細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤研究進(jìn)展

王 艷，席潔琳，黃曉兵，朱一帆，張晉琳△

(1.遵義醫(yī)學(xué)院研究生院2010級(jí)，貴州 遵義 563003;2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院a.血液科，b.器官移植研究所，四川 成都 610072)

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer cells，CIK)是將人外周血、骨髓或臍血的單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子(IL-2、INF-γ及抗CD3單克隆抗體等)誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的一群異質(zhì)性免疫細(xì)胞，1991年由美國(guó)斯坦福大學(xué)Schmidt-Wolf等首次報(bào)道［1］。其主要效應(yīng)細(xì)胞表面既有T細(xì)胞表面標(biāo)志CD3+，也有自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)表面標(biāo)志CD56+，故兼具有T淋巴細(xì)胞的抗瘤活性和NK細(xì)胞非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)。研究證實(shí)CIK細(xì)胞殺瘤活性顯著高于淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(lymphokine activated killer cells，LAK)細(xì)胞［1～4］。CIK 細(xì)胞已經(jīng)應(yīng)用于多種實(shí)體腫瘤和白血病、淋巴瘤等血液系統(tǒng)腫瘤的治療，是目前抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療最有效的方案［3］。本文對(duì)CIK細(xì)胞在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的應(yīng)用做一綜述。

1 CIK細(xì)胞的培養(yǎng)

Schmidt-Wolf等［1］將人外周血單個(gè)核細(xì)胞在第0天加入IFN-γ500 U/ml，置37 ℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)24 h后加入IL-2 300 U/ml、抗CD3單克隆抗體10 ng/ml、IL-1 100 U/ml，并每3 天加入 IL-2 繼續(xù)培養(yǎng)，最終得到CIK細(xì)胞。該研究還證實(shí)單獨(dú)加入IL-2培養(yǎng)在第15天時(shí)細(xì)胞數(shù)增長(zhǎng)19倍，加入IL-2和抗CD3單克隆抗體培養(yǎng)在第15天時(shí)細(xì)胞數(shù)增長(zhǎng)754倍?，F(xiàn)在大多數(shù)CIK細(xì)胞的體外培養(yǎng)參照此方法，培養(yǎng)10天后細(xì)胞可以表現(xiàn)出殺瘤活性［6］，15～20天達(dá)到高峰，因此臨床使用的CIK細(xì)胞應(yīng)該在培養(yǎng)后的第10～20天內(nèi)收獲［7］。實(shí)驗(yàn)研究表明，外周血、骨髓及臍血均可以制備出CIK細(xì)胞。王家祥等［8］發(fā)現(xiàn)，臍血來(lái)源的CIK細(xì)胞體外擴(kuò)增快，對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用顯著優(yōu)于外周血CIK細(xì)胞。

2 CIK細(xì)胞的作用機(jī)制

2.1 直接殺傷腫瘤細(xì)胞 CIK是與靶細(xì)胞的結(jié)合，是MHC非限制性的。當(dāng)CIK細(xì)胞在受到刺激時(shí)會(huì)釋放有毒性的胞漿顆粒到細(xì)胞外間隔，而這些胞漿顆粒內(nèi)容物對(duì)靶細(xì)胞有直接殺傷作用。

2.2 間接抑瘤殺瘤作用 CIK經(jīng)培養(yǎng)后能夠分泌多種細(xì)胞因子［9］，如 IL-2、IFN-γ、TNF 等，這些細(xì)胞因子不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞具有直接的抑制作用，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)間接的殺傷腫瘤細(xì)胞。

2.3 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 Verneris等［10］曾研究CIK細(xì)胞對(duì)Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性，認(rèn)為CIK細(xì)胞可以誘導(dǎo)Fas陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞凋亡，它能活化腫瘤細(xì)胞凋亡基因，使 cFLIP、Bcl-2、Bcl-xL、DAD1和survivin基因表達(dá)上調(diào)，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

2.4 促進(jìn)T細(xì)胞增殖活化 任歡等［11］認(rèn)為，CIK細(xì)胞較強(qiáng)的體內(nèi)抗瘤活性可能與宿主體內(nèi)T細(xì)胞活化有關(guān)，而對(duì)于提高宿主NK細(xì)胞毒活性作用不明顯。

3 CIK細(xì)胞治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤

CIK細(xì)胞因其增殖活性高、殺瘤活性強(qiáng)、殺瘤譜廣、對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感［12］、殺瘤活性不受環(huán)孢素等免疫抑制劑的影響［13］和對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)，已被應(yīng)用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤的臨床治療，并取得了一定的療效。

3.1 CIK細(xì)胞在急性白血病(acute leukem ia，AL)中的應(yīng)用 Linn等［14］利用急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者初診時(shí)的外周血單個(gè)核細(xì)胞擴(kuò)增出CIK細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞可以殺死人類(lèi)NK細(xì)胞的靶細(xì)胞K562，并觀察到這些細(xì)胞可以溶解自體急性單核細(xì)胞白血病(M5)靶細(xì)胞，產(chǎn)生抗異體白血病細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。國(guó)內(nèi)童春容等［15］研究認(rèn)為CIK治療急性白血病患者具有較好療效。研究顯示，37例急性白血病患者在接受了58療程CIK細(xì)胞治療后，中位持續(xù)完全緩解(continuous complete remission，CCR)期為26月，3例脾大的患者有2例脾臟縮小，8例患者骨髓殘留的常染色體和/或基因標(biāo)志消失?；輩呛龋?6］研究表明，CIK與急性髓系白血病細(xì)胞混合殺傷后，G0期細(xì)胞減少，CIK細(xì)胞對(duì) G0期CD34+白血病細(xì)胞有明顯的殺傷作用。而且這種殺傷作用具有選擇性，不損傷正常造血干細(xì)胞，為臨床應(yīng)用自體CIK細(xì)胞清除患者體內(nèi)殘留的G0期白血病細(xì)胞提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。該作者也證實(shí)CIK細(xì)胞對(duì)慢性粒系白血病細(xì)胞也有同樣的作用［17］。張樂(lè)萍等［18］臨床應(yīng)用CIK與IL-2聯(lián)合治療兒童ALL。選擇28例化療12個(gè)月后微小殘留病灶(minimal residual disease，MRD)仍陽(yáng)性的兒童ALL患者，14例為治療組，另外14例為對(duì)照組。14例患者應(yīng)用CIK細(xì)胞/IL-2治療隨訪5～33個(gè)月均無(wú)復(fù)發(fā)，生存時(shí)間超過(guò)30～54個(gè)月，且骨髓形態(tài)學(xué)和MRD檢測(cè)均為陰性，1例脾大者也于治療后回縮。對(duì)照組8例復(fù)發(fā)，6例MRD轉(zhuǎn)陰，兩組復(fù)發(fā)率比較有顯著性差異。該研究認(rèn)為CIK/IL-2治療具有清除MRD、減少兒童ALL復(fù)發(fā)的作用。Cai等［19］對(duì)5例B-CLL的老年患者使用了含胸腺肽增強(qiáng)免疫的自體CIK細(xì)胞輸注聯(lián)合小劑量IL-2方案治療，也取得了較好療效，為老年B型淋巴細(xì)胞性白血病(B-CLL)患者提供了一種新的生物治療方法。該臨床研究同時(shí)證實(shí)，在胸腺肽α1增強(qiáng)免疫治療后，老年B-CLL患者體外誘導(dǎo)CIK細(xì)胞在擴(kuò)增數(shù)量、效應(yīng)細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、比例及體外殺瘤活性均明顯高于胸腺肽α1治療前。證實(shí)以胸腺肽為基礎(chǔ)的增強(qiáng)免疫治療有助于CIK細(xì)胞療效的發(fā)揮。

3.2 CIK細(xì)胞在淋巴瘤(lym phoma)中的應(yīng)用Schmidt-Wolf等［20］采用編碼 IL-2基因的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染自體CIK細(xì)胞對(duì)包括2例淋巴瘤患者在內(nèi)的10例腫瘤持續(xù)進(jìn)展的患者進(jìn)行治療，結(jié)果提示有6名患者腫瘤未再進(jìn)展，3例無(wú)明顯療效，1例淋巴瘤患者療效較好。本研究是將CIK細(xì)胞應(yīng)用于臨床的第一次報(bào)道，證實(shí)了CIK細(xì)胞的輸注對(duì)人體未產(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)，并有希望成為臨床腫瘤治療的新的方法。郭智等［21］研究證實(shí)CIK細(xì)胞對(duì)難治性淋巴瘤也有較好的臨床療效。楊波等［22］對(duì)9例老年B細(xì)胞性惡性淋巴瘤患者行自體CIK細(xì)胞聯(lián)合IL-2治療，結(jié)果表明CIK細(xì)胞治療后CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細(xì)胞比例明顯升高(P＜0.05)，β2微球蛋白、LDH水平顯著下降(P＜0.05)。所有患者癥狀改善，生活質(zhì)量顯著提高(P＜0.01)。7例接受8個(gè)周期的CIK細(xì)胞輸注的患者和2例接受4個(gè)周期的輸注的患者均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。該研究證實(shí)自體CIK細(xì)胞聯(lián)合IL-2治療老年人B細(xì)胞性惡性淋巴瘤安全有效，這為老年淋巴瘤化療以外的細(xì)胞治療提供了一個(gè)新的選擇。楊洋等［23］在自體CIK細(xì)胞聯(lián)合IL-2的基礎(chǔ)上加用了胸腺五肽的治療方案，對(duì)高齡的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者同樣取得了較好療效。國(guó)外學(xué)者證實(shí)加入抗CD20單抗培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可增強(qiáng)對(duì)B細(xì)胞性淋巴瘤的治療活性［24］。

3.3 CIK細(xì)胞在骨髓增生異常綜合征(myelodysp lastic syndromes，MDS)中的應(yīng)用 劉洋等［25］取6例老年MDS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，在體外經(jīng)細(xì)胞刺激因子培養(yǎng)，誘導(dǎo)成CIK細(xì)胞，回輸至患者體內(nèi)，結(jié)果經(jīng)CIK細(xì)胞治療后8～10天檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群變化表明 CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細(xì)胞比例明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所有患者未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。該研究認(rèn)為CIK細(xì)胞治療不能改變MDS向高危亞型轉(zhuǎn)化的自然病程，但有效地減少了MDS患者感染的發(fā)生，穩(wěn)定血紅蛋白水平，減少紅細(xì)胞的輸注量。

3.4 CIK細(xì)胞在多發(fā)性骨髓瘤(m ultip le m yeloma，MM)中的應(yīng)用 石永進(jìn)等［26］應(yīng)用CIK細(xì)胞對(duì)2例緩解的MM患者進(jìn)行治療取得較好療效，隨訪22～26個(gè)月，2例患者均持續(xù)緩解，未見(jiàn)復(fù)發(fā)。Jie等［27］對(duì)1例伴有肺癌和副腫瘤性皮膚病的MM患者進(jìn)行了自體CIK細(xì)胞輸注，治療后MM和肺癌保持穩(wěn)定，沒(méi)有進(jìn)展或復(fù)發(fā)，副腫瘤性皮膚病明顯改善。

3.5 CIK細(xì)胞在造血干細(xì)胞移植(HSCT)后的應(yīng)用 國(guó)外一項(xiàng)關(guān)于給予HSCT后復(fù)發(fā)患者給予供者CIK的Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，11例患者中有3例完全緩解，1例達(dá)到血液學(xué)緩解，1例病情穩(wěn)定，證實(shí)異體CIK細(xì)胞具有安全、良好耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，有望成為未來(lái)臨床研究的重點(diǎn)［28］。國(guó)內(nèi)學(xué)者［29］對(duì)9例未緩解的復(fù)發(fā)難治性的血液腫瘤患者進(jìn)行異基因HSCT，在移植后序貫輸注供者CIK細(xì)胞取得較好療效。涂三芳等［30］對(duì)2例無(wú)合適供者的高危急性髓細(xì)胞白血病患者在化療緩解后進(jìn)行自體HSCT聯(lián)合異體CIK細(xì)胞及IL-2治療，2例患者持續(xù)緩解時(shí)間分別為20個(gè)月及2年，并仍無(wú)復(fù)發(fā)。該研究首次得出對(duì)于無(wú)合適供者的高危急性髓系白血病患者行自體HSCT聯(lián)合異體CIK細(xì)胞及IL-2治療，有機(jī)會(huì)獲得長(zhǎng)期無(wú)病生存。

國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道CIK細(xì)胞治療過(guò)程中的不良反應(yīng)少，主要為輕到中等程度的發(fā)熱，少數(shù)有乏力、肌肉酸痛等不適，可對(duì)癥處理后好轉(zhuǎn)。這可能與回輸CIK細(xì)胞在體內(nèi)分泌多種抗腫瘤效應(yīng)的細(xì)胞因子有關(guān)［31］。

4 展望

國(guó)內(nèi)外臨床研究證實(shí)CIK細(xì)胞在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療方面有較好的臨床療效。此外，建立CIK細(xì)胞過(guò)繼免疫治療的統(tǒng)一方案、最佳培養(yǎng)途徑、應(yīng)用劑量及回輸途徑等方面尚待繼續(xù)深入探討，以達(dá)成規(guī)范。有文獻(xiàn)認(rèn)為樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)的 DC-CIK 細(xì)胞具有更強(qiáng)的溶瘤性［32，33］，為血液系統(tǒng)惡性腫瘤的細(xì)胞免疫治療提供了更廣闊的前景。

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