PTTG1在肝細胞癌的表達及臨床意義

周臻濤林小軍

1.中山大學附屬梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科，廣東梅州514031；2.中山大學腫瘤防治中心肝膽腫瘤外科，廣東廣州510060

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1(Pituitary Tumor Transforming Gene 1,PTTG1)是一種新的癌基因,于1997年首先克隆自大鼠垂體腫瘤[1]。隨后于1998年自人睪丸中克隆出人PTTG1,位于5號染色體長臂5q33[2]。體外實驗顯示,該基因在小鼠成纖維細胞中過表達可導致細胞轉(zhuǎn)化,體內(nèi)實驗則顯示可促進腫瘤的形成[1]。在所有被研究的腫瘤細胞(包括肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、垂體腫瘤等)中都有高表達，并與腫瘤的侵襲性相關[2-6]。有關PTTG1在肝細胞癌表達的研究報道較少，2009年1月—2012年期間該研究檢測原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma HCC）組織及相應癌旁肝組織中PTTG1蛋白的表達情況，旨在探討其臨床意義?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集該院行根治性切除，且臨床病理資料完整的肝細胞癌病例標本及相應的癌旁肝組織79例，均經(jīng)病理組織學證實為肝細胞癌。其中男性69例，女性10例；年齡17～72歲，中位年齡49歲；HBsAg陽性73例；肝功能Child-Pugh分級，Child-A級78例，Child-B級1例；無肝硬化19例，輕度肝硬化39例，中度肝硬化18例，重度肝硬化3例；肝癌組織按Edmondson病理分級標準進行分級，Ⅰ級6例，Ⅱ級41例，Ⅲ級28例，Ⅳ級4例；按2001年第八屆全國肝癌學術會議提出的肝癌臨床分期標準進行分期，I期27例，II期52例，無Ⅲ、Ⅳ期患者。所有標本均用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)石蠟切片，厚4 μm，每個臘塊切片3張，2張免疫組化染色，另一張作HE染色。

1.2方法

免疫組織化學檢查采用EnVision兩步法。濃縮型兔抗人PTTG1多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司，工作液濃度1∶200。即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購自DaKo公司。實驗步驟按試劑盒說明書進行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3結(jié)果判斷

在普通光學顯微鏡下閱片，在高倍鏡下（400×）隨機觀察5～10個視野，觀察細胞漿的染色深淺和計算胞漿陽性的細胞所占的百分比。染色結(jié)果判定標準參照Fromowitz等[7]陽性細胞半定量分級法，在高倍鏡下對細胞染色作如下評分：根據(jù)陽性細胞占整個腫瘤細胞的百分數(shù)打分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據(jù)陽性細胞染色深淺打分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為 3 分；兩項結(jié)果相加＜2 分為陰性(-)，2～3 分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性(++)，6～7 分為強陽性(+++)，其中-～+視為低表達，++～+++視為高表達。以上結(jié)果均由2位病理科醫(yī)師采用雙盲法觀察并確定。

1.4 統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)資料統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 PTTG1在肝癌組織、癌旁肝組織及正常肝組織中的表達

PTTG1在上述各組織中陽性染色位于細胞漿，呈棕黃色顆粒狀，細胞核染色為陰性。在肝癌組織、癌旁肝組織中PTTG1高表達率分別為53.2%、1.3%。兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000＜0.05），見表 1。

表1 2種組織中PTTG1的表達情況[n（%）]

2.2 肝癌組織中PTTG1的表達與臨床病理指標的關系

免疫組化結(jié)果顯示PTTG1的表達水平與衛(wèi)星結(jié)節(jié)，Edmondson病理分級密切相關。PTTG1在無衛(wèi)星結(jié)節(jié)組和有衛(wèi)星結(jié)節(jié)組高表達率分別為39.7%、68.7%，兩組差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.037＜0.05）；PTTG1 在 Edmondson 分級Ⅰ、Ⅱ組和Ⅲ、Ⅳ組高表達率分別為 38.3%、62.5%，兩組差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.035＜0.05）。PTTG1 表達水平與性別、年齡、AFP、HBsAg、肝硬化程度、ICGR15、TNM分期、腫瘤大小及腫瘤包膜狀況無關（P>0.05）。見表2。

表2 肝癌組織中PTTG1表達與其臨床病理指標的關系[n（%）]

3 討論

PTTG1基因是一種癌基因，體外實驗顯示，該基因在小鼠成纖維細胞中過表達可導致細胞轉(zhuǎn)化，體內(nèi)實驗則顯示可促進腫瘤的形成。PTTG1是Ramaswamy等[2]報道的17種與原發(fā)性實體腫瘤轉(zhuǎn)移有關的基因之一。目前認為PTTG1促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用機制主要有以下幾個方面:①作為保全素(Securin)可抑制分裂期細胞姊妹染色單體的分離,使子代細胞非整倍體化，增加突變幾率，促進腫瘤表型惡化；②PTTG1蛋白中含有的PXXP基序可與多種細胞內(nèi)接頭蛋白的SH3域結(jié)合,通過募集多種胞內(nèi)信號分子,將生長刺激信號傳至核內(nèi),激活多種腫瘤相關基因的表達,使細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化；③PTTG1可上調(diào)bFGF，后者可誘導腫瘤組織新生血管形成，促進腫瘤生長、侵襲與轉(zhuǎn)移。有關PTTG1在肝癌組織中表達的研究國內(nèi)外文獻報道不多，F(xiàn)ujii等[8]報道肝癌組織中PTTG1 mRNA表達水平明顯高于癌旁肝組織，PTTG1蛋白在肝癌組織中高表達，定位在胞漿，而在癌旁肝組織中不表達。Su等[9]采用RT-PCR方法檢測147例肝癌組織發(fā)現(xiàn)PTTG1 mRNA高表達率為61%（80/147）。該實驗通過免疫組化的方法研究表明PTTG1陽性染色定位于細胞漿中，在肝癌組織中高表達率53.2%，明顯高于癌旁組織的高表達率1.3%(P<0.05)，提示PTTG1在原發(fā)性肝細胞癌的發(fā)生過程中可能起著某種作用，推測這種作用可能與PTTG1的促進細胞增殖與惡性轉(zhuǎn)化功能有關，但其確切的作用機制還有待進一步研究。

有關PTTG1與臨床病理指標的研究，在其他腫瘤中的研究較多。Rehfeld等[10]報道在非小細胞肺癌 （nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）中，PTTG1高表達的患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠處轉(zhuǎn)移發(fā)生率高。在結(jié)腸癌中的研究[11]表明有周圍淋巴結(jié)浸潤的結(jié)直腸癌較局限于腸壁的結(jié)直腸癌有更高的PTTG1表達。Wen[12]等研究發(fā)現(xiàn)PTTG1與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。有關PTTG1的表達與肝細胞癌臨床病理指標關系的研究，國內(nèi)外文獻報道較少。該研究表明，PTTG1的表達水平與衛(wèi)星結(jié)節(jié)、病理分級有關，即有衛(wèi)星結(jié)節(jié)、分化程度差者PTTG1高表達率較無衛(wèi)星結(jié)節(jié)、分化程度好者要高，而與患者性別、年齡、AFP水平、肝炎狀態(tài)、肝硬化程度、肝功能儲備情況、TNM分期、包膜情況及腫瘤大小無關。衛(wèi)星結(jié)節(jié)、病理分級可反映肝細胞癌惡性程度的高低，與肝細胞癌的預后密切相關。PTTG1高表達與衛(wèi)星結(jié)節(jié)有關，提示PTTG1可能參與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程。腫瘤的病理分級反映了腫瘤細胞的分化程度，病理分級越高，分化程度越差，而腫瘤細胞分化越差則惡性程度越高，PTTG1在病理分級高的肝癌中高表達率升高，提示PTTG1可能通過某種機制抑制了肝癌細胞的分化，增強了肝癌的惡性生物學行為。

肝癌的發(fā)生發(fā)展是一個十分復雜的過程，該研究中顯示肝癌組織中PTTG1的表達明顯高于癌旁肝組織及正常肝組織，肝癌組織中PTTG1的表達水平與衛(wèi)星結(jié)節(jié)、Edmondson病理分級相關，提示PTTG1可能在肝癌的發(fā)生過程中起著重要作用，并可能參與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程，但具體機制還有待進一步研究。

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