血清DcR3濃度水平與胃癌的相關(guān)性研究

林尤恩 劉祖宏 徐國(guó)棟 袁陽(yáng)春 羅育青 林東洋 鐘碧華

（揭陽(yáng)市人民醫(yī)院腫瘤科 廣東 揭陽(yáng) 522000）

胃癌在我國(guó)的發(fā)病率和死亡率居各種惡性腫瘤的首位，組織結(jié)構(gòu)、病理分型和生物學(xué)行為較為復(fù)雜，且胃癌的早期診斷缺乏靈敏性和特異性較高的腫瘤標(biāo)記物，就診時(shí)75%病人已為播散性疾病。誘騙受體3（decoy receptor 3，DcR3），即 TR6或M68，是一種無(wú)明顯跨膜序列的分泌型蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族的成員。在人體許多惡性腫瘤均出現(xiàn)過(guò)度表達(dá)，而在正常組織表達(dá)較少或不表達(dá)。本研究通過(guò)對(duì)胃癌患者及正常人血清DcR3濃度水平進(jìn)行比較，并分析DcR3與胃癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討DcR3在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。

1 資料及方法

1.1 一般資料：選擇2009年1月至2010年12月我院收治的28例胃癌患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均為首次活組織病檢并經(jīng)兩名病理師獨(dú)立判斷一致確診為胃癌，近期無(wú)發(fā)熱，均未接受放療、化療及生物治療等，排除手術(shù)禁忌后接受手術(shù)治療。其中，男性17例，女性11例，年齡26-74歲，平均（51.34±6.4）歲?！?0歲18例，＜60歲10例。腫瘤最大經(jīng)線≥5cm者15例，＜5cm者13例。胃癌分類(lèi)：低分化腺癌5例，印戒細(xì)胞癌3例，黏液腺癌11例定義為低分化組，管狀腺癌9例定義為高分化組。存在淋巴結(jié)局部轉(zhuǎn)移者11例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例。按照2002年美國(guó)腫瘤聯(lián)合會(huì)（AJCC）制定的TNM分期法［1］：I期4例，II期11例，III期10例，IV期3例。選擇同期28例正常健康體檢人群作為對(duì)照組，其中，男性16例，女性12例，年齡25-73歲，平均（50.74±7.1）歲。兩組在年齡、性別等一般資料上對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具可比性。

1.2 方法：檢測(cè)兩組人群的血清DcR3。檢測(cè)的方法：28例胃癌患者均于入院后的次日，采集5ml空腹外周靜脈血，放于室溫中，靜置取上層血清，于凍存管分裝后放于-80℃低溫冰箱冷凍備用。酶聯(lián)免疫法的操作步驟嚴(yán)格按Human DcR3ELISA試劑盒（購(gòu)自上海研鑫生物科技有限公司）的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。按說(shuō)明書(shū)中所示比例配制試劑稀釋液、洗滌緩沖液等，并在操作過(guò)程適當(dāng)調(diào)整。按順序?qū)⑾♂尯玫难鍢颖炯案鳚舛鹊臉?biāo)準(zhǔn)蛋白分別加入96孔板對(duì)應(yīng)孔中，滴入相應(yīng)的生物素-結(jié)合物，放置室溫孵育2h，洗板后將抗生物素蛋白鏈菌素-辣根過(guò)氧化物酶滴入，放置室溫孵育1h，再次洗板后加入四甲基聯(lián)苯胺，放置于室溫避光10～20min后，滴入終止液，設(shè)定波長(zhǎng)為450nm和630nm，以酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值，根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出各孔樣本濃度值，乘以樣本的稀釋倍數(shù)，測(cè)定出血清DcR3水平［2］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清DcR3在胃癌患者中及正常人群中的表達(dá)：胃癌患者血清 DcR3［（179.34±69.35）pg／ml］的水平明顯高于正常人［（108.56±76.78）pg／ml］，兩組對(duì)比差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 血清DcR3與胃癌的腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移情況和TNM分期等因素的相關(guān)性。

DcR3的表達(dá)與胃癌患者的分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)（P＜0.05），與腫瘤大小及年齡不相關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 胃癌中DcR3的表達(dá)與各項(xiàng)病理因素間的關(guān)系

3 討論

目前，胃癌的根治性切除手術(shù)是一種重要的能夠達(dá)到胃癌治愈目的方法，為保證殘段根治性切除手術(shù)的成功及胃癌術(shù)后的預(yù)后，關(guān)鍵是足夠范圍的胃癌淋巴結(jié)清掃，此外，根治性切除手術(shù)的成功與否還取決于對(duì)淋巴結(jié)以及臨近臟器的轉(zhuǎn)移作出較為準(zhǔn)確的判斷?，F(xiàn)臨床上術(shù)前主要依靠X線鋇餐、CT、腹部超聲等影像學(xué)檢查以及纖維胃鏡等檢查方式判斷腫瘤的浸潤(rùn)深度、臨近臟器和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，但其準(zhǔn)確率并不高，很多只能通過(guò)術(shù)后病理學(xué)檢查驗(yàn)證。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，DcR3mRNA在胃癌組織中高表達(dá)，出現(xiàn)此種現(xiàn)象可能由于DcR3作為一種可以和Fas等配體特異性結(jié)合的誘捕受體蛋白分子，能競(jìng)爭(zhēng)性地抑制死亡受體與配體的結(jié)合，使腫瘤逃避免疫細(xì)胞毒攻擊，從而阻斷了配體誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞凋亡，這一機(jī)制可能是胃癌產(chǎn)生和發(fā)展的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。

因此，通過(guò)對(duì)DcR3的研究逐漸深入，除了通過(guò)檢測(cè)血清DcR3有助于胃癌的診斷和分析外，隨著針對(duì)DcR3的藥物的問(wèn)世，也會(huì)進(jìn)一步推動(dòng)胃癌治療和預(yù)防的發(fā)展。

［1］楊梅松竹，廖芝玲，陳罡，等.血清DeR3水平與胃癌TNM分期的關(guān)系［J］.中國(guó)癌癥防治雜志，2009；1（1）：24-6

［2］趙毅，鄧鑫，馬瑀，等.PTEN、Fas／FasL和 DCR3在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009；17（6）：1124-9