γ-維生素E對哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液干擾素γ的影響

劉艷，尚云曉，文江舸，張晗，相云

（1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院小兒呼吸內(nèi)科，沈陽 110004；2.沈陽市兒童醫(yī)院內(nèi)科，沈陽 110032）

支氣管哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分引起的慢性氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性疾病，是當(dāng)今世界威脅公共健康最常見的慢性肺部疾病，其患病率在全球逐年上升。近年來，越來越多研究認(rèn)為哮喘與脂溶性維生素E有關(guān)［1～3］。維生素E分8種，其中 γ-維生素 E（gamma-tocopherol，γ-T）被認(rèn)為與哮喘的關(guān)系最密切。本實(shí)驗(yàn)旨在利用卵白蛋白（ovalbumin，OVA）激發(fā)的哮喘小鼠模型，探討γ-T與哮喘的相關(guān)性，評價(jià)γ-T對哮喘后氣道炎癥因子干擾素γ（interferon γ，IFN-γ）的影響，為γ-T應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

OVA為美國Sigma公司產(chǎn)品；氫氧化鋁凝膠由上海美興化工股份有限公司提供；γ-T（純化度95%），由美國Sigma公司提供；IFN-γ ELISA試劑盒，由美國Sigma公司提供；地塞米松磷酸鈉為河南潤弘制藥股份有限公司產(chǎn)品；食用玉米油，中糧北海糧油工業(yè)（天津）有限公司出品。

1.2 方法

4周齡健康Balb/c小鼠40只（清潔級，雄性，體質(zhì)量18～20 g），由中國醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。隨機(jī)將小鼠分為4組：哮喘組、地塞米松組、γ-T組、正常組，每組10只。哮喘組分別于第0、7、14天腹腔注射0.5 mL致敏液（含OVA 10 μg和氫氧化鋁凝膠2 mg）進(jìn)行致敏；從第21天開始為激發(fā)階段，將小鼠置于自制密閉箱內(nèi)，給予霧化吸入25 g/L的OVA溶液30 min，每日霧化1次，同時(shí)給予0.1 mL玉米油灌胃，共激發(fā)1周；γ-T組以上述同樣的方法用OVA進(jìn)行致敏和激發(fā)小鼠，并在每次激發(fā)前1 h分別予以灌胃2 mg（0.002 mL）γ-T及0.1 mL玉米油；地塞米松組則在每次激發(fā)前1 h分別予以腹腔注射地塞米松0.1 mg，0.1 mL玉米油灌胃；正常組則用等量生理鹽水代替OVA進(jìn)行腹腔注射和霧化吸入。末次激發(fā)后24 h內(nèi)處死動(dòng)物，下腔靜脈取血約0.5 mL，常溫離心后留取血清保存于-70℃冰箱待測；用PBS溶液0.3 mL灌洗右肺3次并收集支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF），低溫離心后上清液保存于-70℃冰箱。采用ELISA測定各組血清及BALF中IFN-γ的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用單因素方差分析檢驗(yàn)組間差異，當(dāng)方差齊性時(shí)，用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩間比較；當(dāng)方差不齊時(shí)，采用Dunnett′st檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組激發(fā)后哮喘發(fā)作情況

哮喘多在激發(fā)后30 min內(nèi)發(fā)作，哮喘組小鼠出現(xiàn)口唇發(fā)紺、呼吸急促，腹部翕動(dòng)，煩躁不安、活動(dòng)頻繁等表現(xiàn)，而γ-T組發(fā)作程度有所減輕，地塞米松組發(fā)作程度明顯減輕，正常組小鼠行動(dòng)敏捷，未見異常。

2.2 血清及BALF中IFN-γ結(jié)果

哮喘組血清及BALF中IFN-γ濃度均較正常組降低，地塞米松組較哮喘組升高最顯著，γ-T組次之。γ-T組與哮喘組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；γ-T組與地塞米松組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

輔助性T細(xì)胞（helper T cell，Th）1/Th2失衡是哮喘發(fā)病的重要機(jī)制之一。Th1型細(xì)胞因子有白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-2、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-γ 和 TNF-β，主要參與細(xì)胞免疫反應(yīng)；Th2型細(xì)胞因子有IL-3、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等，主要參與體液免疫反應(yīng)。在哮喘發(fā)病中，Th2免疫反應(yīng)增強(qiáng)，表現(xiàn)為IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等升高；Th1反應(yīng)低下，主要表現(xiàn)為IFN-γ的下調(diào)。Th1免疫反應(yīng)的缺乏，特別是IFN-γ的下調(diào)是哮喘發(fā)病的基本原因［4］。

表1 血清及BALF中IFN-γ含量

維生素E廣泛存在于人類攝取的植物油中。不同種類的植物，維生素E的成分也不同。小麥油富含α型，大豆油以δ型為主，玉米油富含γ型［5］。維生素E的食物來源的最主要的亞型是γ-T。有研究認(rèn)為歐洲與美國民眾哮喘發(fā)病率不同可能與這兩個(gè)地區(qū)的飲食習(xí)慣，主要是攝取的植物油不同有關(guān)［6］。

γ-T 與哮喘有著密切的關(guān)系［7，8］：γ-T 在脂多糖刺激巨噬細(xì)胞和IL-1β刺激上皮細(xì)胞時(shí)，特異性抑制環(huán)氧化酶2。γ-T和它的代謝產(chǎn)物γ2-2-羥乙基苯并二氫吡喃與花生四烯酸競爭環(huán)氧化酶2的活性部位，導(dǎo)致花生酸類物質(zhì)減少［9］。γ-T治療雄性Wistar大鼠角叉菜膠誘導(dǎo)的炎癥，與減少前列腺素、白三烯和TNF的釋放有關(guān)［10］。Wiser等［11］證實(shí)補(bǔ)充γ-T可以降低哮喘患者單核細(xì)胞的氧化應(yīng)激和細(xì)胞因子的反應(yīng)水平，降低血清免疫球蛋白IgE水平。

本研究提示γ-T有促進(jìn)哮喘小鼠炎性因子IFN-γ表達(dá)的作用。γ-T通過促進(jìn)IFN-γ的表達(dá)，上調(diào)Th1反應(yīng)，抑制哮喘急性發(fā)作期的氣道炎癥反應(yīng)。γ-T可能是有用的抗哮喘藥物。關(guān)于劑量、療程、不良反應(yīng)等，需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

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