué)分級為低分化或未分化的AEG-1陽性表達(dá)率要高于高分化的陽性表達(dá)率，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；腎透明細(xì)胞癌的AEG-1陽性表達(dá)率顯著低于非腎透明細(xì)胞癌的陽性表達(dá)率（P＜0.05）；AEG-1在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中的陽性表達(dá)率低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 正常腎組織和RCC組織中AEG-1表達(dá)情況

表2 AEG-1的表達(dá)與RCC的臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

腎細(xì)胞癌是腎臟最常見的惡性腫瘤，占全部惡性腫瘤的2%，且較易發(fā)生轉(zhuǎn)移[1]。腎細(xì)胞癌早期常無癥狀，或只有發(fā)熱、乏力等全身癥狀，腫瘤體積增大時才被發(fā)現(xiàn)。對于一些早期腎癌，可較早發(fā)現(xiàn)。臨床主要表現(xiàn)為血尿、腎區(qū)痛和腫塊。近年來隨著腎細(xì)胞癌患者呈現(xiàn)新的臨床病理特點(diǎn)和醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對于腎細(xì)胞癌的治療，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的，可早期徹底手術(shù)切除，預(yù)后較好。若癌細(xì)胞侵入腎靜脈或侵犯腎周圍組織則預(yù)后差。因此腎癌患者治療失敗和死亡的主要原因仍是癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。腎細(xì)胞癌除直接蔓延向鄰近組織擴(kuò)散外，還可通過血道和淋巴道轉(zhuǎn)移。

AEG-1基因最初是在人類免疫缺陷病毒（HIV-1）感染的人胚胎初級星形細(xì)胞（PHFA）中發(fā)現(xiàn)的[1]。自2002年Su等[2]首次克隆AEG-1基因以來，該基因便引起了眾多科研工作者的關(guān)注并逐漸成為腫瘤研究領(lǐng)域中新的熱點(diǎn)。AEG-1基因全長3611bp，包含11個內(nèi)含子和12個外顯子，位于人體8號染色體。研究表明AEG-1基因的生物學(xué)功能為：（1）促進(jìn)腫瘤血管的生成；（2）促進(jìn)腫瘤增殖；（3）促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移；（4）增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的抵抗性。

AEG-1與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)。有研究表明AEG-1基因在腎臟組織中主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞[3-5]。

Sun等[6]的研究發(fā)現(xiàn)膽囊癌患者AEG-1為陽性的，其生存期短于AEG-1為陰性的患者，因此推斷AEG-1可能與癌細(xì)胞的生長、發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系，可將其作為膽囊癌預(yù)后判斷的指標(biāo)。但有關(guān)AEG-1與RCC臨床病理特征的研究目前還不多見。關(guān)于AEG-1基因在腎臟中的表達(dá)的文獻(xiàn)也較少。本研究結(jié)果表明AEG-1在RCC組織中的表達(dá)較高，其表達(dá)率為72.29%。

在正常的腎組織細(xì)胞中也有一定的表達(dá)，但與RCC組織中的表達(dá)相比，比較微弱，僅為20.00%（4/20），明顯低于在RCC組織中的表達(dá)（P＜0.01）。通過AEG-1的表達(dá)與RCC的臨床病理參數(shù)的關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，AEG-1的表達(dá)與RCC患者性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是與RCC的腫瘤大小、病理分型、組織學(xué)分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。這一研究結(jié)果與Chen等[7]的研究結(jié)果相似。表明AEG-1與RCC發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，AEG-1可能參與了腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展，可以將其作為反映RCC生物學(xué)行為的指標(biāo)，也可作為判定預(yù)后的指標(biāo)[6-9]。

[1]Brack-Werner R.Astrocytes：HIV cellular reservoirs and important participants in neuropathogenesis[J].AIDS，1999，13（1）：1-22.

[2]Su ZZ，Kang DC，Chen Y，et al.Identification and cloning of human astrocyte genes displaying elevated expression after infection with HIV-1 or exposure to HIV-1 envelope glycoprotein by rapid subtraction hybridization，RaSH[J].Oncogene，2002，21（22）：3592-3602.

[3]Yoo BK，Emdad L，Lee SG，et al.Astrocyte Elevated Gene-1（AEG-1）：a multifunctional regulator of normal and abnormal physiology[J].Pharmacol Ther，2011，130（1）：1-8.

[4]陳文芳.腎細(xì)胞癌中AEG-1的表達(dá)及其與侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究[D].廣州：中山大學(xué)，2010.

[5]趙明，滕曉東，孫柯，等.新近認(rèn)識的腎細(xì)胞癌[J].中華病理學(xué)雜志，2013，42（7）：478-482.

[6]Sun W，F(xiàn)an YZ，Xi H，et al.Astrocyte elevated gene-1 overexpression in human primary gallbladder carcinomas：An unfavorable and independent prognostic factor[J].Oncol Rep，2011，26（5）：1133-1142．

[7]Chen W，Ke Z，Shi H，et al.Overexpression of AEG-1 in renal cell carcinoma and its correlation with tumor nuclear grade and progression[J].Neoplasma，2010，57（6）：522-529.

[8]王海屹，葉慧義，袁靜，等.多發(fā)腎透明細(xì)胞癌11例磁共振影像分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2013，93（27）：2161-2163.

[9]吳栗洋，程浩，鄧小虎，等.血管內(nèi)皮生長抑制因子在散發(fā)性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2013，93（10）：741-745.