組培繁殖生姜微型根莖球技術(shù)體系的構(gòu)建

劉全國

（河北省唐山職業(yè)技術(shù)學(xué)院 064002）

生姜是重要的辛辣類藥菜多用經(jīng)濟(jì)作物，在長期利用根狀莖無性繁殖過程中，一方面由于種姜用量大，常因貯藏不當(dāng)造成種姜腐爛，生產(chǎn)上無姜種可用；另一方面由于感染病毒引起品種退化，造成減產(chǎn)與品質(zhì)變劣現(xiàn)象。這兩方面一直嚴(yán)重影響姜農(nóng)種姜效益，已逐步成為人們關(guān)注的焦點。利用生姜的莖尖分生組織中不含病毒或病毒含量較低的特性，將其切取下來進(jìn)行離體培養(yǎng)，從而獲得試管苗植株，構(gòu)建組培繁殖微型姜根莖球生產(chǎn)技術(shù)體系，為生姜生產(chǎn)提供數(shù)量充足、質(zhì)量優(yōu)良的繁殖材料。

生姜微型根莖是指利用生姜根狀莖芽1～2cm做為繁殖材料，經(jīng)殺菌、鈍化病毒后剝?nèi)?.5～1mm大小的生長點，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，繼代增殖后，經(jīng)煉苗在網(wǎng)棚無土栽培條件下生產(chǎn)的微型姜球。微型根莖具有體積小、儲藏容易、生理年齡小、細(xì)胞分裂快、脫菌少毒的優(yōu)勢，在生姜生產(chǎn)中應(yīng)用可保持品種優(yōu)良種性，產(chǎn)量高。

1 剝離莖尖、組培苗培養(yǎng)與增殖快繁

1.1 根狀莖尖外植體初生叢生芽的誘導(dǎo)

健壯根狀莖姜塊用50%多菌靈500倍液浸泡30min殺菌后，放在25℃光照充足的地方，保濕催芽，當(dāng)芽長1～2cm時取下，放入燒杯中用紗布封口，自來水沖洗30min后用70%酒精消毒30s，再用0.1%HgCI2浸泡滅菌15min，無菌水洗滌5～6次，無菌吸水紙吸干根狀莖尖表面水分后放在50～60℃無菌下處理20min，鈍化病毒。在無菌室解剖鏡下剝?nèi)?.5～1mm大小、帶1～2個葉原基根狀莖芽尖的生長點接種到配方為MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+GA30.05mg/L+蔗糖3.0%+瓊脂 0.5%、pH值為5.8～6.0的培養(yǎng)基上，初期黑暗培養(yǎng)5d，以后每天光照時數(shù)12h，光照強度為2500～3000Lx，在26℃環(huán)境條件下培養(yǎng)誘導(dǎo)，1周后開始膨大，3～4周后可形成綠色芽點，開始分化不定芽，經(jīng)5～6周分化形成叢生芽。

1.2 繼代增殖

生姜組培苗的繼代培養(yǎng)是生姜試管苗擴(kuò)繁的關(guān)鍵，當(dāng)培養(yǎng)基中的芽叢長至2～3cm時，把叢生芽切成單芽轉(zhuǎn)入配方為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖3.0%+瓊脂0.5%、pH值為5.8～6.0的增殖培養(yǎng)基中，每瓶10株，條件同前，繼代培養(yǎng)4周得到2～5cm的組培瓶苗。

1.3 組培瓶苗液體淺層靜置快繁

液體培養(yǎng)基即MS培養(yǎng)基成分加蔗糖3.0%，以海綿、濾紙為支持物，培養(yǎng)瓶內(nèi)加入液體培養(yǎng)基30～50mL，液面上平鋪1張濾紙，封口，高溫滅菌。根據(jù)生產(chǎn)需要確定快繁繼代次數(shù)，繼代增殖固體培養(yǎng)基上生長的瓶苗，切成單株接在液體培養(yǎng)基中，投放到濾紙表面上，接觸液面，每瓶15株，每天光照時數(shù)12h，光照強度為 2500～3000Lx，在 26℃環(huán)境條件下培養(yǎng)至形成3～5個小根。

2 試管（瓶）苗煉苗

組培出的姜苗能否成活，煉苗是關(guān)鍵。試管苗在溫室中完成煉苗過程，煉苗分為瓶內(nèi)煉苗和瓶外基質(zhì)煉苗2個環(huán)節(jié)。（1）瓶內(nèi)煉苗：將組培瓶苗放在20～25℃、光照強度 1500～2500Lx、每天光照時間12h、空氣濕度80%～90%的密閉空間內(nèi)，揭去培養(yǎng)瓶的封口膜，加入10mL左右無菌蒸餾水，防止因揭開封口膜水分散失，組培苗缺水萎蔫3～5d。（2）瓶外基質(zhì)煉苗：取出完成瓶內(nèi)煉苗的組培苗，用50%多菌靈溶液800倍液浸泡3～5min，密植在基質(zhì)煉苗床上，煉苗基質(zhì)為草炭∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1。 用40%甲醛40～50倍液按20～40L/m3水量噴灑基質(zhì)，將基質(zhì)均勻噴濕，噴灑完畢后覆蓋塑料薄膜24h以上。使用前揭去薄膜讓基質(zhì)風(fēng)干15d左右，以消除殘留藥物危害。在自瓶內(nèi)移植到瓶外基質(zhì)后的3d內(nèi)，苗床上覆蓋塑料薄膜，床內(nèi)溫度保持在25～28℃，空氣相對濕度在90%以上。瓶外基質(zhì)煉苗采用自然光照，覆蓋薄膜3d后逐漸增加通風(fēng)量，經(jīng)1周的精細(xì)培養(yǎng)，去除薄膜，相對濕度控制在80%，移栽10d后試管苗開始長出枝，在莖基部長出小芽，4周完成瓶外基質(zhì)煉苗，可移栽定植到網(wǎng)棚基質(zhì)中。

3 組培瓶苗網(wǎng)棚生產(chǎn)微型種姜關(guān)鍵集成技術(shù)

用磚搭建寬140cm、高25cm的苗床，床內(nèi)填充經(jīng)過高溫焙燒的蛭石基質(zhì)（10～15cm），苗床栽苗前用甲基托布津800倍液進(jìn)行網(wǎng)棚內(nèi)地面、苗床殺菌處理。當(dāng)網(wǎng)棚內(nèi)地溫穩(wěn)定通過15～20℃時，移栽定植脫毒苗。移苗前苗床澆1次透水，將組培苗瓶外基質(zhì)煉苗后定植在蛭石培養(yǎng)基上，定植深度5cm，株行距為5cm×7.5cm。栽后用噴壺澆水，小水細(xì)噴，定植后噴霧保濕加蓋塑料薄膜小拱棚。網(wǎng)棚外覆蓋遮陽網(wǎng)適度遮陰緩苗1周，防止陽光直射曬苗，1周后移栽苗長出新根后逐步去除遮陽網(wǎng)和小拱棚，基質(zhì)濕度控制在70%～80%。

3.2 營養(yǎng)液及其管理

采用蛭石作為基質(zhì)，蛭石只起到固定植株保持水分的作用，栽苗后10d內(nèi)，植株處于緩苗期，吸收的養(yǎng)分很少，在此期間苗床管理的主要任務(wù)是保持苗床蛭石基質(zhì)濕度。栽苗后7～10d后開始噴施營養(yǎng)液。

前期每隔5d噴施1次營養(yǎng)液肥，配方為硝酸鈣100mg/kg、硝酸鉀 1034mg/kg、硫酸鎂 490mg/kg、磷酸二氫鉀348mg/kg、硫酸銨170mg/kg、氯化鈣150mg/kg、EDTA-Na 37.25mg/kg、硫酸亞鐵 27.85mg/kg、硫酸銅100mg/kg。后期噴施諾普豐水溶性復(fù)合肥，配方為氮19%、五氧化二磷19%、氧化鉀19%、鐵-EDTA 0.12%、錳-EDTA 0.11%、鋅-EDTA0.11%、銅-EDTA0.1%、鉬0.01%、硼 0.1%，每隔 7d施 1次，濃度為 0.2%～0.5%。生長期葉面追施0.5%磷酸二氫鉀溶液。

3.3 微型姜球采收

適時收獲確保絕對年輕的根莖球生理年齡；網(wǎng)棚生產(chǎn)微型生姜根莖球達(dá)到10～15g生理成熟時即可采收。按微型根莖球粒級大小分別采收，種皮鮮嫩，防止破皮現(xiàn)象。采收時的微型根莖球含水量大，采收后放在通風(fēng)陰涼處晾曬5～7d，然后裝入種子袋，貼好標(biāo)簽，在4～6℃條件下低溫儲藏。